Лабораторная диагностика ВИЧ- инфекции

Диагностика ВИЧ-инфекции включает в себя два этапа:
I этап - установление собственно факта зараженности ВИЧ-инфекцией;
II этап - определение стадии заболевания.

УСТАНОВЛЕНИЕ ФАКТА ЗАРАЖЕННОСТИ ВИЧ-ИНФЕКЦИЕЙ
Установление собственно факта зараженности ВИЧ-инфекцией (то есть выявление ВИЧ-инфицированных) в свою очередь также включает в себя два этапа:
I этап - иммуноферментный анализ (ИФА): метод ИФА является скрининговым (отборочным) - отбор предположительно инфицированных лиц, то есть его целью является выявление подозрительных лиц и отсеивние здоровых лиц; антитела к ВИЧ выявляют с помощью других антител к искомым антителам (антитела против других антител). Эти «вспомогательные» антитела метят ферментом. Все скрининговые тесты обязаны быть высокочувствительными, чтобы не пропустить больного. Из-за этого их специфичность не очень высокая, то есть ИФА может дать положительный ответ («вероятно болен») у неинфицированных людей (например, у больных аутоиммунными заболеваниями: ревматизм, системная красная волчанка и др.). Частота ложноположительных результатов при использовании различных тест-систем колеблется от 0,02 до 0,5%. Если у человека ИФА дало положительный результат, то для подтверждения факта инфицирования ВИЧ необходимо обследоваться дальше. При проведении ИФА в 3 - 5% случаев возможны ложноотрицательные результаты - если инфицирование произошло относительно недавно и уровень антител еще очень низкий, или в терминальной стадии болезни, характеризующейся тяжелым поражением иммунной системы с глубоким нарушением процесса антителообразования. Поэтому при наличии данных, свидетельствующих о контакте с инфицированными ВИЧ обычно проводят повторные исследования через 2 - 3 месяца.

 

II этап - иммуноблоттинг (в модификации Western Blot, вестерн-блот): является более сложным методом и служит для подтверждения факта инфицирования. Этот метод выявляет не комплексные антитела к ВИЧ, а антитела к отдельным его структурным белкам (p24, gp120, gp41 и др.). Результаты иммуноблоттинга считаются положительными, если выявляются антитела хотя бы к трем белкам, один из которых кодируется генами env, другой - генами gag, третий - генами pol. Если обнаруживаются антитела к одному или двум белкам, результат считается сомнительным и требует подтверждения. В большинстве лабораторий диагноз ВИЧ-инфекции ставится, если одновременно выявляются антитела к белкам р24, р31, gp4l и gpl20/gp160. Суть метода: вирус разрушают на компоненты (антигены), которые состоят из ионизированных аминокислотных остатков, а потому все компоненты имеют отличающийся друг от друга заря; затем с помощью электрофореза (электрического тока) антигены распределяются на поверхности полоски - если в исследуемой сыворотке есть антитела к ВИЧ, то они будут взаимодействовать со всеми группами антигенов, а это можно выявить.

Следует помнить, что антитела к ВИЧ появляются у 90-95% инфицированных в течение 3-х месяцев после заражения, у 5-9% инфицированных антитела к ВИЧ появляются через 6 месяцев и у 0,5-1 % инфицированных антитела к ВИЧ появляются в более поздние сроки. В стадии СПИДа количество антител может снижаться, вплоть до полного исчезновения.

В иммунологии существует такое понятие, как «серологическое окно» - период от инфицирования до появления такого количества антител, которое можно выявить. Для ВИЧ этот период обычно продолжается от 2 до 12 недель, в редких случаях дольше. В период «серологического окна» по анализам человек здоров, но на самом деле является зараженным ВИЧ. Установлено, что ДНК ВИЧ может находиться в геноме человека не менее трех лет без признаков активности и антитела к ВИЧ (маркеры ВИЧ-инфицирования) не появляются.

В данный период («серологическое окно») выявить ВИЧ-инфицированного и даже через 1-2 недели после заражения возможно с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Это чрезвычайно чувствительный метод - теоретически можно выявить 1 ДНК на 10 мл среды. Суть метода заключается в следующем: с помощью полимеразной цепной реакции получают много копий нуклеиновой кислоты (вирус является нуклеиновой кислотой -ДНК или РНК - в белковой оболочке), которые потом выявляют с помощью меченых ферментов или изотопов, а также по характерному строению. ПЦР является дорогостоящим методом диагностики, поэтому при скрининге и в плановом порядке не используется.

 

70.ВИЧ-инцекция и оппортунистические заболевания, принципы терапии
Нуклеозидные аналоги — препараты групп тимидина: зидовудин (ZDV, азидотимидин, ретровир), ставудин (d4T, зерит), фосфазид (ФАЗТ, никавир); аналоги цитидина — ламивудин (3TC, эпивир), эмтрицитабин (FTC, эмтрива); аналоги аденина: диданозин (ddI, видекс, видекс ЕС), тенофовир дизопроксил фумарат (TDF, виреад); аналоги гуанина: абакавир (ABC, зиаген); комбинированные препараты — зидовудин/ламивудин (CВV, комбивир), зидовудин/ламивудин/абакавир (TZV, тризивир), абакавир/ламивудин (АВС + 3ТС, эпзиком, кивекса);

2. Ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы. Имеется 4 препарата этой группы: делавердин (DLV, рескриптор), ифавиренц (EFV), невирапин (NVP, вирамун), этравирин (ETR, интеленс);

3. Ингибиторы протеазы — фосампренавир (FРV, телзир, лексива), атазанавир (AZV, реатаз), индинавир (IDV, криксиван), нелфинавир (NFV, вирасепт), ритонавир (RTV, норвир, ритонавир-100), саквинавир (SQV HGC, INV, инвираза), типранавир (TPV, аптивус), дарунавир (DRV, презиста). Кроме того, к этой группе относится первый комбинированный препарат — лопинавир + ритонавир (LPV/r, калетра). Показание к началу противоретровирусной терапии — ВИЧ-инфекция в стадии первичных проявлений в клинически выраженной форме (стадия 2В) и стадия вторичных заболеваний (4Б, 4В). При применении указанных препаратов необходимо учитывать степень развития их отрицательных побочных эффектов. Кроме того, проводят интенсивное лечение имеющихся у больного оппортунистических инфекций, что требует применения разнообразных этиотропных средств.

Оппортунистические заболевания вызываются: Вирусами (Цитомегаловирус, Вирус Эпштейна — Барр), бактериями (Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Pseudomonas aëruginosa, Acinetobacter baumanni, Clostridium difficile), грибами (Candida albicans, Aspergillus sp., Pneumocystis jirovecii, Cryptococcus neoformans, Histoplasma capsulatum), простейшими (Toxoplasma gondii, Cryptosporidium, внутриклеточными паразитами, к которым относятся возбудители рода Chlamydia.

Больше всего страдает иммунная система при поражении ВИЧ-инфекцией. Люди, с ослабленной иммунной системой проще заражаются оппортунистическими инфекциями! Оппортунистические инфекции часто становятся причиной смерти людей с ВИЧ и больных СПИДом.

Оппортунистическая инфекция может возникнуть не только у ВИЧ-положительных людей, но и у людей с резко ослабленным иммунитетом. К примеру, химиотерапия при различных формах онкологических заболеваний также способна значительно ослабить защитные функции организма.

Оппортунистические инфекции при ВИЧ вызываются разнообразными вирусами, бактериями или простейшими. Однако особо серьезную опасность представляет развитие грибковых инфекций, чаще всего вызванных кандидами (кандидоз) и аспергиллами (аспергиллез). Оппортунистические инфекции включают в себя герпес, кандидоз, вирус папилломы человека, криптококкоз, изопсориаз, малярию, криптоспоридиоз, лимфому, саркому Капоши, пневмоцистную пневмонию, токсоплазмоз, цитомегаловирус, туберкулез.

Наиболее распространенные из них:

Вирус папилломы человека (ВПЧ) –инфекция, развитие которой обусловлено вирусами, объединенными под названием "вирус папилломы человека". Довольно легко осуществляется передача ВПЧ при сексуальных контактах. Вирус обуславливает развитие генитальных бородавок, некоторые виды данного вируса вызывают рак шейки матки. Лекарственных средств от ВПЧ на современном этапе

нет, имеются лишь различные методы удаления бородавок, терапии диспластических процессов шейки матки и ануса, которые вызываются ВПЧ.

Кандидоз часто локализуется в ротовой полости, гортани, легких и/или влагалище. Это заболевание зачастую возникает из-за того, что грибки составляют естественную микрофлору человеческого организма, а при снижении иммунитета они активизируются и вызывают развитие кандидоза. Лечится он противогрибковыми препаратами, однако часто возникают рецидивы.

Криптококковый менингит развивается при наличии клеток CD4 ниже 50. Агентом, вызывающим его, является грибок Cryptococcus, который попадает в организм человека при вдыхании пыли. Данному воздействию подвергаются очень многие, но здоровый организм справляется – и болезнь не развивается. Данный вид менингита не передается от человека к человеку.

Пневмоцистная пневмония развивается при попадании микроорганизма Pneumocystis carinii, который обитает в окружающей среде повсеместно. Распространение происходит воздушным путем. Возникновение пневмоцистной пневмонии происходит при наличии иммунного статуса у больного ниже 200 клеток/мл. Профилактика и лечение успешны при данной патологии, однако при отсутствии терапии в должном объеме возможен летальный исход.

Простой герпес вызывает вирус Herpes simplex: образуются язвочки на губах, также возможно их появление на гениталиях или анусе. У ВИЧ-положительных такие высыпания встречаются значительно чаще и выражены сильнее. Существующие препараты против герпеса снимают и предотвращают его проявления, но не вылечивают полностью, так как сохраняется циркуляция вируса в нервной ткани.

Передача токсоплазмоза происходит при употреблении полусырого мяса или от контакта с кошками. Данное заболевание не передается через людей и не развивается при наличии здоровой иммунной системы.

Оппортунистические инфекции необходимо лечить современными антибактериальными, противогрибковыми и противовирусными препараты, иногда на протяжении весьма длительного периода.

Профилактика заключается в том, чтобы избегать заражения возбудителем болезни (бактерии, грибки, вирусы, паразиты), заблаговременно начать принимать лекарства, чтобы подавить активность возбудителя болезни еще до появления симптомов. Некоторые возбудители оппортунистических инфекций живут в организме большинства людей, ничем себя не проявляя. И только при низком иммунном статусе они выходят из-под контроля и вызывают опасные для жизни болезни