Виділення муцину із слини і проведення якісної реакції на вуглеводний компонент

Принцип методу: виділення муцину (або інших глікопро-теїнів та протеогліканів) ґрунтується на властивості добре розчинятись у лугах і осаджуватись при підкисленні розчину.

Хід роботи: у пробірку збирають 2-3 мл слини і по краплях додають концентровану оцтову кислоту (10-12 крапель) до утворення осаду. Згусток муцину виймають, переносять у пробірку та проводять якісну реакцію на вуглеводний компонент. Для цього в пробірку з муцином додають 1-2 краплі 1% спиртового розчину α-нафтолу і по стінці пробірки повільно вливають піпеткою такий самий об΄єм концентрованої сірчаної кислоти. Фіолетово-червоне кільце на межі двох шарів рідини свідчить про наявність вуглеводів.

Якісне визначення гемінової групи гемоглобіну (бензидинова реакція)

Принцип методу: виявлення гемінової групи ґрунтується на їх здатності окиснювати бензидин за допомогою перекису водню, утворюючи сполуку синього кольору, що поступово може переходити в червоний. Ця дуже чутлива реакція використовується для виявлення навіть мінімальних кількостей крові в біологічних рідинах і широко застосовується в клінічній та судовій медицині.

Хід роботи: у пробірку вливають 5 крапель 1% розчину крові, 5 крапель 1% розчину бензидину у крижаній оцтовій кислоті, 2-3 краплі 3% розчину пероксиду водню і спостерігають за появою синього або зеленого забарвлення.

Виділення та гідроліз нуклеопротеїнів

Принцип методу: нуклеопротеїни у великій кількості наявні в тканинах, багатих на ядра (селезінка, печінка, щитовидна залоза, дріжджі). В основі виділення нуклеопротеїнів лежить їх властивість утворювати в΄язкі речовини в солях середньої концентрації (2М NаСІ) і знову випадати в осад при розведенні (до 0,15М) у вигляді довгих ниток.

Хід роботи: у ступку поміщають 2-3 г селезінки і розтирають, поступово додаючи 20-30 мл 2М хлориду натрію. Утворюється в΄язкий розчин, який фільтрують через подвійний шар марлі в склянку з дистильованою водою, кількість якої в 5-6 разів перевищує кількість фільтрату, обережно намотують на паличку нитки нуклеопротеїну і переносять у пробірку. Нитки нуклеопротеїну розчиняють в 1 мл 0,4% розчину NаОН і розділяють на дві пробірки. У першій пробірці визначають наявність білка за допомогою біуретової реакції, а в другій – ДНК - реакцією з дифеніламіном.

Реакція на ДНК

До розчину нуклеопротеїну (15-20 крапель) додають такий самий об΄єм дифеніламінового реактиву. Суміш нагрівають на киплячій водяній бані протягом 15 хв і спостерігають появу синього забарвлення, яке виявляє наявність дезоксирибози.

Гідроліз нуклеопротеїнів дріжджів та виявлення вуглевод-ного компонента

Принцип методу: для вивчення складу нуклеопротеїнів дріжджів проводять їх кислотний гідроліз.

Хід роботи: до 2,5 г дріжджів додають 20 мл 10% розчину сірчаної кислоти. Суміш переносять у круглодонну колбу на 100 мл з повітряним холодильником. Гідроліз проводять протягом 1 год.

Студенти отримують готовий гідролізат, з яким проводять якісні реакції на вуглеводний компонент.

4.1 Реакція на вуглеводи з α-нафтолом

Хід роботи: до 5 крапель гідролізату дріжджів додають 3 краплі 0,2% спиртового розчинуα - нафтолу і 20 крапель концентрованої сірчаної кислоти. З΄являється рожево-фіолетове забарвлення.

 

 

4.2 Реакція на дезоксирибозу і рибозу

Хід роботи: до 5 крапель гідролізату дріжджів додають 20 крапель 1% розчину дифеніламіну і кип΄ятять на водяній бані протягом 15 хв. З΄являється синьо-зелене забарвлення.

 

Після проведення експериментальної частини роботи ви повинні оформити протокол лабораторної роботи.

 

Виконайте завдання та перевірте правильність їх розв’язання з еталоном відповіді.

Завдання 1

Хворий прийнятий у реанімаційне відділення з підозрою на отруєння чадним газом (монооксидом вуглецю). Яка сполука гемоглобіну буде виявлена при спектральному аналізі?

A. Карбоксигемоглобін.

B. Карбгемоглобін.

C. Метгемоглобін.

D. Оксигемоглобін.

E. Дезоксигемоглобін.

Еталон відповіді: А.

 

Завдання 2

Поряд з нормальними типами гемоглобіну в організмі дорослої людини можуть бути патологічні. Назвіть один із них.

A. HbS.

B. Hb.

C. HbA₁.

D. HbA₂.

E. HbO₂.

Еталон відповіді: А.

 

Завдання 3

У хворого виявлена серпоподібно-клітинна анемія. Заміна якої амінокислоти в поліпептидному ланцюгу Hb на валін призводить до цього захворювання?

A. Глутамінової кислоти.

B. Аспарагінової кислоти.

C. Лейцину.

D. Аргініну.

E. Треоніну.

Еталон відповіді: А.

 

Завдання 4

Гемоглобін дорослої людини (HbA) – білок-тетрамер, який склада-ється з двох альфа- та двох бета-поліпептидних ланцюгів. Яку назву має така структура цього білка?

A. Четвертинна.

B. Третинна.

C. Вторинна.

D. Первинна.

Еталон відповіді: А.

 

Завдання 5

Яка речовина надає слині в’язкого, слизистого характеру, виконує захисну роль, запобігає механічному пошкодженню слизової оболонки ротової порожнини?

А. Лізоцим.

В. Глюкоза.

С. Калікреїн.

Д. Амілаза.

Е. Муцин.

Еталон відповіді: Е.

Завдання 6

Споживання брудних овочів і фруктів протягом тривалого часу призвело до отруєння пацієнта нітратами і утворення в крові похідного гемоглобіну:

A. Hb-OH.

B. Hb СО.

C. Hb O₂.

D. Hb CN.

E. Hb NHCOOH.

Еталон відповіді: А.

 

Завдання 7

Робітник цеху з виробництва нітросполук звернувся до лікаря із скаргами на задишку та швидку втомлюваність. При обстеженні хворого виявлено ціаноз нижніх кінцівок. Яка причина цього стану?

A. Посилене метгемоглобіноутворення.

B. Гіповітаміноз.

C. Гіпервітаміноз.

D. Жирова інфільтрація печінки.

E. Авітаміноз.

Еталон відповіді: А.

Завдання 8

У дитини на 3-й місяць після народження розвинулася тяжка форма гіпоксії (задишка, синюшність). Який із процесів гемоглобіноутво-рення порушено?

А. Заміна фетгемоглобіну на гемоглобін М.

В. Заміна фетгемоглобіну на гемоглобін S.

С. Заміна фетгемоглобіну на глікозильований гемоглобін.

Д. Заміна фетгемоглобіну на метгемоглобін.

Е. Заміна фетгемоглобіну на гемоглобін А.

Еталон відповіді: Е.

Завдання 9

Людину вкусила змія. Вона починає задихатися, в сечі з’являється гемоглобін. У крові відбувається гемоліз еритроцитів. Дія токсичної зміїної отрути призводить до:

А. Утворення лізолецитину.

В. Ацидозу.

С. Поліурії.

Д. Розвитку алкалозу.

Е. Утворення тригліцеридів.

Еталон відповіді: А.

 

Завдання 10

У сироватці крові пацієнта встановлено підвищення активності гіалуронідази. Визначення якого біохімічного показника сироватки крові дасть змогу підтвердити припущення про патологію сполучної тканини?

А. Галактози.

В. Білірубіну.

С. Сечової кислоти.

Д. Глюкози.

Е. Сіалових кислот.

Еталон відповіді: Е.

 

Короткі методичні вказівки до роботи студентів на практичному занятті

Заняття починається з розв’язання навчальних задач, після чого необхідно виконати досліди лабораторної роботи.

У кінці заняття проводяться тестовий контроль, аналіз результатів роботи, в яких беруть участь всі студенти під керівництвом викладача.