Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Понятие о культуре клеток. Их классификация и практическое применение.
Под культурой ткани и клеток понимают кусочки органов и тканей или отдельные их клетки, которые сохраняют жизнедеятельность и способность размножаться в питательной среде вне организма. Для роста и размножения клеток вне организма необходим комплекс физико-химических факторов (оптимальная температура, осмотическое давление среды, газовая среда, солевой состав питательной среды, присутствие в среде ионов Na, K, Ca, Mg, Cl, карбонатов и фосфатов, pH 7.2……7.4, аминокислоты, глюкоза, витамины группы В, чистота и стабильность компонентов). Культуры тканей различают в зависимости от условий выращивания клеток: 1. Культуры переживающих тканей в жидкой среде и на агаре, которые или вообще не размножаются in vitro, или дают очень слабый рост, т.е. в них отсутствует процесс размножения клеток. Заражение вирусом производят в момент их приготовления. 2. Культуры растущих тканей или клеток, активно размножающиеся in vitro при благоприятных условиях питания. Используют, главным образом, 3 типа клеток: 1. Первичная культура – происходящая от клеток тканей или организмов, взятых непосредственно из организма. Культура считается первичной, пока ее не субкультивируют, после чего она становится клеточной линией. В ряде случаев первичная культура обладает более высокой чувствительностью к вирусам, по сравнению с клеточными линиями. Приготовление первичных культур клеток включает: получение ткани, выделение клеток, выращивание однослойной культуры. 2. Линия клеток – первичная культура со времени получения субкультуры. Могут иметь ограниченный срок жизни in vitro, а могут размножаться неограниченно долго (становятся непрерывными клеточными линиями). Линия диплоидных клеток. Морфологически однородная популяция клеток. Такие культуры часто называют штаммами. Штамм клеток – популяция однородных клеток, сохраняющая специфические свойства в течение ограниченного периода культивирования. Для нее характерны: - стабильность в процессе культивирования in vitro; - по крайней мере 75% клеток обладает кариотипом нормальных клеток исходного вида; - ограниченный срок жизни; - наличие фаз стабилизации, активного роста и старения; - сохранение в процессе пассирования содержания каротина на уровне исходной ткани;
- на всем протяжении культивирования сохраняется доброкачественный характер; - свободны от микоплазм и скрытых вирусов; - обладают широким спектром чувствительности к вирусам, что позволяет выращивать в них большинство видов вирусов. Линия гетероплоидных клеток. Клеточная линия имеет менее 75% клеток с диплоидным набором хромосом. 3. Постоянная (непрерывная) клеточная линия. Клетки способны к размножению вне организма неопределенно длительное время. Широко распространен термин «перевиваемые клетки». Преимущества перевиваемых клеток: - независимость от источников тканей, так как клетки пересеваются бесконечно; - на клетки не влияют большие концентрации антибиотиков; - соответствие стандартному состоянию. Недостатки: - безграничный рост – свойство опухолевых клеток; - быстрое наступление деструктивных изменений; - при длительном культивировании часто подвергаются изменчивости. Существенный недостаток тканевых культур, осложняющий их применение в вирусологической диагностике – частое загрязнение исходного тканевого материала латентными вирусами, микоплазмами.
ВОПРОС 23. Цитопагенное действие (ЦПД) или цитопатический эффект (ЦПЭ) и гемадсорбция. Обнаружить вирус в клетках можно по цитопатическому действию или цитопатическому эффекту. ЦПД – это любые изменения клеток под влиянием размножающегося в них вируса. Проявляются в виде многообразных функциональных, биохимических и структурных изменений. Функциональные и биохимические изменения в клетке возникают вскоре после инфицирования клетки вирусом. Они заключаются в угнетении процессов деления клеток, синтеза клеточных нуклеиновых кислот (ДНК и РНК) и белков, а на более поздних стадиях инфекционных процесса — в полном прекращении синтетических процессов (в клетке прекращается собственный метаболизм). Для обнаружения ЦПД зараженные культуры клеток просматривают под малым увеличением светового микроскопа. Наиболее существенно различаются три формы ЦПД: 1. Фрагментация. Разрушение клеток на отдельные фрагменты (вирус везикулярного стоматита).
2. Округление. Клетки принимают шаровидную форму и отделяются от стекла (аденовирусы). 3. Симпластообразование. Образование гигантских клеток: цитоплазма соседних клеток сливается вследствие растворения клеточных оболочек и образуется одна большая клетка со многими ядрами (вирус чумы КРС).
Гемадсорбция – адсорбция эритроцитов на поверхности пораженных вирусом клеток. Используется только для индикации вирусов, содержащих гемагглютинины. В пробирки с зараженным вирусом культурой ткани вносят 0,2 мл 0,4%-ной взвеси эритроцитов. Пробирки встряхивают и оставляют в наклонном положении. Длительность контакта эритроцитов с клетками зависит от температуры инкубации и вида вируса. Учет реакции производят под малым увеличением микроскопа после непродолжительного покачивания пробирки для отделения неадсорбированных эритроцитов от поверхности клеток. При вирусной гемадсорбции эритроциты прочно фиксированы на клетках и сохраняются на них после 1-2 кратного отмывания. Адсорбируясь на поверхности пораженных вирусом клеток, эритроциты образуют характерные скопления.
ВОПРОС 24.
|
||||||
Последнее изменение этой страницы: 2021-01-09; просмотров: 180; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 18.217.182.45 (0.005 с.) |