Техника определения группы крови при помощи изогемагглютинирующих сывороток

Проведение

СПЕЦИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ

 Изогемагглютинирующие сыворотки групп 0ab(I), Аb(II), Вa(III) и АВо(IV).

Стандартные эритроциты групп 0(I), А(II), В(III) для перекрестной реакции.*

Изотонический 0,9% раствор хлорида натрия.

Определение группы крови производят в помещении с хорошим освещением при температуре +15-250С. На пластине для определения группы крови с левой стороны надписывают: 0ab(анти А+В), в середине - Аb(анти-В) и справа - Вa(анти-А), на верхнем крае – фамилию и инициалы лица, у которого определяют группу крови. Под соответствующим обозначением группы крови на пластину наносят по одной большой капле (0,1 мл) стандартных сывороток соответствующих групп. Всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: 0ab(анти А+В), Аb(анти-В) и Вa(анти-А). Рядом с каждой каплей сыворотки наносят маленькую каплю (0,01 мл) исследуемой крови, соблюдая соотношение 10:1. Смешивают каплю сыворотки с каплей крови индивидуальной чистой палочкой. После размешивания капель пластинку покачивают, затем на 1-2 минуты оставляют в покое и снова периодически покачивают. Наблюдение за ходом реакции проводят 5 минут. Хотя агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд, наблюдение следует вести и далее – до 5 минут ввиду возможности более поздней агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В. Через 3 минуты в капли смеси сыворотки с эритроцитами, в которых наступила агглютинация, добавляют по одной капле (0,05 мл) изотонического раствора хлорида натрия и продолжают наблюдение при периодическом покачивании пластинки до истечения 5-ти минут.

Результаты с сыворотками трех групп: 0ab (анти-А+В), Аb(анти-В) и Вa (анти-А) могут дать четыре различные комбинации положительных и отрицательных реакций (таблица 1): 1. Если сыворотки всех трех групп дали отрицательную реакцию, т.е. все смеси остались равномерно окрашенными в красный цвет без признаков агглютинации, это значит, что кровь не содержит агглютиногенов А и В, т.е. принадлежит к группе 0(I). 2. Если сыворотки групп 0ab (анти-А+В), Вa (анти-А) дали положительную реакцию, а сыворотка группы Аb (анти-В) – отрицательную, это значит, что кровь содержит агглютиноген А, т.е. принадлежит к группе А(II). 3. Если сыворотки групп 0ab (анти-А+В) и Аb(анти-В) дали положительную реакцию, а сыворотка группы Вa(анти-А) – отрицательную, то исследуемая кровь содержит агглютиноген В, т.е. принадлежит к группе В(III). 4. Если сыворотки всех трех групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что исследуемая кровь содержит оба агглютиногена – А и В, и принадлежит к группе АВ(IV). Однако в этих случаях для исключения неспецифической агглютинабельности исследуемых эритроцитов необходимо провести дополнительное контрольное исследование со стандартной сывороткой группы АВо(IV). Для этого на пластинку наносят большую каплю (0,1 мл) сыворотки группы АВо(IV) (контроль) и к ней добавляют маленькую (0,01 мл) каплю исследуемой крови. Сыворотку и кровь перемешивают, после чего наблюдают за результатом в течение 5 минут при покачивании пластинки.

ТЕХНИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУППЫ КРОВИ ПЕРЕКРЕСТНЫМ СПОСОБОМ ПРИ ПОМОЩИ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИХ СЫВОРОТОК И СТАНДАРТНЫХ ЭРИТРОЦИТОВ

Определение группы крови перекрестным способом заключается в одновременном определении групповых агглютиногенов в эритроцитах испытуемой крови при помощи стандартных сывороток и групповых агглютининов в сыворотке исследуемой крови при помощи стандартных эритроцитов. Для определения группы крови перекрестным способом, кроме стандартных сывороток, используют стандартные эритроциты группы О(I), А(II), В(III). Кровь для исследования берут из вены или пальца в сухую пробирку. Кровь центрифугируют или оставляют в покое на 20-30 минут для отделения сыворотки (для более быстрого получения сыворотки через 3-5 минут сгусток отделяют от стенок пробирки, обведя его стеклянной палочкой). Определение производят на белой пластинке, на верхнюю часть которой наносят обозначение слева направо: 0ab (анти-А+В), Аb (анти-В) и 7 Вa (анти-А). На верхнем крае надписывают фамилию и инициалы лица, у которого определяют группу крови. Под соответствующими обозначениями групп крови на пластинку наносят по одной большой капле (0,1 мл) стандартных изогемагглютинирующих сывороток. При использовании стандартных сывороток двух различных серий каждой группы всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по 3 капли в следующем порядке слева направо 0ab (антиА+В), Аb (анти-В) и Вa (анти-А). На нижнюю часть пластинки также под соответствующими обозначениями наносят по одной маленькой (0,01 мл) капле стандартных эритроцитов в следующем порядке слева направо О(I), А(II), В(III). Из пробирки, содержащей кровь больного, пипеткой извлекают сыворотку (осторожно, чтобы не взболтать эритроциты) и накапывают ее по одной большой (0,1 мл) капле на подготовленные стандартные эритроциты. После этого той же пипеткой набирают со дна пробирки эритроциты испытуемой крови и наносят их по маленькой (0,01 мл) капле рядом с каждой каплей подготовленной стандартной сыворотки. Во всех каплях сыворотку перемешивают с эритроцитами сухой палочкой, пластинку покачивают, затем на 1-2 минуты оставляют в покое и снова периодически покачивают. Наблюдение за ходом реакции проводят 5 минут. Агглютинация в каплях со стандартной сывороткой обычно начинается быстро (10-30 секунд). Агглютинация в каплях, в которых сыворотку крови испытывают со стандартными эритроцитами, может наступить поздно (к концу 5-й минуты), в связи с возможностью низкого титра содержащихся в исследуемой сыворотке агглютининов. Через 3 минуты в те капли, в которых наступила гемагглютинация, добавляют по 1 капле (0,05 мл) изотонического раствора хлорида натрия и продолжают наблюдение при покачивании пластинки до истечения 5 минут.

Цоликлоны та же сыворотка только полученная генной инженерией. Циликоны –это синтетические заменители сывороток. Храняться 2 года. Удобны в использовании. Анти-А – красный , анти-В-синий.

4. Резус фактор. Клиническое значение.

 

Резус-фактор – это белок, находящийся на поверхности эритроцитов у некоторых людей. Кровь тех, у кого он есть, называют резус-положительной, у кого нет – резус-отрицательной. Наличие или отсутствие этого белка является индивидуальной особенностью, а не патологией.

В 1940 году К. Ландштейнер и И. Винер обнаружили в эритроцитах еще один агглютиноген. Впервые он был найден в крови макак-резусов. Поэтому был назван ими резус-фактором. В отличие от антигенной системы АВО, где к агглютиногенам А и В имеются соответствующие агглютинины, агглютининов к резус-антигену в крови нет. Они вырабатываются в том случае, если резус-положительную кровь (содержащую резус-фактор) перелить реципиенту с резус-отрицательной кровью. При первом переливании резус несовместимой крови никакой трансфузионной реакции не будет. Однако в результате сенсибилизации организма реципиента, через 3-4 недели в его крови появятся резус-агглютинины. Они очень длительное время сохраняются. Поэтому при повторном переливании резус-положительной крови этому реципиенту произойдет агглютинация и гемолиз эритроцитов донорской крови.

Другое отличие этих двух антигенных систем состоит в том, что резус-агглютинины имеют значительно меньшие размеры, чем a и b. Поэтому они могут проникать через плацентарный барьер. В последние недели беременности, во время родов и даже при абортах, эритроциты плода могут попадать в кровяное русло матери. Если плод имеет резус-положительную кровь, а мать резус-отрицательную, то попавшие в ее организм с эритроцитами плода резус-антигены, вызовут образование резус-агглютининов. Титр резус-агглютининов нарастает медленно, поэтому при первой беременности особых осложнений не возникает. Если при повторной беременности плод опять наследует резус-положительную кровь, то поступающие через плаценту резус-агглютинины матери вызовут агглютинацию и гемолиз эритроцитов плода. В легких случаях возникает анемия, гемолитическая желтуха новорожденных. В тяжелых эритробластоз плода и мертворожденность. Это явление называется резус-конфликтом. С целью его профилактики сразу после первых подобных родов вводят антирезус-глобулин. Он разрушает резус-положительные эритроциты, попавшие в кровь матери.

5. Методы и способы переливания крови.

Способы переливания:

· Внутривенно-часто

· Внутриартериально-при массивной кровопотере и ослаблении сердечной деятельности

· Внутрикостно –не применяется, раньше при массивных ожогах с помощью иглы Кассирского с рукояткой кровь вливали в грудину гребень подвздошной кости или в пяточную кость

 

6. Заместительное и стимулирующее действие перелитой крови.

Перелитая кровь оказывает на организм реципиента следующие эффекты: заместительный, гемодинамический, иммунологический, гемостатический, стимулирующий. Заместительный эффект - Заместительное действие заключается в возмещении утраченной организмом части крови. Введенные в организм эритроциты восстанавливают объем крови и ее газотранспортную функцию. Лейкоциты повышают иммунные способности организма.

Стимулирующий эффект - После переливания крови в организме развиваются изменения, аналогичные стрессу. Происходит стимуляция гипоталамо-гипофизарно- адреналовой системы, что подтверждается увеличением содержания кортикостероидов в крови и моче реципиентов в посттрансфузионном периоде. У реципиентов повышается основной обмен, увеличивается дыхательный коэффициент, повышается газообмен. Переливание крови оказывает стимулирующее действие на факторы естественного иммунитета: повышается фагоцитарная активность гранулоцитов, выработка антител в ответ на действие тех или иных антигенов.

7. Гемостатическое и гемодинамическое действие перелитой крови.

Гемодинамический эффект - Переливание крови оказывает всестороннее воздействие на сердечно-сосудистую систему. У больных с острой кровопотерей и травматическим шоком оно приводит к стойкому увеличению ОЦК, увеличению венозного притока к правым отделам сердца, усилению работы сердца и повышению минутного объема крови.

Гемостатический эффект - Переливание крови оказывает стимулирующее действие на систему гемостаза реципиента, вызывая умеренную гиперкоагуляцию, обусловленную увеличением тромбопластической и снижением антикоагулянтной активности крови. Переливание небольших доз (обычно 250 мл) теплой крови или крови с малым сроком хранения (до 3 суток), оказывает существенное гемостатическое действие благодаря активности вводимых с ней тромбоцитов и прокоагулянтов — факторов свертывающей системы. В то же время переливание массивных доз донорской крови в отдельных случаях может нарушить гемостатический баланс вплоть до развития диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови (ДВС-синдром).

8. Противопоказания к переливанию крови и ее компонентов.

Противопоказания к переливанию крови:

• абсолютные: острый септический эндокардит; свежие тромбозы и эм­болии; отек легких; тяжелые расстройства мозгового кровообращения; пороки сердца, миокардиты и миокардиосклероз различного вида с нарушением общего кровообращения Пб—III степени; гипертониче­ская болезнь III степени с выраженным атеросклерозом сосудов го­ловного мозга, нефросклерозом;
• относительные: подострый септический эндокардит без прогресси­рующего развития диффузного гломерулонефрита и расстройств об­щего кровообращения; пороки сердца с недостаточностью кровооб­ращения Пб степени; выраженный амилоидоз; остротекущий тубер­кулез.

 

9. Консервирование крови. Сроки хранения крови.

Консервирование крови – это комплекс воздействий на нее, имеющих своей целью создание условий для длительного хранения крови вне организма в стерильном состоянии с максимальным сохранением ее биологических свойств (как форменных элементов, так и жидкой части крови).

Заготовка крови осуществляется в асептических условиях, в специально оборудованной операционной станции или отделения переливания крови.

Консервирование осуществляется с помощью специальных консервантов. Принципиально в состав любого консерванта крови входят:

• антикоагулянт (стабилизатор) – цитрат натрия и лимонная кислота;
• вещества, питающие клетки крови (чаще всего глюкоза, декстроза и дифосфат натрия);
• средства, продлевающие срок жизни и функциональной полноценности клеток крови (чаще всего аденин, который, проникая в эритроциты, включается в обменные процессы, превращаясь в АТФ)

Хранение консервированной крови и эритроцитарных компонентов крови осуществляется в специально оборудованных холодильниках при температуре + 4 ± 2ºС.

Хотя срок хранения препаратов крови при консервации цитратными препаратами от 21 до 35 дней, но рекомендуется использовать их в первые 10 дней. После двух недель хранения рН консервированной крови значительно смещается в кислую сторону, в ней нарастает концентрация продуктов распада клеток (в первую очередь тромбоцитов и лейкоцитов) и микроагрегатов, повышается уровень плазменного калия, аммония, органических фосфатов, биологически активных веществ, цитокинов.

 

10. Гемотрансфузионные осложнения. Причины их развития.

 

 

 

11 Гемотрансфузионный шок. Клиника, лечение.

Причина- в большинстве случаев невыполнение правил переливания крови на одном из этапов.

Патогенез: внутрисосудистое разрушение эритроцитов донорской крови приводит к выходу в кровь свободного гемоглобина, активного тромбопластина, что приводит к ДВС - синдрому, нарушению микроциркуляции, ЦНС, шоку.

СимптомыГемотрансфузионного шока:

1)возбуждение больных;

2)боли в груди;

3)боли в пояснице. Затем развиваются:

4)бледность кожных покровов;

5)тахикардия;

6)холодный пот;

7)стойкое падение АД.

В более поздние сроки развиваются:

8)гемоглобинемия;

9)гемолитическая желтуха;

10)ОПН;

11)острая печеночная недостаточность.

Если шок развивается во время операции, под наркозом, то его признаками являются:

1)стойкое падение АД,

2)повышенная кровоточивость из операционной раны,

3)появление мочи цвета "мясных помоев" (поэтому в случаях переливания крови во время операции обязательна катетеризация мочевого пузыря).