Стандартизация лекарственного растительного сырья

 

При сравнении описаний и методов анализа (на подлинность, испытания, количественное определение и хранение) государственной фармакопеи республики Беларусь (далее - ГФ РБ) с британской фармакопеи (далее - БФ) и японской фармакопеи (далее - ЯФ), были сделаны следующие выводы:

ГФ РБ и БФ имели практически идентичную описанию сырья, но ЯФ отличалась тем, что требовала, чтобы корешки были удалены, и содержала дополнительное описание о корне, который был обработан в горячей воде.

Насчет содержания, ГФ РБ в отличии от БФ, не допускала менее 1% суммы панаксозидов Rb1. С другой стороны, ЯФ допускала до 0,1% суммы панаксозидов Rg1 и до 0,2% суммы панаксозидов Rb1. (таблица 2.2)

Итак, можно прийти к выводу, что описание ГФ РБ требует наиболее качественного сырья чем БФ и ЯФ.

 

Таблица 2.2 - Описания

	ГФ РБ	БФ	ЯФ
Описания	Цельные или разрезанные на части высушенные корни (белый женьшень) или обработанные паром и затем высушенные корни (красный женьшень) Panax ginseng C.A. Meyer.	Целый или нарезанный высушенный корень, обозначенный белый женьшень; или обработанный паром, а затем сушеный, обозначенный красный женьшень, из женьшеня C.A. Meyer.	Женьшень является корнем женьшеня C.A. Meyer, из которого корешки были удалены, или корень, который был быстро пройден через горячую воду.
Содержание	Содержат не менее 0,4% суммы панаксозидов Rg1 (C42H72O14·2H2O) и Rb1 (C54H92O23·3H2O). В пересчете на сухое сырье,или не менее 1% суммы панаксозидов в пересчете на панаксозид Rb1 (C54H92O23·3H2O) в сухом сырье.	Минимум 0,4% на сумму панаксозидов Rg1 (C42H72O14·2H2O) и Rb1 (C54H92O23·3H2O) (сухое средство).	Содержит не менее 0,1% от панаксозидов Rg1 (C42H72O14) и не менее 0,2% от панаксозидов Rb1 C54H92O23), в пересчете на сухом сырье.

 

Подлинность

Содержа не большие разницы, ГФ РБ, БФ и ЯФ имели следующие требования:

Внешние признаки

Отличие заключала в том, что ЯФ содержала описания вкуса и запаха, которые отсутствовали в БФ, а в ГФ РБ отсутствовало лишь описание вкуса. (таблица 2.3)

Немаловажный момент что все три фармакопеи рассказали про специфическую характеристику белого женьшеня, отличающая его от красного женьшеня: «В нижней части белого женьшеня имеются многочисленные мелкие корешки, которые обычно отсутствуют в красном женьшене».

 

Таблица 2.3 - Внешние признаки

	ГФ РБ	БФ	ЯФ
Форма	Цилиндрические. Могут быть изогнутыми.	Веретенообразный или цилиндрический, иногда разветвленный. Могут быть изогнутыми.	Тонкий и длинный цилиндрический или веретенообразный
Размеры	Длина до 20 см, диаметр до 2,5 см.	Длина до 20 см, диаметр до 2,5 см.	Длина 5 - 20 см, диаметр 0,5 - 3 см.
Характер поверхности	Имеется продольные морщины и ответвления.	Имеется продольные морщины.	Имеется продольные морщины и шрамы корешков с короткими остатками корневищем
Характер излома	Ровный.	Короткий.	Поверхность практически плоская, светло-желто-коричневого цвета, и коричневый в окрестности камбия.
Цвет	От бледно-желтого до белого с желтоватым оттенком цвета или коричневато-красного цвета.	Поверхность светло-желтого до кремового, или красно-коричневый.	Светло-желто-коричневого до светло-серо-коричневого цвета.
Запах	Специфический	-	Специфический
Вкус	-	-	Сначала слегка сладкий, с последующим легким горечи

 

Микроскопия

Микроскопическая методика отсутствовала в ЯФ, а ГФ РБ и БФ имели одну и ту же методику. (таблица 2.4)

 

Таблица 2.4 - Микроскопия

	ГФ РБ и БФ	ЯФ
При использовании раствора хлоралгидрата Р видны:	· Многочисленные фрагменты тонкостенных паренхиматозных клеток. · Фрагменты крупных секреторных каналов, содержащих смолу желтовато-коричневого цвета. · Нелигнифицированные трахеиды. · Частично лигнифицированные сосуды со спиральной или сетчатой утолщенностью по отдельности, или группами. · Рассеянные друзы оксалата кальция.
При использовании 50% раствора глицерина Р в измельченном сырье видны:	· многочисленные крахмальные зерна, простые или 2-6-сложные, диаметром от 1 мкм до 10 мкм.

Тонкослойная хроматография

Методика ГФ РБ и БФ отличала от методики ЯФ, так как методики приготовили разные испытуемые растворы, разные растворы сравнения и разные подвижные фазы, и естественно имели разные результаты.

 

 

 

Результаты ГФ РБ и БФ: переведены на рисунке 2.3

Результаты ЯФ: один из пятен из раствора образца имеет тот же цветовой тон и значение Rf с пятном из стандартного раствора.

 

Таблица 2.5 - Тонкослойная хроматография

	ГФ РБ и БФ	ЯФ
Испытуемый раствор	К 1,0 г измельченного сырья прибавляют 10 мл 70% раствора метанола Р. Кипятят с обратным холодильником в течение 15 мин. Охлаждают, фильтруют и доводят метанолом Р до объема 10,0 мл.	К 2,0 г измельченного сырья прибавляют 10 мл воды и 10 мл 1-бутанола, встряхивают в течение 15 минут, центрифуги, и используют надосадочную жидкость в качестве раствора образца.
Раствор сравнения	5,0 мг эсцина Р и 5,0 мг арбутина Р растворяют в 1 мл метанола Р.	Отдельно растворяют 1 мг панаксозида Rg1 в 1 мл метанола
Пластинка	ТСХ пластинка со слоем силикагеля Р (5-40 мкм) или [(2-10 мкм)].	ТСХ пластинка со слоем силикагеля Р
Подвижная фаза	этилацетат Р - вода Р - бутанол Р (25:50:100), используют верхний слой после отстаивания в течение 10 мин. Камеру не насыщают парами подвижной фазы.	Этилацетат Р - метанол Р - вода Р (14:05:04) до расстоянии примерно 10 см,
Наносимый объем пробы	по 20 мкл [4 мкл] в виде полос.	-
Фронт подвижной фазы	не менее 10 см [5 см] от линии старта.	-
Высушивание	на воздухе.	на воздухе.
Проявление	пластинку опрыскивают раствором анисового альдегида Р. Нагревают при температуре от 105°С до 110°С в течение 5-10 мин. Просматривают при дневном свете.	Спрей равномерно ванилин-серной кислоты-этанол TS для распыления на тарелке, и нагревают при 105°C в течение 10 минут.

 

Испытания

Единственное отличие между ГФ РБ и БФ было про Допустимые примеси, так как в БФ это требование отсутствовала. А если сравнить оба фармакопеи с ЯФ, то последняя имела дополнительные требования при Очищенности и извлечение содержимого, с другой стороны, в нее отсутствовала требования «Panax quinquefolium» а также требования золы, нерастворимой в хлористоводородной кислоте. (таблица 2.6)

 

Таблица 2.6 - Испытания

	ГФ РБ	БФ	ЯФ
Допустимые примеси	не более 2%.	-	не более 2%.
Очищенность	-		· Тяжелые металлы: не более 15 ppm. 1,0 г измельченного сырья готовить по способу 4. Подготовка контрольного раствора с 1,5 мл Стандартное раствором · Мышьяк: не более 2 ppm. 1,0 г измельченного сырья готовить по способу 4. · Сумма BHC’s, и сумма DDT’s: не более 2 ppm соответственно.
Panax quinquefolium	Просматривают хроматограмму, полученную в разделе «Количественное определение. Определение содержания суммы панаксозидов Rg1 и Rb1». В случае замены корней Panax ginseng на корни Panax quinquefolium на хроматограмме испытуемого раствора отсутствует пик, соответствующий панаксозиду Rf (рисунок 2.4).		-
Потеря в массе при высушивании	Не более 10,0%. 1,0г измельченного сырья сушат при температуре от 100°С до 105°С.		не более 14.0% (6 часов).
Общая зола	Не более 7,0%.		не более 4.2%.
Зола, нерастворимая в HCl	Не более 1,0%.		-
Извлечение содержимого	-		не менее 14.0%. Разбавляют этанолом растворимый экстракт.

 

Количественное определение