Определение титра комплемента микрометодом

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТИТРА КОМПЛЕМЕНТА МИКРОМЕТОДОМ

/ Н. С. Мотавкина, Б. М. Ковалев, А. С. Шаронов, 1989/

Приготовить равные объемы гемолитической системы 2% и 2% расплавленной и остуженной до +45С° агарозы. Смесь залить в камеру, приготовлен­ную из двух фотопластин и прокладки между ними. После застывания геля и осторожного удаления верхней пластины сделать в нем с помощью гель-пробойника луноч­ки. В них внести испытуемые и контрольные сыворотки, содержащие комплемент крови, инкубировать во влажной камере 2 часа при 37º С. Активность комплемента определяют по формуле:

, где

Со – активность элемента в опытной сыворотке,

До - диаметр зоны лизиса вокруг опытной сыворотки,

Дк – диаметр зоны лизиса вокруг контрольной сыворотки,

Ск - активность комплемента в контрольной сыворотке

Приложение 4

а) ОПРЕДЕЛЕНИЕ β - ЛИЗИНОВ МИКРОМЕТОДОМ

/по Н.С. Мотавкиной, Б.М. Ковалеву, А.С. Шаронову,1989

Камера заполняется по вышеприведенному описанию смесью расплавленного и остуженного до +45С° 2% раствора агарозы и тест - культуры Bac. subtilis (сенная палочка) в концентрации 10 тыс. м.т./мл. После застывания в геле делают микролунки, куда вносят исследуемый субстрат и соответствующие контроли. Пластины инкубируют при +37 С° 18-24 часа. Расчет активности бета-лизинов проводят по формуле, описанной для комплемента.

 

б) ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕТА-ЛИЗИНОВ КЛАССИЧЕСКИМ МЕТОДОМ СЕРИЙНЫХ

РАЗВЕДЕНИЙ

Ингредиенты

 

1:10

 

1:20

 

1:40

 

1:80

 

1:160

 

1:320

 

К.к.

 

К.с.

 

МПБ

 

1,8

 

 

 

 

 

 

-

 

-

 

Сыворотка крови больного

 

0,2

 

 

 

 

 

 

 

 Тест-микроб Bac. subtilis 600 млн. мт/ в каплях

2к

 

2к

 

2к

 

2к

 

2к

 

2к

 

2к

 

-

 

Инкубировать при +37 С° 18 часов

Учет результатов по лизису тест - культуры

 

ПОЛНЫЙ ЛИЗИС

 

Нет

лизиса

 

Рост

тест-культуры

Нет роста

 

 

Титр бета-лизинов - 1:160 (максимальное разведение или минимальное количество, дающее лизис) тест – культуры Bac. subtilis (сенная палочка).