Тема 17. Серологические реакции. Реакции агглютинации. Реакции преципитации.

Задача № 1.

С культурой, выделенной из испражнений обследуемого, поставлена РА на стекле с адсорбированной поливалентной сальмонеллезной сывороткой. В опытной капле наблюдается феномен агглютинации с интенсивностью +++, в контроле культуры – равномерное помутнение.

1. С какой целью поставлена РА?

2. Оцените полученные результаты.

Ответ:

1. РА была поставлена с целью сероидентификации выделенной культуры на принадлежность к роду Salmonella.

2. Результаты по контролям достоверны. РА положительная. Исследуемая культура предположительно относится к роду Salmonella.

Задача № 2.

При исследовании сывороток крови обследуемых «А» и «Б» в РА (реакция Видаля) из лаборатории получены следующие результаты:

           - обследуемый «А»: реакция Видаля с брюшно-тифозным О-диагностикумом положительна в титре 1:200, с Н-диагностикумом положительна в титре 1:200, с диагностикумом ОН-паратифозным А – 1:50, с диагностикумом ОН-паратифозным В – 1:50;

           - обследуемый «Б»: - реакция Видаля с брюшно-тифозным О и Н-диагностикумом положительна в титре 1:100, с диагностикумом ОН-паратифозным А и В – отрицательна. 

1. С какой целью была поставлена реакция Видаля?

2. Оцените и интерпретируете полученные результаты.

Ответ:

1. Цель: серодиагностика брюшного тифа, паратифов А и Б.

2. У обследуемого «А» серологически диагноз паратифы А и Б не подтверждается (т.к. опытный титр меньше титра диагностического); диагноз брюшной тиф серологически подтверждается (т.к. опытный титр больше титра диагностического). У обследуемого «Б» серологически диагноз брюшной тиф, паратифы А и Б не подтверждаются.

Автор: Перьянова О.В.

 

Задача № 3.

При исследовании термоэкстракта из шкуры овец, погибших, предположительно, от сибирской язвы, использовали реакцию преципитации по Асколи.

1. Цель постановки реакции преципитации по Асколи?

2. Какие компоненты необходимы для постановки реакции?

Ответ:

1. Цель: выявление соматического, термостабильного, видоспецифического антигена бацилл сибирской язвы с целью определения инфицированности сырья бациллами сибирской язвы и профилактики риска профессионального заражения.

2. Компоненты для реакции преципитации по Асколи: исследуемый термоэкстракт из кожи овец, преципитирующая сибиреязвенная сыворотка; нормальная сыворотка кролика; изотонический раствор хлорида натрия.

 

Задача № 4.

При постановке РП по Асколи с термоэкстрактом кожи животного получен результат: КА – феномен преципитации (кольцо преципитации) на границе нормальной сыворотки и термоэкстракта; КС – отсутствие спонтанной преципитации на границе физиологического раствора и преципитирующей сыворотки; опыт – феномен преципитации (кольцо преципитации) на границе сыворотки и термоэкстракта.

1. Оцените полученные результаты.

2. Опишите суть реакции.

Ответ:

1. Реакция недостоверна по КА, т.к. в нем не должно быть феномена преципитации (кольца преципитации). Необходимо реакцию повторить.

2. Суть реакции: взаимодействие растворимого антигена и специфических антител преципитирующей сибиреязвенной сыворотки с образованием преципитата в виде кольца на границе ингредиентов.

Автор: Решетнева И.Т.

 

Задача № 5.

Иммунологическая лаборатория после исследования сыворотки больного с диагнозом «Хроническая дизентерия» путем постановки РНГА выдала результат:

1/10	1/20	1/40	1/80	1/160	КС	КА
++++	++++	++++	++++	+	норма	норма

Диагностический титр равен 1/40.

1. Укажите цель проведенного исследования.

2. Оцените полученный результат.

Ответ:

1. Серодиагностика хронической дизентерии.

2. Результаты по контролям достоверные, РНГА положительная, титр реакции равен 1/80, что выше диагностического титра, следовательно, диагноз «хроническая дизентерия» серологически подтвержден.

Автор: Решетнева И.Т.

Задача № 6.

В клинику поступил больной с предварительным диагнозом «Эпидемический паротит». Из анамнеза известно, что обследуемый был привит по возрасту живой паротитной вакциной. Для подтверждения диагноза провели серологическое исследование в динамике заболевания с использованием РПГА.

1. Какой материал был взят для исследования?

2. Суть реакции?

3. Что является критерием оценки полученных результатов с учетом данных анамнеза?

Ответ:

1. В качестве исследуемого материала использовались парные сыворотки.

2. Суть РПГА – специфическое взаимодействие антигенов вируса паротита, сенсибилизированных на эритроцитах, с антителами в сыворотке обследуемого. В случае образования иммунного комплекса антиген-антитело происходит образование осадка в виде зонтика или плотного диска, покрывающего все дно лунки.

3. Доказательством наличия острого инфекционного процесса при исследовании парных сывороток является нарастание титра антител во второй сыворотке по сравнению с первой не менее чем в 4 раза (для вирусных инфекций).

Автор: Хохлова О. Е.

 

Задача № 7.

В инфекционной больнице в течение 10 дней находится на стационарном лечении больной «М» с предполагаемым диагнозом «Шигеллез». Результаты бактериологического исследования отрицательные. При исследовании сыворотки обследуемого в реакции агглютинации получены следующие результаты:

	1/50	1/100	1/200	1/400	1/800	КС	КА
РА с диагностикумом S. flexneri	++++	++++	++++	++	+	норма	норма
РА с диагностикумом S. sonnei	-	-	-	-	-	норма	норма

Диагностический титр для S. flexneri равен 1/200.

Диагностический титр для S. sonnei равен 1/100.

1. Оцените полученный результат.

2. У кого и почему реакция агглютинации может быть положительной?

Ответ:

1. Результаты по контролям достоверны, РА положительная с диагностикумом S. flexneri в титре 1/400, что выше диагностического титра. РА с диагностикумом S. sonnei - отрицательная. Следовательно, серологически подтвержден диагноз «Шигеллез», вызванный S. flexneri.

2. Наличие антител может также свидетельствовать о перенесенной ранее инфекции, либо вакцинации. В таком случае необходимо забрать вторую сыворотку через 7-14 сут. и провести выявление специфических антител в динамике заболевания. В случае увеличения титра антител в 2 и более раз во второй сыворотке по сравнению с первой можно говорить о наличии острого инфекционного процесса.

Автор: Хохлова О. Е.

 

Тема 11. Реакция связывания комплемента. Реакции с участием меченых антител: иммуноферментный анализ (ИФА), реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

Задача № 1.

С отделяемым карбункула от обследуемого с диагнозом «сибирская язва» поставлена РИФ прямая с люминесцирующей сибиреязвенной сывороткой. При люминесцентной микроскопии обнаружены крупные светящиеся палочки размером 7-8x1-2 мкм, с обрубленными концами, располагающиеся короткими цепочками, парами, одиночно.

1. С какой целью была поставлена данная реакция?

2. Оцените полученные результаты.

Ответ:

1. Реакция поставлена для обнаружения и сероидентификация предпологаемого возбудителя в исследуемом материале с целью экспресс-диагностики сибирской язвы.

2. РИФ_П положительная, т.к. обнаруженные микроорганизмы, соответствующие по морфологическим и антигенным свойствам бациллам сибирской язвы, следовательно, предварительный диагноз у данного пациента – «сибирская язва» подтвержден.

Задача № 2.

При исследовании донорской крови на наличие HBsAg вируса гепатита В с использованием ИФА получены следующие результаты: с сыворотками 2-х обследуемых отмечено образование хромогенного продукта, с сыворотками 4-х – отсутствие образование хромогенного продукта. Контроли в норме.

1. Оцените полученные результаты.

2. Назовите суть реакции.

Ответ:

1. Результаты по контролям достоверны, ИФА положительная у 2-х обследуемых. ИФА отрицательная у 4-х обследуемых. Следовательно, у 2-х обследованных выявлен HBsAg вируса гепатита В, что свидетельствует о невозможности использования их крови. У 4-х обследуемых HBsAg не выявлен.

2. Суть реакции ИФА - специфическое взаимодействие антител к HBsAg, адсорбированных на полистероловом планшете с HBsAg в сыворотке обследуемого. Далее происходит присоединение диагностических антител к HBsAg, меченых ферментом (пероксидазой), с последующим внесением Н₂О₂ и субстрата (ОФД, МТБ). После отмывки на каждом этапе в случае образования иммунных комплексов в лунках произойдет разложение Н₂О₂ на Н₂О и активную форму кислорода, что, в свою очередь приведет к окислению субстрата (ОФД, МТБ) до окрашиваемых продуктов. В случае отсутствия иммунного комплекса не происходит образования хромогенного продукта.

Автор: Хохлова О. Е.

 

Задача № 3.

В клинику поступил больной с предварительным диагнозом «Хроническая гонорея». Для подтверждения диагноза поставлена РСК с сывороткой обследуемого. Контроли в норме. В опытной пробирке - осадок эритроцитов, надосадочная жидкость прозрачная.

1. Назовите цель исследования?

2. Оцените результаты реакции?

3. Какой диагностикум используется для постановки РСК?

4. Назовите суть реакции, схему постановки и критерии учета.

Ответ:

1. Целью данной реакции является серодиагностика хронической гонореи.

2. Результаты достоверны по контролям, РСК положительная. Диагноз «хроническая гонорея» серологически подтвержден.

3. В качестве диагностикума используется антиген гонококков.

4. Суть реакции связывания комплемента – образование иммунного комплекса антиген-антитело с последующей активацией и связыванием комплемента. Результат визуально не виден. Для визуализации результата используется индикаторная система, состоящая из эритроцитов барана (антиген) и гемолитической сыворотки (антитела к эритроцитам барана).

В случае присутствия специфических антител в сыворотке обследуемого, произойдет образование комплекса антиген-антитело, что в свою очередь приведет к активации комплемента, который свяжется с компонентами первой системы. Следовательно, при добавлении в данную пробирку компонентов второй индикаторной системы, произойдет выпадение эритроцитов в осадок. Это свидетельствует о положительной реакции.

Если в сыворотке обследуемого отсутствуют антитела, то не происходит образования комплекса антиген-антитело в первой системе, следовательно, комплемент не связывается компонентами первой системы. При добавлении индикаторной системы происходит связывание и активация комплемента иммунным комплексом второй системы, что приводит к лизису эритроцитов.

При окончательном учете интенсивность реакции выражают плюсами: (++++) – резко положительная реакция, характеризующаяся полной задержкой гемолиза; (+++, ++) – положительная реакция, проявляющаяся наличием окраски жидкости вследствие гемолиза и уменьшения эритроцитов в осадке; (+) – слабоположительная (жидкость интенсивно окрашена, на дне пробирки незначительное количество эритроцитов). При отрицательной реакции (-) наблюдается полный гемолиз, жидкость в пробирке имеет интенсивно розовую окраску (лаковая кровь).

Автор: Хохлова О. Е.

 

Задача № 4.

Мужчина обратился в СПИД-центр для анонимной диагностики ВИЧ-инфекции. Проведено серологическое исследование сыворотки с использованием ИФА. В лунках с заведомо положительным контролем – отмечено образование хромогенного продукта, с заведомо отрицательным контролем – отсутствие образования хромогенного продукта, в опытной лунке – отсутствие образования хромогенного продукта.

1. Назовите цель исследования;

2. Оцените полученные результаты;

3. Суть реакции.

Ответ:

1. Цель – серодиагностика ВИЧ-инфекции.

2. Результаты по контролям достоверны, ИФА отрицательная. Следовательно, у обследованного не выявлены антитела к ВИЧ, что может свидетельствовать об отсутствии заболевания ВИЧ, если сыворотка была взята с учетом особенностей иммуногенеза при данном заболевании.

3. Суть реакции - специфическое взаимодействие антигенов ВИЧ, адсорбированных на дне лунок полистероловых планшетов и антител в сыворотке обследуемого к антигенам ВИЧ. Далее после промывки вносится сыворотка, содержащая антиглобулиновые антитела, меченные ферментом (пероксидазой), с последующим внесением Н₂О₂ и хромогенного субстрата. В случае сохранения иммунных комплексов в лунках произойдет разложение Н₂О₂ на Н₂О и активную форму кислорода, что, в свою очередь приведет к окислению хромогенного субстрата до окрашиваемых продуктов. В случае отрицательных результатов, образования хромогенного продукта не произойдет вследствие отсутствия иммунного комплекса.

Автор: Хохлова О. Е.

 

Задача № 5.

В инфекционную больницу поступил больной с жалобами на неукротимую рвоту и частый жидкий стул. В анамнезе был контакт с больным холерой. Для подтверждения предварительного диагноза «Холера» был проведен бактериологическое исследования испражнений больного. Помимо классической схемы исследования с выделенной культурой была поставлена реакция бактериолиза.

1. С какой целью было проведено данное исследование?

2. Суть реакции, схема постановки и критерии учета?

Ответ:

1. Реакция бактериолиза была поставлена с целью сероидентификации исследуемой культуры.

2. Суть реакции лизиса – растворение антигена, соединенного с антителами, в присутствии комплемента. Схема постановки – инкубирование смеси из взвеси исследуемой культуры, иммунной сыворотки, содержащей антитела к искомому антигену и комплемента, с последующим высевом на плотную питательную среду. После инкубации при 37⁰С в течение суток производят подсчет колоний. Критерием положительной реакции является значительное уменьшение числа колоний, выросших из содержимого опытной пробирки, по сравнению с контрольной.

Автор: Хохлова О. Е.

 

Тема 19. Вакцины, сыворотки, иммуноглобулины, аллергены. Контроль по теме: Иммунобиологические препараты. Антимикробные химиопрепараты.

Задача № 1.

Укажите, какие требования предъявляются к штаммам микророганизмов, используемых для изготовления:

1. живых вакцин?

2. убитых, корпускулярных вакцин?

3. Особенности хранения и транспортировки такого рода иммунобиологических препаратов?

Ответ:

1. Для изготовления живых вакцин необходимо чтобы штаммы микроорганизмов, входящих в состав сохраняли остаточную вирулентность, иммуногенность, полный набор антигенов.

2. Для изготовления убитых, корпускулярных вакцин необходимо: антигенность, иммуногенность, полный набор антигенов.

3. Данные препараты относятся к группе иммунобиологических препаратов, следовательно, при хранении и транспортировке необходимо соблюдать условия «холодовой цепи».

Автор: Хохлова О.Е.

Задача № 2.

Заболевшему дифтерией была введена противодифтерийная антитоксическая сыворотка (50000 МЕ).

1. Как получают противодифтерийную антитоксическую сыворотку?

2. Способы введения данного препарата?

3. Особенности хранения и транспортировки?

Ответ:

1. Противодифтерийную антитоксическую сыворотку получают либо путем гипериммунизации животных (лошадей) анатоксином с последующей очисткой – гетерологичные сыворотки; либо от переболевших или вакцинированных людей – гомологичные препараты.

2. Гетерологичные сыворотки для предупреждения развития аллергической реакции на чужеродный белок вводят дробно, по методу А.М. Безредко. Гомологичные сыворотки вводят внутримышечно.

3. Данные препараты относятся к группе иммунобиологических препаратов, следовательно, при хранении и транспортировке необходимо соблюдать условия «холодовой цепи».

Автор: Хохлова О.Е.

Задача № 3.

Пострадавшему в автомобильной катастрофе после оказания хирургической помощи была введена противостолбнячная сыворотка.

1. Что содержит препарат и для чего был использован?

2. Возможны ли осложнения при введении препарата и какие?

3. Как правильно ввести препарат, чтобы избежать осложнений?

Ответ:

1. Препарат содержит антитела к токсину возбудителя столбняка. Препарат был введен с целью экстренной специфической профилактики столбняка.

2. Осложнения возможны – анафилактический шок или сывороточная болезнь.

3. Чтобы избежать осложнений необходимо ввести препарат дробно по методу А.М. Безредки.

Автор: Осипова Н.П.

 

Задача № 4.

Ребенку 5 лет в детском саду поставлена кожно-аллергическая проба с туберкулином (проба Манту). Через 72 ч в месте введения препарата образовалась папула диаметром 4 мм.

1. С какой целью ставился данный диагностический препарат?

2. Особенности хранения и транспортировки данного диагностического препарата?

Ответ:

1. Цель – выявление гиперчувствительности замедленного типа с целью диагностики туберкулеза.

2. Данный диагностический препарат – туберкулин необходимо хранить и транспортировать с соблюдением условий «холодовой цепи».

Автор: Хохлова О.Е.

 

Задача № 5.

На фармацевтическом предприятии выпускаются следующие иммунобиологические препараты: 1. Вакцина паротитная; 2. Вакцина коревая; 3. Вакцина «Гриппол».

1. Для чего предназначены данные препараты?

2. К какому виду относятся полученные вакцины?

3. При изготовлении каких из вышеуказанных вакцин используют адьюванты? Обоснуйте.

Ответ:

1. Вакцина паротитная используется для специфической профилактики паротита. Вакцина коревая используется для специфической профилактики кори. Вакцина «Гриппол» - для специфической профилактики гриппа.

2. Вакцины паротитная и коревая – живые, аттенуированные; вакцина «Гриппол» - субъединичная.

3. При высокой степени очистки антигена его иммуногенная активность уменьшается, следовательно, при изготовлении расщепленных и субъеденичных (химических) вакцин необходимо использовать адъюванты, т.е. вещества, усиливающие иммунный ответ на введенную вакцину. Таким образом, из вышеперчисленных вакцин адъювант необходим в изготовлении «Гриппола» (используют синтетический адъювант - полиоксидоний).

Автор: Хохлова О.Е.

 

Задача № 6.

В центр СПИД г. Красноярска поступила партия иммунобиологических препаратов: гомологичные и гетерологичные сыворотки и иммуноглобулины различного назначения.

1. Назовите способы получения и применения данных препаратов.

2. Приведите примеры.

Ответ:

Гомологичные специфические иммуноглобулины (противостолбнячный, противоботулинический, против клещевого энцефалита, гепатита В, коклюшный антитоксический) получают из сыворотки (плазмы) доноров или целенаправленно привитых соответствующим препаратом или отобранной по результатам определения в них высокого уровня антител. За рубежом выпускают также иммуноглобулин человеческий (ИГЧ) антирабический, против вируса ветряной оспы, цитомегаловирусной инфекции.

К группе ИГЧ для внутривенного введения, выпускаемых в России или рекомендованных к применению, относятся: ИГЧ нормальный, ИГЧ антистафилококковый, ИГЧ противоботулинический, ИГЧ противодифтерийный. Внутривенно также применяют специфическую иммунную плазму человека – антистафилококковую, антипротейную, антисинегнойную.

При использовании ИГЧ, предназначенных для внутривенного введения, в целях профилактики коллаптоидных реакций необходимо соблюдать указания инструкций о разведении препарата и скорости его введения.

Гетерологичные сыворотки и иммуноглобулины. Препараты гетерологичных сывороток используют в основном для экстренной профилактики и лечения токсинемических (столбняк, дифтерия, ботулизм, газовая гангрена), а также некоторых вирусных (бешенство, клещевой энцефалит, японский эн­цефалит, венесуэльский энцефаломиелит лошадей, лихорадка Эбола) и бактериальных (сибирская язва, лептоспироз) инфекций.

Получение антитоксических и антимикробных сывороток основано на многократной иммунизации животных (в основном, лошадей) препаратами анатоксинов и токсинов (антитоксические сыворотки) или микробными клетками. Являясь чужеродным для человека белком, они потенциально опасны, неся угрозу развития тяжелых аллергических реакций, в том числе сывороточной болезни и анафилактического шока. Чтобы избежать осложнений, необходимо ввести препарат дробно по методу А.М. Безредки, в концентрации строго по инструкции.

Автор: Осипова Н. П.