Норма вмісту загального білка в сироватці крові здорової людини коливається в межах: 65 – 85 г/л.

Лабораторна робота № 2

Рефрактометричний метод визначення

Загального білка в сироватці крові

 

Мета: Визначити кількість загального білка в дослід­жуваній сироватці крові рефрактометричним методом і зробити клініко-діагностичний висновок (стор. 43).

Теоретична частина: В біологічних рідинах і, зокрема, у сироватці крові розмір рефракції в першу чергу залежить від вмісту білків. Практично коефіцієнт заломлення сироватки досить точно свідчить про кількісний вміст в ній білка.

Прилади та матеріали:

Рефрактометр, піпетки, досліджувана сироватка крові.

Хід визначення

1. Готують рефрактометр до роботи відповідно розділу 2.3.

2. Для визначення загального білка сироватки крові 1–2 краплі її наносять на вимірювальну призму приладу. При добре освітленому полі зору та відсутності аберації встановлюють контрастність межі світлотіні і виконують відлік по лівій шкалі. За значенням показника заломлення вста­новлюють відсотковий вміст загального білка за таблицею Рейса (таблиця 3).

Приклад розрахунку

Показник заломлення досліджуваної сироватки дорівнює 1,34947. У графі «Білок» приведеної таблиці значенню 1,34947 відповідає цифра 7,85. Отже, у досліджуваній сироватці крові налічується 7,85 % білка.

 

 

Таблиця 3

Перерахунок показань рефрактометра на показник

заломлення і відсоток білка (за Рейсом)

Показник заломлення	Білок, %	Показник заломлення	Білок, %	Показник заломлення	Білок, %
1,34483	5,03	1,34697	6,394	1,34908	7,606
1,34488	5,070	1,34702	6,420	1,34913	7,630
1,34493	5,110	1,34707	6,443	1,34918	7,661
1,34498	5,150	1,34712	6,472	1,34923	7,693
1,34503	5,190	1,34716	6,499	1,34928	7,724
1,34508	5,230	1,34721	6,526	1,34932	7,756
1,34512	5,270	1,34726	6,550	1,34937	7,786
1,34517	5,310	1,34732	6,581	1,34942	7,818
1,34522	5,350	1,34736	6,613	1,34947	7,850
1,34527	5,390	1,34740	6,644	1,34952	7,876
1,34532	5,430	1,34745	6,676	1,34956	7,903
1,34537	5,470	1,34750	6,707	1,34961	7,929
1,34542	5,496	1,34755	6,770	1,34966	7,955
1,34547	5,523	1,34760	6,793	1,34971	7,981
1,34552	5,549	1,34764	6,796	1,34976	8,009
1,34557	5,575	1,34769	6,823	1,34980	8,035
1,34561	5,601	1,34774	6,849	1,34985	8,060
1,34566	5,627	1,34779	6,875	1,34990	8,091
1,34571	5,654	1,34784	6,901	1,34995	8,123
1,34576	5,680	1,34788	6,928	1,35000	8,154
1,34581	5,711	1,34793	6,954	1,35004	8,186
1,34586	5,743	1,34798	6,980	1,35009	8,217
1,34591	5,774	1,34803	7,008	1,35014	8,248
1,34596	5,806	1,34808	7,035	1,35019	8,280
1,34601	5,837	1,34812	7,063	1,35024	8,306
1,34606	5,868	1,34817	7,090	1,35028	8,333
1,34610	5,900	1,34822	7,118	1,35033	8,359
1,34615	5,928	1,34827	7,145	1,35038	8,385
1,34620	5,955	1,34832	7,173	1,35043	8,411
1,34625	5,983	1,34836	7,200	1,35048	8,438
1,34630	6,010	1,34841	7,231	1,35052	8,464
1,34635	6,038	1,34846	7,236	1,35057	8,490
1,34640	6,065	1,34851	7,294	1,35062	8,518
1,34644	6,093	1,34856	7,326	1,35067	8,545
1,34649	6,120	1,34860	7,357	1,35072	8,573
1,34654	6,148	1,34865	7,388	1,35077	8,600
1,34657	6,175	1,34870	7,420	1,35082	8,628
1,34664	6,203	1,34875	7,443	1,35087	8,655
1,34668	6,258	1,34880	7,467	1,35091	8,683
1,34673	6,285	1,34884	7,490	1,35096	8,710
1,34678	6,313	1,34889	7,513	1,35101	8,740
1,34683	6,340	1,34894	7,537	1,35106	8,770
1,34688	6,366	1,34899	7,560	1,35111	8,800
1,34692	6,366	1,34904	7,583	1,35116	8,830
1,35120	8,860	1,35196	9,297	1,35273	9,750
1,35125	8,890	1,35201	9,324	1,35278	9,780
1,35130	8,920	1,35206	9,350	1,35283	9,807
1,35135	8,948	1,35211	9,378	1,35297	9,885
1,35139	8,975	1,35216	9,405	1,35307	9,938
1,35144	9,003	1,35220	9,433	1,35312	9,964
1,35149	9,030	1,35225	9,460	1,35312	9,964
1,35153	9,058	1,35230	9,490	1,35316	9,990
1,35158	9,085	1,35235	9,515	1,35321	10,020
1,35163	9,113	1,35240	9,543	1,35326	10,050
1,35168	9,140	1,35244	9,570	1,35331	10,080
1,35172	9,166	1,35249	9,600	1,35336	10,110
1,35177	9,193	1,35254	9,630	1,35340	10,140
1,35182	9,219	1,35259	9,660	1,35345	10,170
1,35187	9,245	1,35264	9,690
1,35192	9,271	1,35268	9,720

Нормальний вміст загального білка в сироватці крові здорової людини коливається в межах 6,5 – 8,5 %.

Лабораторна робота № 3

Визначення загального білка в сечі.

Проба Гелера

Мета: Опанувати метод визначення білка в сечі по його спроможності до коагуляції під дією сильних кислот та зробити клініко-діагностичний висновок (стор. 43).

Теоретична частина

Коагуляція це збільшення розмірів колоїдних часток. Найчастіше всього явище коагуляції зустрічається при де­натурації білка від впливу солей важких металів і деяких органічних і неорганічних кислот (трихлорацетатної, суль­фосаліцилової, нітратної та ін.).

Прилади та матеріали: технохімічні ваги, секундомір, штатив з пробірками, градуйовані піпетки, розчин з масовою часткою нітратної кислоти 50 %, реактив Ларіонової, досліджувана сеча.

Готування реактиву Ларіонової. 20 – 30 г кристалічно­го натрій хлориду розчиняють у 100 мл дистильованої во­ди при підігріванні, дають відстоятись до охолодження. Надосадочнурідину зливають, фільтрують. Для приготування 10 мл реактиву до 9,9 мл фільтрату натрій хлориду додають 0,1 мл концентрованої нітратної кислоти.

Хід визначення

У пробірку наливають 1 – 2 мл реактиву Ларіонової. Піпеткою обережно по стінці пробірки нашаровують сечу, намагаючись не збовтувати рідину, вмикають секундомір. Відзначають час появи на межі поділу двох рідин каламутно-білого кільця.

Кільця, які з'являються вище межі нашарування, утворюються за рахунок випадання солей. Ці кільця зникають при обережному нагріванні.

Норма: Поява тонкого білого кільця на межі поділу середовищ через 2 – 3 хвилини вказує на наявність білка в досліджуваній сечі в кількості 0,033 г/л (0,0033 %).

Якщо кільце з'явилось раніше 2-х хвилин після нашарування, сечу варто розвести дистильованою водою і зробити повторний вимір. При цьому підбирають розведення сечі таким чином, щоб при нашаруванні кільце утворювалось між 2 та 3 хвилинами. Ступінь розведення підбирають у залежності від виду кільця, тобто його ширини, компакт­ності і часу прояву. При ниткоподібному кільці сечу розводять в 2 рази, при широкому – в 4 рази, при компактному – в 8 разів. Кількість білка обчислюють шляхом множення величини 0,033 г/л на ступінь розведення.

Примітки. Проба з реактивом Ларіонової має ряд переваг: 1) на межі нашарування не буває пігментних кілець, які утворюються при нашаруванні сечі на нітратну кислоту і заважають розпізнаванню білкового кільця; 2) утворюються кільця більш чіткі, ніж з нітратною кислотою; 3) економиться нітратна кислота; 4) реактив більш безпечний.