Основные правила взятия, транспортировки и хранения проб крови

 

Как видно из представленной схемы, условия взятия крови и ее сохранность до начала лабораторных исследований имеют важное значение при получении достоверных результатов.

Во многом эти результаты зависят от техники взятия крови и используемых при этой инструментов.

В организме различает артериальную, венозную и капиллярную кровь, которая имеет незначительные цитологические и биохимичес­кие отличия. Для морфологических исследований пользуются почти ис­ключительно капиллярной кровью, а при биохимических – венозной

Капиллярную кровь берут из внутренней поверхности ушной рако­вины. У птиц - из гребня, сережек, мякоти ступни. Укол делают иг­лой Франка со сменными стилетами, ланцетом Михаэлиса-Дженнера или оспопрививательным пером, подвергнутых стерилизации.

Шерсть или перо на месте взятия крови выстригают, очищают место укола ватным тампоном, смоченным спиртом-эфиром. Укол делают на глубину до 2 мм. Первую каплю крови стирают, т.к. она содержит случайные примеси и лимфу, а последующие берут для исследования. Очень важно, чтобы кровь вытекала из ранки без надавливания на ткани, иначе она смешивается с лимфой и изменяет свой клеточный и биохимический состав. Истечение крови можно ускорить, если предварительно прогревать место укола в теплой воде или источни­ком сухого тепла (фен, электролампа).

Для получения большого количества крови у лошадей, крупного и мелкого рогатого скота, верблюдов делают венепункцию (прокол яремной воин). У птиц кровь берут из под кольцевых сосудов или из сердца. У свиней кровь получают из крупных сосудов ушной ра­ковины или из сосудов хвоста, путем отсечения его кончика.

При венепункции прокол окружающих вену тканей и стенки веян делают в один прием. Иглы для взятия крови должны быть с коротким срезом и достаточно большим диаметром, чтобы не травмировать про­тивоположную стенку вены и не вызвать повреждения эритроцитов. Предварительно иглы стерилизуют кипячением в 1%-ном растворе би­карбоната натрия, место вкола обрабатывают аналогично получению капиллярной крови.

При взятии крови из яремной вены иглу вкалывают на границе перехода верхней трети шеи в среднюю. Чтобы вызвать достаточное наполнение вены и уменьшать ее подвижность, вену сдавливает в середине шеи резиновым жгутом или пальцем. При проколе вены необхо­димо держать иглу в руке так, чтобы направление ее совпало с лини­ей хода вены и чтобы срез иглы был направлен вверх, к голове. Иглу вкалывают под острым углом - в 20-30°. При попадании в вену из иглы вытекает кровь.

Кровь должна стекать по стенке пробирки по избежании разруше­ния эритроцитов и при необходимости немедленно смешиваться с дос­таточным количеством антикоагулянта.

Перед извлечением иглы из вены резиновый жгут снимают, пережимают вену пальцем выше места вкола, иглу извлекают, а место вкола некоторое время сдавливают тампоном для предотвращения образования гематомы. В заключении область венепункции дезинфицируют настойкой йода и заливают колодием.

В зависимости от характера исследований готовят определенное количество пробирок. Стенки стеклянной посуды способны обменивать­ся ионами с кровью, а следы моющих средств и поврежденные пробирки влияют на активность, ферментов. Это можно исключить, если ис­пользовать пластмассовые, пробирки одноразового пользования; для некоторых исследований стенки стеклянных пробирок покрывают слоем парафина или силиконового масла.

В зависимости от задач исследования анализу подвергают цель­ную кровь, плазму или сыворотку.

В цельной крови определяют морфологические показатели, а так­же содержание глюкозы, кетоновых тел, меди, цинка, кобальта, мар­ганца, селена и др., т.е. веществ, равномерно распределенных меж­ду плазмой и эритроцитами. Для исследования веществ, неравномерно распределенных между клетками и жидкой частью крови, следует ис­пользовать сыворотку или плазму. В сыворотке, например, исследуют общий белок и его фракции, остаточный азот, мочевину, свободные аминокислоты, липиды, холестерин, билирубин, кальций, неорганичес­кий фосфор, магний, йод, связанный с белком (СБЙ), каротин, вита­мины, ферменты и др. В плазме - резервную щелочность, содержание натрия, калия, неорганического фосфора, магния, каротина, витами­нов А,С и др.

Для получения пробы цельной крови или плазмы ее стабилизиру­ют, т.е. в пробирку вносят противосвертывающее вещество - анти­коагулянт. Антикоагулянты лучше применять в виде растворов.

В расчете на 15-20 мл крови берут следующее количество анти­коагулянтов: 2-3 капли 1%-ного раствора гепарина или 3-4 капли 10%-ного раствора этилендиаминтетрауксусной кислоты натриевой соли (ЭДТА-натрия, трилон Б), 0,5-1,0 мл 20%-ного водного раствора лимонно- или щавелевокислого натрия, 0,5-1,0 мл 10%-ного раствора фтористого натрия на физиологическом растворе хлористого натрия. При подсчете форменных элементов крови электронными приборами ста­билизаторы готовят по специальным прописям.

Использование того или другого антикоагулянта определяется направлением исследования и сроками хранения. Так кровь, стабилизированная лимоннокислым или щавелевокислым натрием можно хранить не более суток. При изучении клеточного состава крови гепарин ис­пользуют только для немедленных исследований, в противном случае он вызывает постепенное "старение" клеток и их распад. Повышенные дозы антикоагулянтов могут вызывать гемолиз эритроцитов или разве­дение пробы. Неверный выбор солей антикоагулянтов приводит к ис­кажению результатов: ЭДТА-натрия и оксалат понижают содержание кальция; соли калия или натрия повышают содержание в пробе этих электролитов. Особенно чувствительны к введению посторонних ве­ществ ферменты клеток и плазмы крови - при их определении исполь­зуют цитратноглюкозную и другие специальные смеси.

Для получения сыворотки пробирки с кровью рекомендуется в процессе взятия крови помещать в термостат с температурой до 38°С. При массовых обследованиях животных таким импровизированным тер­мостатом может быть достаточная емкость с водой указанной темпе­ратуры. После завершения работ по взятию крови, свернувшиеся про­бы обводят тонкой спицей из нержавеющей стали для лучшего отделе­ния сыворотки и ставят в термостат при 37-38°С на 1-2 часа для окончательного отделения сыворотки. Сыворотку сливают и центрифу­гируют 20 минут при 2000-3000 об/мин.

Для получения плазмы кровь с антикоагулянтом центрифугируют 20-30 минут при 2000-3000 об/мин. Плазма крови отличается от сы­воротки наличием фибриногена.

Цельную кровь, плазму и сыворотку для непродолжительного хра­нения помещают в холодильник (+2...+4°С), длительное хранение сыво­ротки требует температуры - 20°С.

Нарушение условий хранения проб может стать причиной погреш­ностей анализа. В результате длительного стояния сыворотки, над эритроцитами могут наступить сдвиги в концентрации ряда компонен­тов: повышается концентрация калия, активности кислой фосфатазы, аминотрансфераз, лактатдегидрогеназы, гидроксибутиратдегидрогеназы, понижается содержание глюкозы вследствие гликолитических про­цессов. При температуре около 20°С в цельной крови возрастает со­держание аммиака, многие ферменты даже при температуре холодиль­ника быстро теряют свою активность (креатинкиназа, кислая фосфатаза), в лактатдегидрогеназа, напротив, быстрее теряет активность при низких температурах.

Возникший при взятии или хранении гемолиз эритроцитов приво­дит к повышению концентрации калия, активности кислой фосфатазы, аминотрансфераз, лактатдегидрогеназы, гидроксибутиратдегидрогена зы. Неумелое встряхивание проб при перемешивании их содержимого или при транспортировке также может вызвать гемолиз эритроцитов.

При проведении специальных исследований нужно внимательно следить за выполнением особых, оговоренных в описании методик пра вил взятия, консервации и хранения проб крови.