Исследование мёда на остаточные количества антибиотиков

Исследования мёда на остаточные количества антибиоти­ков и обнаружение в нем возбудителей гнильцовых болезней проводят ветеринарные лаборатории, когда в ветеринарно-санитарном паспорте пасеки указано о неблагополучии ее по заразным болезням, обработке пчел антибиотиками и в слу­чаях отравления пчел.

Исследования также необходимы при проверке кормовых запасов пчелиных семей, идущих в зимовку.

В основе определения антибиотиков (стрептомицина, хлор, тетрациклина, неомицина и эритромицина) лежит принцип диффузии в агар. Отличие в их определении состоит в ис­пользовании различных тест-культур, сред и буфера.

Для определения стрептомицина необходимы: споры куль­туры Вас. subtilis штамм 6633, среда (раствор панкреатичес­кого гидролизата мяса—перевар Хоттингера, содержащий 33 мг% аминного азота, двузамещенный фосфат натрия 2—3 г, arap-airap—20 г, рН 7,8—8,0) и буферный раствор (1/15 М фосфатный буфер с рН 7,8—8,0, состоящий лз 11,612г, Na₂HPO₄ и 9,073 г NaH₂PO₄). Для приготовления бу­ферного раствора можно использовать соли калия. Каждую навеску соли отдельно растворяют в 100 мл дистиллирован­ной воды в мерной колбе, а затем смешивают в соотношении: 9,5 части двузамещенного фосфата натрия и 0,5 части однозамещенного фосфата натрия.

Для определения хлортетрациклина необходимы: споры культуры Вас. subtilis штамм L₂ среда (раствор панкреати­ческого гидролизата мяса—перевар Хоттингера, содержащий 100 мг % аминного азота, агар-агар—20 г, рН среды 6,1 — 6,2) и буферный раствор (цитратно-солянокислый Na, рН 5,0— 5,2). Для приготовления буфера навеску лимоннокислого трех, замещенного натрия 8,6 г растворяют в 400—500 мл дистилли­рованной воды. В этот же раствор добавляют 5,6 мл соляной кислоты (удельный вес 1,18—1,19) и добавляют дистиллиро­ванной воды до 1000 мл. Все перемешивают и проверяют рН.

Для определения неомицина необходимы: споры культуры Вас. mycoides штамм 537; среда (раствор панкреатического гидролизата мяса, содержащий 33 мт % аминного азота, рН среды 7,8—8,0) и фосфатый буфер 7,8—8,0.

Для определения эритромицина необходимы: споры куль­туры Вас. mycoi'des штамм НВ; среда (раствор панкреати­ческого гидролизата мяса, содержащий 33 мг % аминного азота, рН 7,8—8,0).

Стерильные чашки Петри диаметром 90—100 мм с ров­ным плоским дном устанавливают на столе по уровню. В рас­плавленную затем охлажденную до 45—48°С среду вносят взвесь спор той культуры, на какой антибиотик исследуют мёд, из расчета 20—30 млн. микробных тел на 1 мл среды. Среду со взвесью спор разливают по 10 мл в каждую чашку. После застывания агара на его поверхности на расстоянии около 28 мм от центра чашки вырезают 6 луночек тонкослойной стерильной трубкой с внешним диаметром 10 мм (для этой цели можно использовать трубку для пробочников №4).

Затем от исследуемой пробы в три пробирки берут по 1 г мёда. В зависимости от того, какой антибиотик определяют, испытуемую пробу разводят соответствующим буфером в соотношении 1:5 и прогревают на водяной бане при 60°С в течение 10 мин для устранения антибактериальных свойств мёда. После остывания содержимое пробирок вносят по 0,1 мл в две луночки от каждой навески (для исследования од­ной пробы используют одну чашку). Чашки переносят в тер­мостат, где выдерживают 18—20 час при 37°С. По истечении указанного времени чашки просматривают. Наличие зоны угнетения вокруг луночек указывает на присутствие в мёде антибиотика. Такой мёд не допускается в продажу, он может быть использован в кондитерской промышленности, где при­меняют температурные режимы от 60 до 100°С в течение 1,5 ч.

Приготовление тест-культур

Ампулу с высушенным штаммом вскрывают и в нее сте­рильно добавляют 0,5 мл дистиллированной воды. После полного растворения содержимое переносят пастеровской пипеткой в чашки Петри с 20%-ным мясо-пептонным агаром с рН 7,8—8,0 и 18—20 ч выращивают в термостате при температу­ре 37°С. Отбирают колонии с характерными признаками для необходимой культуры, высевают на скошенный в.пробирках 2%-ный мясо-пептонный агар и инкубируют 18—20 ч. Выра­щенную культуру смывают с поверхности агара и высевают в матрицы со средой, состоящей из 2,5% агара, приготовлен­ного на бульоне Хоттингера, содержащего 33 мг % аминного азота. Споры выращивают 10—12 суток при температуре 37°С. После обнаружения в мазках в поле зрения микроско­па 90—95% опор проводят смыв дистиллированной водой. Взвесь спор прогревают при температуре 65--70°С в течение 30 мин и центрифугируют. Отмывание спор с последующим прогреванием 'проводя? не менее 3 раз. Из основной взвеси готовят рабочую по стандарту мутности 10.

Ампулы с высушенным штаммом тест-культур по заявкам поставляет Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов (Москва, Д-22, Звениго­родское шоссе, 5).