Определение содержания панаксозидов Rg1 и Rb1

Методика жидкостной хроматографии ГФ РБ и БФ отличала от методики ЯФ в том, что методики приготовили разные испытуемые растворы, разные растворы сравнения и разные подвижные фазы, и естественно имели разные результаты. (таблица 2.7)

 

Таблица 2.7 - Определение содержания панаксозидов Rg1 и Rb1. Жидкая хроматография. (1)

	ГФ РБ и БФ	ЯФ
Испытуемый раствор	-1,0 г измельченного сырья помещают в круглодонную колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 70 мл 50% раствора метанола Р, добавляют несколько кусочков пемзы и кипятят с обратным холодильником на водяной бане в течение 1 ч. - Охлаждают, центрифугируют и собирают надосадочную жидкость. Остаток переносят в ту же круглодонную колбу и повторяют экстракцию. - Надосадочные жидкости объединяют и выпаривают досуха при пониженном давлении при температуре не выше 60°С. - Остаток растворяют в 20,0 мл смеси из ацетонитрила Р и воды Р (20:80). -2,0 мл полученного раствора разводят смесью из ацетонитрила Р и воды Р (20:80) до объема 10,0 мл и фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.	-1,0 г измельченного сырья помещают в стеклянную пробкую пробирку центрифуги, добавляют 30 мл разведенного метаноле (3:5), встряхивают в течение 15 минут, центрифугируют, и отделяют верхний слой жидкости. - Повторяют процедуру с остатка с 15 мл разведенного метаноле (3:5), объединяют надосадочную жидкость, добавляют разбавленный метанолом (3:5), до 50 мл. - Внесут 10 мл этого раствора, добавляют 3 мл разбавленного гидроксида натрия TS, дать постоять в течение 30 минут, добавляют 3 мл 0,1 М соляной кислоты TS и разбавленного метанола (3:5), до 20 мл.
Раствор сравнения	3,0 мг панаксозида Rg1 Р, 3,0 мг панаксозида Re Р, 3,0 мг панаксозида Rf Р и 3,0 мг панаксозида Rb1 Р растворяют в метаноле Р и доводят до объема 10,0 мл этим же растворителем.	10 мг панаксозида Rg1 РС растворяют в метаноле (3:5), до 100 мл и используют этот раствор в качестве стандартного раствора. Выполните проверку с 10 мл раствора.
Условия хроматографирования	· спектрофотометрический детектор: длина волны 203 нм. · Колонка: длиной 0,125 м и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная силикагелем октадецилсилильным для хроматографии Р с размером частиц 5 мкм. · Температура: 35°С. · Подвижная фаза: o Подвижная фаза А: вода Р, доведенная кислотой фосфорной Р до рН 2. o Подвижная фаза B: ацетонитрил Р. · Скорость подвижной фазы: 1,0 мл/мин. · Время уравновешивания системы: 20 мин перед каждым вводом. · Объем вводимой пробы: 20 мкл. Порядок выхода пиков: панаксозид Rg1, панаксозид Re, панаксозид Rf и панаксозид Rb1. Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения.	· Детектор: ультрафиолетовый спектрофотометр (длина волны: 203 нм). · Колонка: длиной 0,15 м и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная силикагелем октадецилсилильным для хроматографии Р с размером частиц 5 мкм. · Температура: постоянная температура около 30°С. · Подвижная фаза: смесь воды и ацетонитрила (4:1). · Время удерживания панаксозида Rg1: около 25 минут. · пригодность Системы: o Производительность системы: Растворите 1 мг панаксозида RG1 РС и 1 мг панаксозида Re в разбавленном метаноле (3:5) до 10 мл. Процедура выполняется с 10 мл этого раствора. o Воспроизводимость системы: Испытание повторяют 6 раз с 10 мл стандартного раствора.

 

 

Результаты ГФ РБ и БФ: Разрешение между пиками панаксозида Rg1 и панаксозида Re не менее 1,0. (рисунок 2.4)

Содержание панаксозида Rg1 и панаксозида Rb1 в процентах рассчитывают по формуле 2.3

 

 

где:- площадь пика панаксозида Rb1 на хроматограмме испытуемого раствора;- площадь пика панаксозида Rg1 на хроматограмме испытуемого раствора;- площадь пика панаксозида Rb1 на хроматограмме раствора сравнения;- площадь пика панаксозида Rg1 на хроматограмме раствора сравнения;- масса навески испытуемого сырья, г;- масса навески панаксозида Rb1 в растворе сравнения, мг;- масса навески панаксозида Rg1 в растворе сравнения, мг;

Р1 - содержание панаксозида Rb1 в реактиве, %;

Р2 - содержание панаксозида Rg1 в реактиве, %.

Результаты ЯФ: панаксозида Rg1 и панаксозида Re элюируют с разрешением между этими пиками составляет не менее 1,5.

Относительное стандартное отклонение площади пика панаксозида Rg1 составляет не более 1,5%.

Содержание панаксозида Rg1 рассчитывают по формуле 2.4

 

 

Где:

M_S - Количество (мг) панаксозида Rg1 RS, в расчете на безводную основу.

A_T - площадь пика панаксозида Rg1 на хроматограмме испытуемого раствора._S - площадь пика панаксозида Rg1 на хроматограмме раствора сравнения.