Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Технологія розріджування, зберігання та транспортування сперми.
ПЛАН 1.Значення і необхідність розрідження сперми, вимоги до розріджувачів. 2.Способи зберігання сперми бугая, барана, кнура, жеребця при температурі + 2 - + 5о С. 3. Теоретичні і практичні основи заморожування сперим, значення. 4.Підготовка сперми до заморожування. 5.Технологія заморожування сперми в гранулах, пайєтах, ампулах. 6.Зберігання сперми у рідкому азоті та транспортування сперми.
¨ Література 1.І.І.Карташов, Г.С. Шарапа Акушерство гінекологія і штучне осіменіння сільськогосподарських тварин. – К.: Вища школа 1991. с. 75 – 94, 2.Н.Н.Михайлов Акушерство, гинекология и искусственное осеменение сельськохозяйственних животних М.: Агропромиздат 1990. с. 3. Яблонський В.А., Хомін С.П., Калиновський Г.М., Харита Г.Г. та інші Ветеринарне акушерство, гінекологія та біотехнологія відтворення тварин з основами андрології. – ПП.: Нова книга 2006. с. 142 - 155 4.В.М.Яблонський Практичне акушерство гінекологія та біотехнологія відтворення тварин з основами андрології. - К.: Мета 2002. с. ! Основні терміни і поняття Розріджувачі для сперми: ГЦЖ – глюкозоцетратножовтковий, ГЖ – глюкозо – жовтковий, ГХЦС - глюкозохелатоцетратний; температура замерзання кисню -183 о С, температура замерзання рідкого азоту -196 о С, температура замерзання вуглекислоти -79 о С, облицьовані гранули пайєти, соломинки, термоси, посуди Дюара. & Теоретичні вказівки Нова Таким чином, для розрідження сперми використовують як синтетичні, так і біологічні середовища. Склад середовища залежить від того, для якого виду тварин та для якого режиму зберігання воно призначене. Для зберігання сперми при 2-5 °С широко застосовуються жовткові середовища. Розріджувачі, що використовуються для зберігання сперми у замороженому вигляді, містять у своєму складі кріопротектори (гліцерин, етиленгліколь, поліетиленок- сид, рафінозу та ін.). Для пригнічення мікрофлори до складу розріджувачів додають сануючі речовини: білий стрептоцид, пеніцилін кристалічний (натрієва або калієва сіль) та стрептоміцин сірчанокислий або солянокислий, або суміш цих препаратів під назвою "Спер- мосан - З". У багатьох країнах були запропоновані сухі синтетичні препарати (семінал і нео- семінал, спермозол, лаціфос, капроген та ін.), які перед використанням розріджують у певному об'ємі дистильованої води.
Компоненти розріджувача проявляють різноманітний вплив на спермії; неелек- троліти (моно- і поліцукри) підтримують у розчинах осмотичний тиск, проявляють захисну дію під час заморожування, інактивують антитіла, зменшують електропровідність сперми, сприяють збереженню електричного заряду сперміїв, перешкоджають їх аглютинації; глюкоза та фруктоза можуть служити джерелом енергії; амінокислоти у розчинах створюють осмотичний тиск, виконують роль амфотерного буфера. Окремі лужні та амфотерні водорозчинні амінокислоти виконують захисну функцію, знижують активність ферментів та інтенсивність обмінних процесів у сперміях; зв'язуючи кисень та перекис водню, амінокислоти можуть виконувати роль антиоксидантів. Проте неелектроліти слабо захищають спермії від холодового удару, не забезпечують буферності та електропровідності середовища. Електроліти (цитрат натрію, тартрат, бікарбонат натрію, сульфат амонію та ін.) захищають оболонку сперміїв від набухання і знижують її проникність, позитивно впливають на обмін речовин, нейтралізують шкідливу дію токсичних продуктів обміну, частково захищають спермії від температурного шоку; електроліти утворюють у середовищах буферну ємність, електропровідність, створюють рН розчину. Речовини, що утворюють електролітну основу, складаються з аніонів та катіонів. Аніони проявляють сильнішу дію на зберігання сперміїв, ніж катіони. Чим вища валентність аніонів, тим краще виживання у їх розчинах сперміїв. Наприклад, хелатон (чотиривалентні аніони) проявляє найсильнішу дію на окисно-відновні процеси у сперміях. Будучи сильним комплексоном, він тимчасово зв'язує іони металів кальцію і магнію, гальмує активність протеаз, аденозинтрифосфатаз, фосфофруктокінази, гексодифосфа- тази та інших ферментів, знижує обмінні процеси у сперміях. Крім того, він володіє високими буферними властивостями і гальмує розвиток мікроорганізмів у спермі. Жовток захищає спермії від холодового удару, при температурі нижче 16 °С підвищує стійкість клітин проти дії токсичних речовин, гіпо- і гіпертонічних розчинів, світла та інших факторів зовнішнього середовища. Проте при швидкому охолоджені сперми, розрідженої цукрово-жовтковими середовищами, можливий шок.
Серед кріопротекторів у середовищах для заморожування сперми (гліцерин, етиленглікольполіетиленоксид, рафіноза та ін.) найвищими захисними властивостями при заморожуванні володіє гліцерин. Він затримує початок кристалізації води і сповільнює ріст кристалів, знижує осмотичний тиск розчинених речовин при заморожуванні до евтектичної точки (-46,5 °С). Гліцерин завжди знаходиться у фазі розчину, внаслідок чого концентрація осмотично активних речовин зменшується, що сприяє зберіганню клітин. Проте гліцерин не індиферентна речовина по відношенню до сперміїв. Вже при концентрації 3,5 % він проявляє сильну гіпотонічну дію. При зменшенні концентрації гліцерину у середовищі зменшується його захисна дія, а при збільшенні концентрації і часу контакту при плюсовій температурі він проявляє руйнівний вплив на структуру сперміїв. Сануючі речовини (антибіотики, сульфаніламіди та хіміотерапевтичні препарати, спермосан - 3 та ін.) поряд з пригніченням росту мікроорганізмів дещо знижують обмінні процеси сперміїв, тому не можна ними зловживати. стара
Способи зберігання сперми Залежно від специфіки роботи племоб'єднань, їхнього матеріально-технічного забезпечення та умов роботи пунктів у господарствах застосовують нетривале або тривале зберігання сперми плідників. Нетривале зберігання сперми. Сперму бугая, барана, жеребця і кнура, розбавлену глюкозоцитратно-жовтко- вим чи хелатоновими розріджувачами, зберігають при температурі 2—5 °С або 16—20 °С протягом 1—3 діб. Сперму бугая і барана транспортують у харчових термосах з широкою шийкою, сперму жеребців — у спеціальних термосах-ящиках або харчових термосах з широкою шийкою. Для зберігання і транспортування сперми кнурів використовують термоси-ящики та побутові сум- ки-холодильники. Розбавлену сперму бугая і барана розфасовують і зберігають у простерилізованих скляних флаконах і ампулах. Важливою умовою зберігання розбавленої сперми є поступове її охолодження і підтримання постійного температурного режиму за допомогою термосів. Розбавлену сперму поступово охолоджують до кімнатної температури (18—25 °С). Наповнені спермою флакони чи ампули вставляють у гумовий або поліетиленовий мішечок і підв'язують міцною ниткою. Потім обгортають шаром вати і упаковують у поролонові амортизатори для рівномірного охолодження в термосах до температури 2— 5 °С. На дно термоса кладуть шар вати і до половини його засипають кусочками льоду. Потім у нього вставляють підготовлену сперму і зверху засипають шаром льоду. Термос закривають пробкою і кришкою. Щоб вийняти упаковану сперму із термоса, треба потягти за кінець нитки, яка знаходиться зверху. При використанні збереженої сперми у разі потреби в термос періодично добавляють кусочки льоду. Сперму на пунктах штучного осіменіння можна зберігати в холодильниках при температурі 2—5 °С. Розбавлена сперма бугая при правильному зберіганні придатна для осіменіння самок протягом 2—3 діб, а барана — до 24—36 год. Для осіменіння допускається сперма бугая з активністю сперміїв не менш як 7 балів і барана 8 балів.
Сперму кнура можна використовувати нерозбавле- пою протягом 2—3 год після її одержання. Сперму, розбавлену хелатоновими середовищами, розфасовують у поліетиленові флакони або скляні ампули. Отвори посудин тимчасово закривають пергаментним папером або целофаном, фіксуючи їх гумовим кільцем. На пункти сперму доставляють у спеціальних термосах, де її зберігають у погрібцях-термосах при температурі 16—20 °С і використовують протягом 3 діб. Для оцінки рухливості сперміїв слід користуватися підлужним розчином (натрію хлориду —450 мг, глюкоза—З г, сода двовуглекисла — 50—70 мг і вода дистильована — 100 мл). Рухливість сперміїв при ОСІМЄНІНт ні свиноматок повинна бути не менш як 6 балів. Розбавлену і перевірену сперму жеребця розфасовують в ампули чи скляні баночки об'ємом 50—100 мл, закривають пробками, які фіксують гумовими кільцями. Упаковану сперму ставлять у мішечки, а потім у термос з льодом і зберігають при температурі 2—5 °С, періодично додаючи кусочки льоду через бічні отвори. Рухливість сперміїв при використанні сперми повинна бути не менш як 5 балів. Довготривале зберігання сперми в рідкому азоті. Наприкінці 40-х років І. В. Смирнов вперше заморозив сперму кролів, жеребців, баранів і бугаїв. У 1950— 1961 рр. на території України він одержав перших телят і ягнят при осіменінні корів і вівцематок замороженою спермою. Сперму заморожували у твердій вуглекислоті (—79 °С), в рідкому кисні (—183 °С) і в рідкому азоті (—196°С). Останнім часом широкого практичного застосування набув метод заморожування і зберігання сперми за допомогою азоту. Метод тривалого зберігання сперми плідників у замороженому стані дає змогу рівномірно за графіком використовувати бугаїв протягом року і створювати запаси сперми. Заморожена сперма використовується за селекційним планом незалежно від місця перебування плідника, кліматичних умов тощо. З'явилась можливість міждержавного обміну спермою плідників та її використання навіть після їхньої загибелі. Сперму в замороженому стані можна зберігати протягом місяців і років, якщо дотримуватися рекомендованого температурного режиму. Заморожування і зберігання сперми бугая Розроблено кілька технологій заморожування сперми бугаїв. Найбільш поширено такі технології: заморожування в гранулах на фторопластовій пластині, в облицьованих гранулах (Ф. І. Осташко та in.), в соломинках (П. І. Пакенас та ін.).
Для заморожування беруть високоякісну сперму. Активність сперміїв бугая повинна бути не нижча за 8 балів, а концентрація — не нижча за 0,7 млрд/мл; сперма жеребця — відповідно 6 балів і 150 млн/мл. Заморожування сперми у формі гранул. Сперму замо рожують після її оцінки і розбавлення лактозогліцери- ново-жовтковим середовищем (лактоза—11,5 г; гліцерин — 5 мл; жовток курячого яйця — 20 мл; спермо- сан — 50 тис. ОД., вода дистильована—100 мл). Розбавляють у співвідношенні 1: 1 — 1: 3 і охолоджують при температурі 2—5 °С протягом 4—5 год у холодильнику (еквілібрація). Після цього сперму знову перевіряють на активність. У лунки фторопластової пластини сперму розфасовують після відповідної підготовки пластин (рис. 14). Сперму наносять на знезаражену променями бактерицидних ламп пластину по 0,15—0,2 мл за допомогою градуйованої піпетки, шприца або автоматичного пристосування. Спочатку пластини охолоджують у рідкому азоті протягом 8—10 хв, або до припинення кипіння азоту. Для цього використовують спеціальні ванни. Пластина охолоджується до мінус 160—170 °С. Через кілька секунд після того, як в останній лунці сперма затвердіє, пластину опускають на відстань 5— 10 см від рідкого азоту і витримують протягом 2—3 хв, а потім занурюють у нього на 1—2 хвилини. Далі пластину виймають назовні, збирають гранули за допомогою лопаточки в туби, каністри, пластмасові стаканчики чи марлеві мішечки і переносять у посудину Дьюара для ка- рантинування, зберігання і транспортування.
До кожної туби чи іншої посудини із гранулами бугая прикріплюють етикетку з номером плідника, породою, датою заморожування сперми, кількістю доз і т. ін. Гранулу розморожують в 1 мл 3 %-го розчину натрію лимоннокислого. Цей метод порівняно простий, забезпечує високу активність сперміїв після розморожування гранул, набув широкого практичного застосування. Але він має ряд недоліків, пов'язаних з порушенням цілісності гранул у процесі зберігання, мікробною забрудненістю спермо- доз при використанні тощо.
нава Нині сперму бугаїв заморожують у формі не облицьованих чи облицьованих гранул, у поліпропіленових соломинках, полістиролових піпетках, для цього опрацьовані відповідні рецепти середовищ та технологія заморожування. Вагомий внесок у цю справу зробив Ф. І. Осташко з очолюваною ним школою дослідників. При одномоментному розрідженні сперми за технологією Ф. І. Остатка через 5-10 хв. після її отримання в неї вносять підігрітий до 30-35 °С розріджувач, що містить всі необхідні компоненти, в тому числі кріопротектор. При двомоментному розрідженні перше середовище
вносять у сперму зразу після її отримання, а тоді через 5-10 хв. проводять додаткове розрідження середовищем № 2. Розливають розріджену сперму у флакони, закривають їх стерильними гумовими корками і витримують 4-6 годин у холодильнику при 2-5 °С (еквілібрація). Тоді приступають до заморожування сперми за тією чи іншою технологією.
При заморожуванні сперми бугая у вигляді гранул на фторопластовій пластинці у парі рідкого азоту занурюють пластинку на 1 хв. у рідкий азот (до припинення кипіння азоту), тоді закріплюють її на висоті 2-3 см над поверхнею азоту і за допомогою пластмасового шприца з голкою чи спеціальної крапельниці накрапують сперму у ямки (заглиблення) пластинки по 0,1-0,2 мл (при виготовленні малих концентрованих гранул) чи 0,5-1,0 мл (для великих гранул). Витримують пластинку зі спермою 2-3 хв. над рідким азотом, тоді занурюють її на 1-2 хв. у азот, виймають і згортають гранули охолодженою лопаткою у марлеві мішечки чи контейнери і переносять у посудину Дьюара на зберігання. Проте необлицьовані гранули незахищені від мікробного забруднення. Для одержання облицьованих гранул заповнюють розрідженою спермою поліетиленову трубку діаметром 3,8-4 мм, товщиною стінки 120 мкм, розділяють її за допомогою автоматичного приладу на окремі дози по 0,25-0,33 мл і загсрметизовують їх, охолоджують і заморожують. Потужність запропонованої Ф. І. Осташком технологічної лінії - 2 000 спермодоз за 1 годину. У 1975 р. Касу (Франція) вперше застосував для фасування сперми бугаїв поліпропіленові соломинки (пайети) місткістю 0,5 мл. За цією технологією отриману сперму розріджують середовищем "Леціфос-271" з додаванням 10 % курячого жовтка або середовищем "Леціфос Пас-470", розфасовують її під вакуумом у соломинки, кінці яких герметизують полівініловим спиртом або запаюють зварювальним апаратом, маркують, витримують 2 години у воді температурою 5 °С і заморожують у парі азоту. Згодом з'явилася технологія заморожування сперми у мініпайєтах об'ємом 0,25 мл, яка дозволила заготовляти від бугая 30-40 тис. спермодоз за рік. Для розморожування замороженої в формі гранул сперми переносять її за допомогою охолодженого пінцета у флакон з 1 мл 2,9 %-го розчину цитрату натрію, попередньо підігрітого у водянії! бані при температурі 4СМ-2 °С. Через 8-10 сек. виймають флакон зі спермою з водяної бані, оцінюють якість сперми і при рухливості сперміїв не нижче 4 балів сперму використовують для осіменіння. Розморожування сперми у відкритих гранулах можна проводити і без використання 2,9 %-го розчину натрію цитрату. Для цього опускають гранулу у тонкостінну стерильну пробірку з випуклим дном, підігріту попередньо 4-5 хв. у водяному термостаті до 38±0,5 °С, і після повного розморожування гранули набирають сперму у піпетку для осіменіння. Розморожування сперми, замороженої у капілярах (пайетах) проводять у водяній бані з дистильованою водою чи розчином фурациліну (1: 5000) при температурі 38^10 °С, поміщаючи в неї капіляр корком донизу у поліетиленовому мішечку. Потім пайету виймають, протирають марлевою серветкою, відрізають стерильними ножицями загерметизований кінець, перевіряють якість сперми і вставляють в інструмент для осіменіння. Можна проводити і прискорене двоступінчасте розморожування за допомогою приладу УДС-1. Відтавання облицьованих гранул також проводять протягом 8-10 сек. у водяній бані з дистильованою водою чи розчином фурациліну (1: 5000) при температурі 38-40 °С. Розморожені гранули витирають стерильною серветкою, розрізають ножицями, перевіряють під мікроскопом і при позитивній оцінці використовують для осіменіння. Заморожену у вигляді гранул сперму барана розморожують таким чином: засипають у розігрітий водяний чи електричний відтаювач одночасно до 20 гранул і дають можливість стекти розмороженій спермі у стерильний флакон. Алюмінієві пакети із замороженою спермою жеребця занурюють за допомогою пінцету у водяну баню і легко похитують. Заморожену у вигляді гранул сперму жеребця насипають одним шаром у стерильну конічну колбу і занурюють її у водяну баню. При роботі з замороженою спермою та рідким азотом необхідно суворо дотримуватись техніки безпеки. Перш за все, техніки-оператори повинні працювати з рідким азотом у захисних окулярах та шкіряних рукавицях. Оголені ділянки тіла потрібно надійно захищати одягом. Посудини Дьюара із замороженою спермою необхідно зберігати у добре вентильованому приміщенні біля вікна, щоб можна було доливати рідкий азот через кватирку. За півгодини до роботи приміщення вентилюють. Заповнюють порожні посудини Дьюара рідким азотом поступово, через гнучкий шланг, опустивши його наконечник до дна посудини. Ні в якому разі при цьому не можна заглядати у горловину посудини. У процесі тривалого зберігання рідкого азоту в ньому поступово накопичується кисень (який підтримує горіння), тому через кожних 15-20 заправок зливають у безпечному місці зріджений газ і заповнюють посудину свіжим азотом. Не можна закривати посудину Дьюара герметично, тому що під впливом випаровування рідкого азоту у ній виникає високий тиск, який може зірвати посудину. Не можна також користуватися посудиною Дьюара, горловина та верхня частина якої вкрилася льодом. Один - два рази на рік посудини відігрівають, очищають від домішок і дезінфікують. ? ПИТАННЯ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЮ 1.Яка мета розрідження сперми? 2.Яким вимогам повинно відповідати середовище для розрідження сперми? 3.Яку роль у складі розріджувача виконують окремі його компоненти? 4.Які існують методи зберігання сперми? Дайте їм порівняльну оцінку. 5.Які недоліки виникають при заморожуванні сперми і як їх уникнути? 6.Які вимоги техніки безпеки необхідно виконувати при роботі з рідким азотом? Тестовий КОНТРОЛЬ ЗНАНЬ
|
||||||||||
Последнее изменение этой страницы: 2021-03-10; просмотров: 395; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 3.23.127.197 (0.031 с.) |