Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Система быстрой аппликации веществ
Быстрые концентрационные изменения концентрации агониста на внешней стороне пейча производились с помощью так называемой “пипетки быстрой аппликации” (Colquhoun et al. 1992). Эта пипетка изготавливалась из Θ-капилляров, содержащих внутреннюю перегородку. Внешний диаметр был 1,5 мм; толщина стенок
Рис. 2.6 Схема регистрации токов с outside-out пейча с использованием системы быстрой аппликации а, Экспериментальная последовательность получения токов с outside-out пейча при быстрой аппликации агониста (1 мс). Сначала клетка идентифицировалась по морфологическим признакам, и пейч-кламповский электрод позиционировался над ней (а1). Затем между электродом и клеткой образовывался контакт с высоким сопротивлением (гигасил), после чего мембрана под электродом прорывалась – whole cell mode (а2). После этого электрод отрывался от клетки с участком мембраны, который образовывал outside-out пейч. Этот пейч устанавливался в поток раствора (контрольного/отмывающего), исходящий их одной камеры двухкамерной пипетки (а3). В другой камере находился раствор агониста (ГАМК, 1 мМ). Эта пипетка была смонтирована на двух пьезокристаллах, меняющих изгиб в зависимости от подаваемого на них тока. При подаче короткого импульса пипетка смещалась, направляя раствор агониста на пейч, затем возвращалась обратно. б, Фотография двухкамерной пипетки с размещенном в потоке раствора электродом с outside-out пейчем под микроскопом (калибровка – 40 мс). Для дополнительного контроля всех стадий приготовления outside-out пейча использовался мониторинг тока, регистрируемого в режиме фиксации потенциала в ответ на 20 мс сдвиг потенциала на -5 мВ. Стадиям а1, а2 и а3 соответствуют изменения формы тока в1, в2 и в3. 0,2 мм; внутренней перегородки 0,15 мм. Пипетки вытягивались на программируемом вытягивающем устройстве фирмы Sutter Instruments (USA) модель P-87. Диаметр кончика был 230-250 μм. С обратной стороны в отсеки капилляра вводились тонкие нейлоновые трубочки, которые присоединялись к гравитационной системе подачи растворов. Пипетка приклеивалась к пластинке, состоящей из двух пьезокристаллов, которые при подачи на них электрического тока изгибались. Таким образом, достигалась возможность смещать кончик пипетки в пространстве очень быстро и на различные интервалы времени. В один отсек пипетки подавался контрольный раствор, в другой раствор агониста (Рис. 2.6).
Outside-out пейч, полученный с нейрона, вводился в контрольный раствор рядом с границей раствора, содержащего агонист. Пьезокристалл, перемещающий двухканальную пипетку, присоединялся к стандартному электрическому стимулятору. При этом величина стимула соответствовала амплитуде смещения границы растворов, а длительность стимула – длительности смещения. Первый параметр не имел значения для формы или величины тока. Ток в пейче определялся концентрацией агониста, длительностью аппликации (1 мс), числом и свойствами каналов и рецепторов. Растворы Для быстрой аппликации использовались растворы, отличные от нормального раствора Рингера. Это было связано с тем, что они не карбогенизировались (чтобы избежать образования пузырьков) и формулировались для стабилизации пейча. Контрольный раствор на основе HEPES содержал (в мМ): NaCl (140), CaCl2 (2), KCl (1.5), MgCl2 (1), HEPES (10) (pH доводилась до 7.2, осмолярность до 295 мОсм). Раствор агониста (ГАМК 1 мМ) делался на основе контрольного раствора в который, кроме ГАМК добавлялось дополнительно 10 мМ NaCl (pH доводилась до 7.2, осмолярность до 295 мОсм). Из-за разницы ионных концентраций при аппликации раствора агониста на открытый кончик электрода в нем возникал ток. Рост и затухание этого тока, определялись скоростью обмена растворов на кончике электрода. Это использовалось для рассчета 10-90 % времени обмена между контрольным и раствором агониста на пейче. Время обмена измерялось в конце каждого эксперимента, после того как разрывался пейч. Оно составляло в среднем 0,2 мс, что является удовлетворительным для использованной длительности аппликации (1 мс). Токи, регистрируемые с outside-out пейчей, полученных с интернейронов и пирамидных клеток, использовались для сравнительного анализа биофизических свойств ГАМКергических рецепторов.
|
|||||
Последнее изменение этой страницы: 2019-04-27; просмотров: 135; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 18.116.51.117 (0.003 с.) |