Алгоритм лабораторної роботи 3

1 Маркують 6 пробірок.

2 Пробірки заповнюють у відповідності до таблиці, створюючи певне значення рН у кожній пробірці шляхом внесення різної кількості реактивів заданих концентрацій.

3 Пробірки витримують при кімнатній температурі 30 хв.

4 Ізоелектричну точку визначають за ступенем помутніння розчину.

 

Методика проведення експерименту

3 Визначення ізоелектричної точки желатину

 

Принцип методу: визначення ізоелектричної точки желатину ґрунтується на дослідженні розчинності його при різному значенні рН. Ізоелектрична точка відповідає значенню рН розчину, при якому розчинність желатину зменшується, і він випадає в осад.

Хід роботи: заповнити 6 пробірок згідно з наведеною схемою.

Реактив / Номер пробірки
Н2О, мл	3,8	3,5	3,0	2,0	─	3,2
Оцтова кислота (0,1 М)	0,8	0,5	1,0	2,0	4,0	─
Оцтова кислота (1 М)	─	─	─	─	─	0,8
СН3СООNа (0,1 М)
Розчин желатину (1%)
Ацетон
рН середовища	5,6	5,3	5,0	4,7	4,4	4,1
Ступінь помутніння

Через 30 хв позначають ступінь помутніння знаком (+). рН буфера, де спостерігається найбільше помутніння, відповідає ізоелектричній точці желатину.

Після проведення експериментальної частини ви повинні оформити протокол лабораторної роботи.

 

Виконайте завдання та перевірте правильність їх розв’язання з еталоном відповіді.

 

Завдання 1

Зазначте, які з нижче наведених білків належать до простих:

А. Гістони

В. Хромопротеїни

С. Флавопротеїни

Д. Металопротеїни

Е. Гемопротеїни

Еталон відповіді: А

Завдання 2

Назвіть речовини, під дією яких відбувається висолювання білків:

А. Н₂SO₄ (к)

В. (NH₄)₂SO₄

C. РbSO₄

Д. NaOH (к)

Е. HNO₃ (к).

Еталон відповіді: В.

Завдання 3

Назвіть фактори, під дією яких відбувається незворотна денатурація білків:

А. NaCl

В. MgSO₄

С. (NH₄)₂SO₄

Д. Na₂SO₄

Е. CuSO₄

Еталон відповіді: Е.

Завдання 4

Назвіть метод, який може бути використаний для фракціонування білків:

А. Хроматографія.

В. Висолювання.

С. Кислотний гідроліз.

Д. Денатурація.

Е. Гомогенізація.

Еталон відповіді: А.

Завдання 5

Вкажіть, яка властивість білків дозволяє розділяти їх методом електрофорезу:

А. Висока в’язкість.

В. Високий онкотичний тиск.

С. Наявність електричного заряду.

Д. Оптична активність.

Е. Здатність до набухання.

Еталон відповіді: С.

 

Завдання 6

Вкажіть фактори, які викликають незворотну денатурацію білків:

А. Ацетат свинцю.

В. Сульфат амонію.

С. Сульфат магнію.

Д. Сульфат натрію.

Е. Хлорид натрію.

Еталон відповіді: А.

Короткі методичні вказівки до роботи студентів на практичному занятті

Заняття починається з вирішення навчальних задач, після чого необхідно виконати лабораторні досліди.

У кінці заняття проводяться тестовий контроль, аналіз результатів роботи, в яких беруть участь всі студенти під керівництвом викладача.

 

 

Технологічна карта проведення практичного заняття

	ЕТАП	Час, хв	Навчальні посібники	Місце проведення
1	Корекція знань та вмінь студентів шляхом вирішення навчальних задач	20	Довідкові дані	Навчальна аудиторія
2	Виконання лабора-торної роботи, оформлення протоколу	45	Розчин яєчного білка, розчин желатину, на-бір реактивів для ви-солювання і осаджен-ня білків, визначення ізоелектричної точки желатину, хім. посуд та прилади
3	Тестовий контроль	10	Набір тестових зав-дань з біохімії для підготовки студентів до медичного ліцен-зійного іспиту “Крок-1”
4	Аналіз і підведення підсумків заняття	5

Граф логічної структури теми “Фізико-хімічні властивості білків. Методи виділення і фракціонування білків. Класифікація білків: прості білки. Пептиди”

 

 

Заняття 4

Тема. ВИВЧЕННЯ КЛАСИФІКАЦІЇ, ОСОБЛИВОСТЕЙ БУДОВИ ТА МЕТОДІВ ДОСЛІДЖЕННЯ

СКЛАДНИХ БІЛКІВ

Актуальність теми. Детальне вивчення структурно-функціо-нальних особливостей складних білків показало, що окремі їх пред-ставники беруть участь саме в ключових метаболічних процесах. Порушення функціонування таких білкових молекул призводить до патологічних змін в обміні речовин, які можуть мати небезпечні клінічні прояви. Так, результатом порушення синтезу гемоглобіну є не лише анемії, а й спадкові захворювання - таласемії, гемоглобінопатії. Причиною іншої спадкової хвороби - хвороби Вільсона-Коновалова - є спадковий дефект іншого складного білка - церулоплазміну, який забезпечує транспорт міді в крові. При спадкових порушеннях синтезу ліпопротеїнів крові можуть розвиватися атеросклеротичні зміни судин, наслідками чого є інфаркт міокарда, інсульт тощо. Теоретичні знання про складні білки і методи їх дослідження можуть бути використані при вивченні таких дисциплін, як патологічна фізіологія, фармакологія, клінічна біохімія та є важливими в майбутній медичній практиці лікаря.

Мета загальна - уміти інтерпретувати наслідки структурно-функціональних змін складних білків та результати методів їх дослідження.

Конкретні цілі, уміти:

1. Використовувати знання про класифікацію, структуру і функції складних білків для пояснення наслідків спадкових та набутих патологічних змін, що пов’язані з функціонуванням окремих представників складних білків.

2. Проводити визначення глікопротеїнів (на прикладі муцину слини), гемопротеїнів (на прикладі гемоглобіну), нуклеопротеїнів.

3. Інтерпретувати результати визначення складних білків.

 

При підготовці до заняття користуйтеся літературою:

1. Губський Ю.І. Біологічна хімія. - Київ; Тернопіль: Укрмедкнига, 2000. - С. 35-36; 41-56.

2. Гонський Я.І., Максимчук Т.П. Біохімія людини. - Тернопіль: Укрмедкнига, 2001. - С. 52–61.

3. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. - М.: Медицина, 1983. - С. 78–113.

Теоретичні питання

1. Складні білки: класифікація, представники окремих класів, вміст в організмі людини.

2. Загальна характеристика хромопротеїнів, особливості структури, біологічна роль.

3. Гемопротеїни: міоглобін, гемоглобін, цитохроми. Їх біологіч-ні функції та структурні особливості. Нормальний вміст гемо-глобіну в крові. Загальна характеристика гемоглобінопатій і таласемій.

4. Флавопротеїни: особливості будови та роль в організмі.

5. Глікопротеїни: класифікація, особливості структури, поширення, біологічні функції.

6. Ліпопротеїди, фосфопротеїни, металопротеїни: структура, біологічна роль.

7. Нуклеотиди будова, структурні компоненти, номенклатура, біологічна роль. Мінорні азотисті основи та нуклеотиди. Вільні нуклеотиди: участь у метаболічних реакціях та їх регуляції. Циклічні нуклеотиди.

8. Нуклеїнові кислоти: особливості структурної організації, біологічні функції ДНК і РНК. Експериментальне доведення генетичної ролі ДНК (феномен трансформації).

9. Методи вивчення складу та особливостей будови складних білків.

 

На занятті ви повинні будете виконати експериментальну частину роботи згідно з алгоритмом лабораторної роботи та методикою її проведення.

 

Алгоритм лабораторної роботи:

1. Експериментальне підтвердження наявності в муцині вуглеводного компонента.

2. Проведення бензидинової реакції на визначення гемінової групи гемоглобіну.

3. Виділення нуклеопротеїнів з дріжджів та проведення якісних реакцій на їх складові.

 

Методика проведення експериментів