Фиксирующие смеси (сложные фиксаторы) и их применение

Жидкость Мюллера. В настоящее время при­менение ее в чистом виде ограничено. Однако она служит исходным раствором для приготовления таких распростра­ненных фиксаторов, как жидкость Ценкера, Орта, Макси­мова и др. Состав:

двухромовокислый калий............... 2,5 г
сернокислый натрий............................................ 1 г

дистиллированная вода.............. 100 мл

Для лучшего растворения бихромата калия рекоменду­ется подогревать воду.

Жидкость Ценкера (сулемовая смесь). Один из лучших фиксаторов для приготовления обзорных препара­тов и препаратов для ряда тонких гистологических исследо­ваний. Обеспечивает хорошую окрашиваемость тканей. Со­став и способ употребления:

жидкость Мюллера................ 100 мл

сулема (НgСL₂)...................................... 5 г

ледяная уксусная кис­лота............. 5 мл

(прибавляется непосредственно перед употреблением; может быть заменена равным количеством формалина по Гелли).

Толщина фиксируемых кусочков не должна превышать 5 мм. Время фиксации 1-24 часа в зависимости от толщины и свойств объекта.

Последующая обработка. После тщательного промывания в проточной воде в течение 20-24 часов (вода должна стать бесцветной) кусочки помещают в 70° йодиро­ванный спирт для удаления из тканей осадков сулемы. С этой целью к 70° спирту прибавляют несколько капель 90° спирта, содержащего в 100 мл 2 г йода и 3 г йодистого калия, до получения раствора Цвета крепкого чая. Отмывание сулемы ведут в нескольких порциях йодированного спирта, меняя его через 18-24 часа до прекращения просветления (растворение осадка сулемы, обесцвечивает спирт).

После фиксации жидкостью Ценкера рекомендуется заливка в целлоидин или целлоидин-парафин, так как заливка в парафин приводит к значительному сжатию и смор­щиванию тканевых структур.

Жидкость Максимова (ценкер-формол). Фактически представляет видоизмененную жидкость Ценкера, где ледяная уксусная кислота заменена формалином. Фиксатор широко применяется для гематологических исследований. Дает хорошее окрашивание клеток крови и позволяет выявлять их специфичную зернистость.

Состав и способ употребления:

Жидкость Мюллера	двухромовокислый калий	2,5г
сернокислый натрий	1г
дистиллированая вода	100мл
	сулема	5г
формалин	10мл

 

Время фиксации 6 часов. Толщина кусочков не больше 5 мм. Дальнейшая обработка и заливка те же, что и после фиксации в жидкости Ценкера.

Если к жидкости Максимова добавить 10 мл 2% раство­ра осмиевой кислоты и увеличить время фиксации до 24 ча­сов, можно одновременно получить осмирование жира.

Фиксация по Навашину-Крылову

Фиксация этим методом дает хорошие результаты при окраске ядер и протоплазматических структур железным гематоксилином. Состав фиксатора Навашина и способ упо­требления:

раствор хромовой кислоты 1%	10 мл
формалин 10%	10 мл
вода дистиллированная	90 мл
ледяная уксусная кислота (добавляется непосредственно перед фиксацией)	2 мл

Кусочки толщиной 5 мм следует фиксировать 4-6 ча­сов, затем тщательно промыть в проточной воде (24-36 часов) для удаления хромовой кислоты, остатки которой ухуд­шают окраску препаратов.

Г. И. Крылов предложил перед промывкой проводить кусочки через несколько порций 5-10% формалина до прекращения желтого окрашивания раствора (формалин извлекает хромовую кислоту из тканей). Эта процедура сокращает сроки промывания в воде.

Жидкость Буэна. Является одним из лучших жид­ких фиксаторов. Относительно быстро проникает в ткани, вызывая незначительное (на 2,5%) их сжатие. Очень хоро­шо окрашивает тканевые структуры. Применяется как для обзорных препаратов, так и для тонких исследований, а так­же для фиксации эмбрионов.

Состав и способ употребления:

насыщенный раствор пикри­новой кислоты 75 мл

формалин................................................... 25 мл

ледяная уксусная кислота................. 5 мл

Сливание перечисленных жидкостей производится непосредственно перед фиксацией. Так как пикриновая кислота плохо растворяется в воде, ее насыщенный раствор необходимо готовить заранее. В сосуд насыпают 25-30 г кристаллической кислоты и заливают 1 л горячей дистиллированной воды. Избыток кислоты при охлаждении выпадает в осадок и может быть использован при приготовлении но­вой порции раствора. Раствор можно хранить неограниченно долго.

Продолжительность фиксации материала 2-24 часа в зависимости от величины объекта. Однако и более длительное (до нескольких суток) пребывание кусочков в фиксаторе не ухудшает качество фиксации и последующей обработки.

После фиксации материал переносят в 70-80° спирт (для удаления пикриновой кислоты), который сменяют 2-3 раза. Заливка в парафин.

Примечание. Объект, фиксированный в жидкости Буэна, не пропитывается полностью целлоидином.

Жидкость Карнуа. Служит хорошим фиксатором, как для гистологических исследований (ядра), так и для многих гистохимических методик (нуклеиновые кислоты, белки, полисахариды). Недостатком является легкое сморщивание цитоплазмы и соединительной ткани.

Состав и метод применения:

абсолютный этиловый спирт............... 60 мл
(при отсутствии можно заменить 96° спиртом)

хлороформ...................................................... 30 мл

ледяная уксусная кислота.......................... 10 мл

Жидкость Карнуа приготавливается перед фиксацией. Кусочки толщиной до 5 мм фиксируют в течение 1-5 часов (в зависимости от толщины объекта). После фиксации кусочки сразу переносят в абсолютный спирт (если фиксатор был приготовлен на 96° спирте, то кусочки следует ополоснуть 2-3 раза в 96° спирте, где в случае необходимости можно оставить на 2-3 часа).

Примечание. Надо следить, чтобы материал находился в фиксаторе не дольше, чем это нужно для полного его пропитывания, так как удлинение фиксации усиливает сжатие и уплотнение объекта.

Жидкость Шаффера – фиксатор, состоящий из 2-х частей 90° или абсолютного спирта и 1 части формалина. Продолжительность фиксации – от 1-2 дней до нескольких суток. Из фиксатора материал сразу же переносят в 90° или абсолютный спирт. Фиксатор Шаффера является универсальным, а при гистохимических исследованиях специально используется для выявления белков.

Жидкость Чаччо составляют смешиванием 80 мл 5% водного раствора бихромата калия, 20 мл формалина и 5 мл ледяной уксусной кислоты. Маленькие кусочки фиксируют в течение 48 часов. Жидкость применяют для фиксации жиров и липоидов.

Жидкость Бэккера приготовляют путем добавления к 80 мл дистиллированной воды 1 г хлористого кадмия, 30 мл 10% раствора хлористого кальция и 10 мл продажного формалина. Кусочки можно фиксировать от 1 до 5 недель. Вслед за этим в некоторых случаях рекомендуется обработать материал в течение 24-48 часов 3% раствором двухромовокислого калия. Вместо хлористого кадмия можно использовать азотнокислый кобальт в той же концентрации. Фиксатор рекомендуется для гистохимического определения липидов.

Фиксатор Лилли составляется из 8 г нитрата свинца, 10 мл продажного формалина, 10 мл воды и 80 мл этилового спирта. При комнатной температуре материал фиксируют 24 часа, при температуре 4°С – 2-3 дня, при температуре 25°С – 10-14 дней. Фиксатор используют при гистохимическом выявлении мукополисахаридов и мукопротеидов.

Промывание, обезвоживание и заливка
гистологического материала

Успешная фиксация исследуемого объекта – лишь первое условие, необходимое для приготовления качественных микропрепаратов. Но для того чтобы добиться получения тонких срезов (в тысячные доли миллиметра), зафиксированный материал необходимо соответствующим образом подготовить, а именно сделать достаточно плотным и в то же время не хрупким. Нужно придать ему такое состояние, чтобы при резке он не крошился и не деформировался, а срезался тонкими ровными слоями. Для этого ткань следует освободить от излишков фиксатора, обезводить, пропитать и залить какой-нибудь уплотняющей средой.

Промывание

Эта процедура преследует цель освобождения исследуе­мого объекта от излишнего количества фиксатора. Способ промывки зависит от методики фиксации. Например, после фиксирующих смесей, содержащих пикриновую кислоту, сулему, трихлоруксусную кислоту, применяют этиловый спирт разной концентрации (см. предыдущий раздел). После фиксации в формалине, в жидкостях, содержащих хром, осмиевую кислоту, обычно употребляют воду. В подавляющем большинстве случаев промывку кусочков тканей производят в проточной водопроводной воде. Наиболее удобно это делать, помещая объект в стеклянные или фарфоровые сита (рис.15), которые закрывают пробкой и опускают в сосуд с проточной водой. Пробка обеспечивает плавучесть, а отверстие – постоянную циркуляцию воды. Если кусочек не прошит ниткой, то этикетку также помещают в сито.

 

 

Рис.15. Промывка материла после фиксации

 

При отсутствии сита кусочек заворачивают в марлю и подвешивают за нитку в сосуд, наполненный водой. Вверх сосуда закрывают марлей и проделывают в ней небольшое отверстие. На водопроводный кран натягивают резиновый шланг или привязывают шнур (полоску бинта), свободный конец которого пропускают через марлю в сосуд и пускают по нему несильную струю воду. Среднее время промывки 20-24 часа.

Обезвоживание

Начиная с этого этапа и до самого конечного момента приготовления гистологического препарата, следует строго придерживаться правила постепенного воздействия применяемых веществ на исследуемые ткани.

Несмотря на то, что большинство фиксаторов в процессе своего действия уплотняют материал, этого уплотнения недо­статочно для изготовления срезов. После промывки кусочки подвергают дальнейшему уплотнению путем обезвоживания в спиртах увеличивающейся концентрации.

Для проведения процедуры приготавливают необходи­мое количество бюксов или стаканчиков с притертыми крышками, этикетируют их и заливают спиртами: 50, 60, 70, 80 и 96° (два стаканчика), 100° (два стаканчика). Такой последовательный ряд сосудов получил название гистологической батареи.

Спирты нужной крепости приготавливают заранее по специальной таблице разведения (табл. 2) из 96° спирта (для того чтобы приготовить 100 мл спирта крепостью 60°, необходимо взять 63 мл 96° спирта и 37 мл дистиллированной воды и т.д.).

Способ приготовления абсолютного спирта. Обычный спирт-ректификат содержит 96% чистого спир­та и 4% воды. Для того чтобы получить абсолютный спирт; необходимо извлечь эту воду. Наиболее распространенным способом является обезвоживание при помощи прокаленного медного купороса (сернокислая медь).

В основе этого метода лежит свойство медного купоро­са отдавать и присоединять молекулы воды, меняя при этом, свой цвет (прокаленная сернокислая медь имеет вид серовато-белого порошка, который по мере присоединения воды приобретает синюю окраску).

Насыпав порошок прокаленного медного купороса (при­мерно 10 г на 100 мл спирта) в чистую стеклянную бутыл­ку с притертой пробкой, наливают туда же 96° спирт. Затем бутылку встряхивают до равномерного распределения по­рошка. Подобную процедуру повторяют на протяжении 1-2 дней. По мере поглощения воды порошок приобретает синюю окраску. Однократная обработка, как правило, не дает обезвоживания, поэтому спирт переливают в другой сосуд, содержащий свежую порцию сернокислой меди. По­добную процедуру повторяют до тех пор, пока осадок не перестанет приобретать голубой цвет. Обезвоженный спирт отфильтровывают в чистую посуду, которую плотно закры­вают. Желательно проверить рН абсолютного спирта, так как после обработки медным купоросом он может стать слегка подкисленным. Для нейтрализации достаточно прибавить небольшое количество карбоната кальция (СаСО₃).

Если в лаборатории нет фабричного порошка безводного медного купороса, то его можно приготовить самим, прока­лив кристаллическую соль над огнем в широкой фарфоро­вой чашке (до тех пор, пока из синих кристаллов не обра­зуется белый порошок). Для равномерного прокаливания необходимо перемешивать купорос стеклянной палочкой. Нельзя допускать почернения (особенно заметного по краям чашки), свидетельствующего о перекаливании. Таким же путем обрабатывают медный купорос, оставшийся после обезвоживания спирта.

Следует помнить, что порошок медного купороса сильно раздражает слизистые оболочки. Прокаливание нуж­но проводить в вытяжном шкафу или же защищать слизи­стые оболочки носа и рта обычной марлевой маской. Испытание абсолютного спирта на содержание воды про­изводят опусканием в него нескольких зерен карбида каль­ция. Появление характерного запаха ацетилена и помутне­ние свидетельствуют о наличии воды. Более грубый спо­соб – прибавление нескольких капель абсолютного спирта к 4-5 мл бензола или ксилола. Помутнение жидкости ука­зывает на то, что спирт содержит около 3% воды.

Если препарат промывали в воде, то обезвоживание на­чинают с 50° спирта, если же в спиртах (после жидкости Ценкера и др.), то объект помещают в спирт последующей крепости (из 70° в 80° и т. п.). При тонких цитологических исследованиях обезвоживание начинают с 10-20° спирта. Время пребывания кусочков в отдельных спиртах опреде­ляется их величиной и свойствами. Объекты средней вели­чины (толщиной 5 мм) достаточно держать в слабых спир­тах (до 60°) по 2-4 часа, а в более крепких от 12 до 24 ча­сов. Мелкие и более тонкие объекты можно проводить соответственно быстрее.

Для того чтобы спирт проникал в ткани равномерно со всех сторон, объект помещают на слой ваты (обычной или стеклянной) или подвешивают в стеклянном сите. При та­ком расположении кусочков спирт, отнимающий воду из тканей и стекающий ко дну, не мешает дальнейшему обез­воживанию.

Следует помнить, что длительное пребывание объекта в спиртах низкой концентрации приводит к ма­церации тканей, в то время как передержка в спиртах вы­сокой концентрации чрезмерно уплотняет их. Поэтому, если необходимо прервать процесс обезвоживания, то матери­ал можно оставить (на несколько дней) в «индифферент­ном» спирте, крепость которого составляет 70-80°.

Необходимо также учитывать, что спирты в процессе обезвоживания довольно быстро загрязняются экстрагируе­мыми из тканей веществами и особенно жирами. Не следует использовать длительное время одни и те же спирты. Не­обходимо своевременно их сменять.

В процессе обезвоживания могут быть ошибки: 1) пере­уплотнение при полном обезвоживании, 2) нормальное уп­лотнение при недостаточном обезвоживании. Оба эти недо­статка являются следствием несоблюдения оптимальных ус­ловий обезвоживания и отрицательно сказываются на дальнейшей обработке материала. Достижение хороших ре­зультатов дается только опытом, поэтому необходимо тща­тельно регистрировать все этапы и внимательно анализи­ровать результаты (особенно при освоении методов).

Перед тем как перенести объект в 96° или абсолютный спирт, следует придать кусочку окончательную форму и размеры (обрезать поврежденные или излишние участки). Для полного обезвоживания следует проводить материал последовательно через две порции абсолютного спирта (по 12-24 часа).

Пропитывание и заливка

Приготовление высококачественных гистологических пре­паратов требует наличия равномерно тонких срезов с ис­следуемого объекта. Для того чтобы их получить, кусочки тканей надо пропитать и залить такой средой, которая пре­вратила бы их в хорошо режущуюся массу.

Следует помнить, что процесс пропитывания и заливки исследуемого материала требует большой тщательности. Незнание основных принципов и несоблюдение необходи­мых условий может привести к тому, что объект окажется непригодным для резки или полученные срезы будут нека­чественными.

Наиболее употребительными для этих целей материала­ми являются парафин, целлоидин и желатин.

Заливка в парафин

Этот метод широко распространен в исследовательских гистологических лабораториях благодаря относительной быстроте заливки (в течение 1-2 дней после обезвожива­ния), возможности приготовления серийных срезов, а также тонких срезов для цитологических исследований (толщина 2-3 мкм), удобству хранения блоков и неокрашенных срезов (практически неограниченное время). К недостаткам мето­да следует отнести значительное сжатие исследуемого материала (до 20%), вызываемое воздействием высокой температуры в процессе пропитывания парафином. Богатые водой, рыхлые ткани мало пригодны к заливке в парафин. Известное неудобство представляет необходимость удале­ния парафина из срезов перед их окраской.

Парафин при комнатной температуре – твердое гомо­генное вещество. Существует несколько сортов парафина: мягкие (точка плавления 45-54°) и твердые (точка плав­ления 58-60°).

В большинстве случаев для заливки применяют парафин с точкой плавления 54-56°. Если резка предполагается при низкой температуре окружающей среды, то лучше приме­нять парафин с более низкой точкой плавления (48-50°). Нужная степень твердости парафина достигается смешива­нием в различных комбинациях мягких и твердых сортов.

Если неизвестна точка плавления парафина, ее можно определить самому. Для этого расплавленный парафин на­сасывают в тонкий стеклянный капилляр и дают ему за­стыть. Затем очищают капилляр снаружи от приставшего парафина и вместе с градусником опускают в химический стаканчик с водой, которую начинают постепенно нагревать, перемешивая стеклянной палочкой. Как только парафин в капилляре начнет расплавляться, отмечают температуру, которая и укажет точку его плавления.

Следует помнить, что обычный продажный пара­фин часто содержит газообразные примеси, которые при заливке образуют пузырьки, придающие парафину повы­шенную ломкость и значительно ухудшающие качество рез­ки материала. Для избавления от этих примесей свежий па­рафин следует на длительное время оставить в расплавлен­ном виде в плоских чашках (чтобы увеличить площадь для выделения газов) при температуре 70° (для этого можно приспособить сушильный шкаф). Можно также подвергать парафин частому расплавлению и нагреванию (до появле­ния дыма) с последующим быстрым охлаждением.

Если парафин, несмотря на соответствующую подготов­ку, сохраняет жесткость, к нему следует добавить чистый пчелиный воск в количестве от 2 до 5%, что придаст пара­фину большую эластичность.

Заливка в парафин требует тщательного соблюдения двух основных условий: 1) препарат должен быть полностью обезвожен и 2) не должен содер­жать спирт. Первое условие, как мы уже знаем, обеспе­чивается в процессе обезвоживания и уплотнения в батарее спиртов повышающейся концентрации.

Удаление спирта. Для удаления спирта и подготовки к пропитыванию парафином материал обрабатывают одним из растворителей парафина, обладающим способностью вы­теснять спирт. К таким веществам относятся: хлороформ, бензол, толуол, ксилол, сероуглерод и др. Чаще используют хлороформ и бензол. Толуол и ксилол делают кусочки бо­лее твердыми.

Следует помнить, что продажный разливной хло­роформ может быть загрязнен и содержать воду, что несовместимо с требованиями, предъявляемыми к веществам, применяющимся в процессе подготовки объекта к пропиты­ванию. Для освобождения хлороформа от спирта и воды его настаивают длительное время над хлористым кальцием. Хранят хлороформ в темноте, так как на свету он легко раз­лагается.

Методика пропитывания

Обезвоженные и уплотненные кусочки перекладывают из абсолютного спирта в смесь аб­солютного спирта с хлороформом (1:1) на 2-3 часа, а за­тем в чистый хлороформ, где они вначале плавают (высту­пая над его поверхностью), а затем по мере пропитывания постепенно погружаются. В процессе удаления спирта хло­роформ меняют 2-3 раза на протяжении 1,5-3 часов (в зависимости от свойств объекта и толщины кусочков). При величине кусочка 1 × 1 его держат в хлороформе 30 ми­нут. Затем, соблюдая принцип постепенного замещения хло­роформа парафином, помещают объект в смесь из равных частей парафина (желательно мягкого) и хлороформа. Эта смесь, застывающая при комнатной температуре, при на­гревании до 37° расплавляется и приобретает жидкую кон­систенцию. Кусочки находятся в хлороформ-парафине при 37° в течение 3-6 часов (при 56° время сокращают до 30 минут – 1 часа). При необходимости отсрочить дальнейш ую обработку материала можно после погружений объек­та в смесь хлороформа с парафином извлечь сосуд из тер­мостата и оставить при комнатной температуре на ночь (или даже на несколько дней) в закрытом состоянии, а затем, вновь расплавив в термостате при 56°, перенести в рядом стоящий горячий парафин для пропитывания, Излишнее пребывание объекта в растопленном хлороформ-парафине ухудшает качество резания.

В целях полного освобождения объекта от хлороформа кусочки проводят последовательно через 2-3 порции рас­плавленного парафина. Время пребывания в парафине за­висит от величины кусочков и свойств ткани. Кусочки тол­щиной 2-5 мм должны в общей сложности находиться в парафине от 2 до 5 часов.

Если объект хорошо обезвожен и не содержит спирта, задержка в парафине не ухудшает качество объекта даже при пропитывании в течение нескольких дней. При наличии же в кусочках остатков воды и спирта результаты обработ­ки ухудшаются прямо пропорционально длительности из­лишнего пребывания объекта в расплавленном парафине. Парафин для пропитывания можно применять многократ­но, но при этом нужно строго следить за тем, чтобы не пере­путать порции парафина. Для этого бюксы (или стакан­чики) необходимо обозначить соответствующими цифрами (1,2,3).

Заливка

После окончательного пропитывания объекта его заливают расплавленным парафином, специально при­готовленным для этих целей и хранящемся в термостате.

В качестве формочек для заливки используют разнооб­разные приспособления.

Г-образные гладкие угольники (рис. 16, а) из металла (латунь, свинец, сталь). Рекомендуется приме­нять угольники, длинная сторона которых равна 8-10 см, короткая – 3 см, высота – 1,5-2 см. Угольники кладут на отполированную металлическую или стеклянную пластину и, сдвигая углы, создают формочку нужных размеров.

Бумажные коробочки изготовляют из листка плотной бумаги по схеме, представленной на рис. 16, б, где порядок номеров указывает очередность, а линии – направ­ление сгибания листка. Удобство бумажных формочек заключается в возможности значительного варьирова­ния их размеров, простоте маркировки (простым каран­дашом на стенках) и длительном хранении залитого ма­териала.

 

Рис.16. Приспособления для парафиновой заливки

а – г-образные металлические угольники,
б – приготовление формочки из бумаги.

 

Для заливки мелких объектов можно применять часо­вые стекла, четырехугольные фарфоровые ванночки из-под акварельной краски и другие приспо­собления.

Заливка осуществляется следующим образом. Пред­назначенный для заливки парафин подогревают до 58-60° и аккуратно наливают в приготовленную формочку, запол­няя ее до самых краев и избегая образования пузырьков воздуха (хорошо иметь для этих целей высокую фарфоро­вую кружку с ручкой и носиком). Затем подогревают пин­цет или металлический шпатель, быстро переносят подго­товленный к заливке объект в формочку с парафином и ориентируют в необходимом положении. После этого фор­мочку охлаждают водой (10-18°). Если заливку производят с помощью металлических угольников, то формочку по­мещают в плоскую чашку таким образом, чтобы нижняя ее поверхность не соприкасалась с дном сосуда (на стеклян­ные или металлические палочки). Затем осторожно нали­вают воду до верхних краев формы (не заливая поверх­ность) и дают парафину застыть. При заливке в бумажной коробочке последнюю постепенно опускают в сосуд с водой и затем оставляют плавать до полного застывания пара­фина.

В процессе застывания поверхность блока кратер кратерообразно стягивается, что необходимо учитывать при выборе вы­соты формы. Если форма недостаточно высокая или залита не полностью и парафин лишь тонким слоем покрывает объект, то при застывании верхняя часть кусочка будет вы­ступать из блока.

Этикетировка материала должна произво­диться непосредственно перед заливкой, иначе кусочки мо­гут быть легко перепутаны, особенно при заливке несколь­ких объектов в одной форме. Для этого при употреблении бумажных коробочек соответствующие данные наносят про­стым карандашом на стенку формочки. Если же блок дол­жен быть извлечен из формы, то бумажную полоску с обо­значениями вставляют в парафин до его застывания и, ес­ли нужно, делают дополнительные пометки на поверхности застывшего парафина препаровальной иглой или скальпе­лем.

Следует помнить, что: 1) при застывании парафин плотно прилипает к стеклу и отделяется с трудом. Поэтому поверхность стеклянных приспособлений перед заливкой не­обходимо смазывать глицерином; 2) медленный перенос объекта в форму с парафином и употребление недостаточно нагретых инструментов (особенно если в лаборатории про­хладно) приводит к образованию на поверхности кусочков парафиновой пленки, значительно ухудшающей качество за­ливки; 3) применение очень холодной воды (температура ниже 10-8°) приводит к стягиванию блока со всех сторон и деформации, а иногда и к трещинам; 4) медленное засты­вание блоков на воздухе, а также застывание под водой ухудшают качество заливки.

При хорошей заливке блок должен иметь плотную кон­систенцию и однородный вид. Рыхлые молочно-белые вклю­чения свидетельствуют о плохом качестве блока и значи­тельно ухудшают резку материала, а иногда делают ее невозможной, Таким образом, процесс заливки в парафин может быть представлен следующей схемой: промывка после фиксации, обезвоживание в спиртах возрастающей концентрации (в 50 и 60° по 4-6 часов; в 70, 80 и 90° по 8-12 часов и в двух порциях 100° спирта по 12-24 часа), проведение через смесь из Абсолютного спирта и хлороформа (2-3 часа), по­гружение. В чистый хлороформ (две-три смены в течение 1,5 часов), пропитывание в хлороформ-парафине (при 37° 3-6 часов, при 56° 30 минут-1 час), пропитывание в парафине (в трех порциях по 1-1,5 часа), заливка в па­рафин.

В целях уменьшения затраты труда на гистологическую обработку материала и стандартизации условий обработки созданы различные устройства, позволяющие автоматизи­ровать процесс подготовки к резке (фиксация, уплотнение, обезвоживание, заливка) и даже окраску. Принцип их ра­боты основан на автоматическом перемещении пористого качающегося сосуда с обрабатываемым материалом через серию стаканов, содержащих необходимые растворы. При­бор питается от сети переменного тока и снабжен механиз­мом, способным выполнять запрограммированный режим обработки в течение всего цикла и выключение по его окон­чании. Наша промышленность выпускает два типа аппара­та АТ-3 и гистохроматор.

К недостаткам прибора следует отнести невозможность индивидуализации режима обработки кусочков различных по строению органов в случае их одновременной подготовки, невозможность тонкой дифференцировки при окрашивании, большой расход реактивов при работе с малым количеством объектов и др.