Приготовление некоторых реактивов

1 % растворы

 

1 г вещества растворить в 100 мл дистиллированной воды.

 

5 % (CH₃COO)₂Pb, NaNO₂, CuSO₄, CaCl₂

 

5,3 г вещества растворить 100 мл дистиллированной воды.

10 % раствор NaOH, CuSO₄, трихлоруксусной кислоты

11,1 г вещества растворить в 100 мл дистиллированной воды.

 

0,5 % раствор нингидрина

 

0,5 г нингидрина растворить в 100 мл дистиллированной воды.

0,5 % раствор крахмала

 

0,5 г крахмала растворить в 100 мл дистиллированной воды, раствор довести до кипения.

 

Реактив Миллона

 

Одну часть ртути растворяют в двойном по массе количестве азотной кислоты (плотность 1.40) сначала на холоде, затем на водяной бане. Полученный раствор разбавляют двойным объемом воды.

 

Реактив Фоля

Отдельно готовится два раствора: 30 % NaOH и 5 % (CH₃COO)₂Pb.

42,9 г NaOH растворить в 100 мл дистиллированной воды. 5,3 г (CH₃COO)₂Pb растворить 100 мл дистиллированной воды.

 

Раствор белка

 

1 способ. 1-2 белка куриных яиц отделяют от желтков и взбалтывают с 1 литром дистиллированной воды.

2 способ. Белок куринных яиц тщательно отделяют от желтков, разбалтывают стеклянной палочкой в 0.9 % растворе хлористого натрия и профильтровывают через три слоя марли. Раствор хлористого натрия берут из такого расчета, чтобы получить раствор куриного белка необходимой концентрации.

 

Раствор белка для реакций осаждения

 

Белки куриных яиц отделяют от желтков, смешивают с 20-кратным объемом воды и фильтруют через несколько слоев марли.

 

Раствор белка для реакции высаливания

Белки трех куриных яиц отделяют от желтков, смешивают с 700 мл дистиллированной воды и 300 мл насыщенного раствора хлористого натрия и фильтруют через несколько слоев марли.

0.01 н раствор HCl

 

Для приготовления рабочего раствора используют концентрированную соляную кислоту. Необходимо учитывать концентрацию кислоты и ее плотность. Если в качестве исходного реактива использовать HCl ρ = 1.183 г/мл (36 %), то для приготовления 100 мл рабочего раствора с концентрацией 0.01 н требуется растворить 0,85 мл концентрированной HCl.

 

Фосфатный буфер

 

Отдельно готовят два раствора: 1) растворяют 9,1 г однозамещенного фосфата калия (KH₂PO₄) в 1 л дистиллированной воды; 2) растворяют 11,86 г двузамещенного фосфата натрия (Na₂HPO₄) в 1 л дистиллированной воды. Для получения фосфатного буфера с рН = 6.0 смешивают 9 частей 1-го раствора с одной частью 2-го раствора.

 

Насыщенные растворы пикриновой кислоты, NaCl, (NH₄)₂SO₄,

бикарбоната натрия

 

Вещество растворяют в необходимом количестве растворителя до насыщения раствора (раствор, находящийся в равновесии с растворяющимся веществом, называется насыщенным).

 

20 % раствор сульфосалициловой кислоты

 

20 г сульфосалициловой кислоты в 100 мл дистиллированной воды.

 

Растворы аминокислот

 

Сначала готовят маточные растворы с концентрацией аминокислоты 40 мкмоль/мл. Для этого в 5 мл 0.01 н HCl растворяют: арг – 42 мг, гис – 42 мг, лиз – 36 мг, фен – 33 мг, тир – 36 мг, лей – 26 мг. Из них готовят рабочие растворы каждой аминокислоты, смешивая 0,1 мл маточного раствора и 0,9 мл 0.01 н HCl. В полученных рабочих растворах содержится по 4 мкмоль/мл аминокислоты. Стандартную смесь аминокислот готовят из шести маточных растворов аминокислот, смешивая по 1 мл каждой и доводя общий объем до 10 мл 0.01 н раствором HCl. В полученной стандартной смеси содержатся аминокислоты, каждая из которых имеет концентрацию 4 мкмоль/мл.

 

Цитратный буфер рН 5.28

 

Для приготовления 1 л буфера необходимо: 24,6 г лимонной кислоты, 14,4 гNaOH, 6,8 мл 35 % раствора HCl, 0,1 г фенола.

 

Нингидриновый реактив

 

Для приготовления реактива готовится два раствора, которые хранятся отдельно. 1-й – 1 г нингидрина в 100 мл ацетона; 2-й – 1 г ацетата кадмия в смеси 50 мл ледяной уксусной кислоты и 100 мл воды. Рабочий раствор готовится из двух – 100 мл 1-го + 20 мл 2-го.

 

Феллингова жидкость

Готовят отдельно два раствора: 1) 200 г сегнетовой соли и 150 г едкого натрия растворяют в мерной литровой колбе и доводят дистиллированной водой до метки; 2) 40 г медного купороса растворяют в мерной литровой колбе и доводят дистиллированной водой до метки. Перед употреблением смешивают равные объемы двух растворов.

 

Биуретовый реактив

 

1,5 г сульфата меди и 60 г тартрата калия (сегнетова соль) растворяют в 300 мл 10 % раствора гидроксида натрия и доводят объем дис­тиллированной водой до 1 л.

 

0,4% раствор KMnO₄

 

0,4 г KMnO₄растворить в 100 мл дистиллированной воды.

 

0.05 н раствор KMnO₄

 

7.9 г KMO₄ растворить в 1 л дистиллированной воды.

0.003 н раствор I₂

 

0,4 гI₂ растворить в 1 л дистиллированной воды.

 

0.1 н раствор NaOH

 

4 г NaOH растворить в 1 л дистиллированной воды.

 

0.005 н раствор NaOH

 

0,2 г NaOH растворить в 1 л дистиллированной воды.

 

0.4 % раствор NaOH

 

0,4 г NaOH растворить в 100 мл дистиллированной воды.

 

0.1 н раствор гипосульфита (Na₂S₂O₃)

 

7,9 г Na₂S₂O₃ растворить в 1 л дистиллированной воды.

3.75 % молибденовокислого аммония в азотной кислоте

 

7,5 г молибденовокислого аммония растворяют в 100 мл воды и добавляют 100 мл 32 % азотной кислоты (удельный вес 1.2).

0.2 % раствор щавелевокислого аммония

0,2 г щавелевокислого аммония растворить в 100 мл дистиллированной воды.

 

1 М раствор NaCl

 

59,5 г NaCl растворить в 1000 л дистиллированной воды.

 

Аммиачный раствор серебра

 

К 5 % раствору азотнокислого серебра добавляют концентрированный раствор аммиака до растворения выпадающего осадка.

 

Растворы витаминов

Фармакопейные препараты витаминов А, С, Е, D, Р, В₁, В_2, В₆, В₁₂: витамин А – масляный раствор 34.4 г/л; витамин С – 1 % раствор, порошок; витамин Е – 0.1 % спиртовой раствор; витамин D – масляный раствор 1.25 г/л; витамин Р – порошок, насыщенный раствор; витамин В₁ – 5 % раствор; витамин В₂ – 0.025 % раствор, 1 % раствор; витамин В₆, - 1 % раствор; витамин В₁₂ – 5 % раствор.

 

 

Список литературы

 

1. Чиркин А.А. Практикум по биохимии: Учеб. пособие / Минск: Новое знание, 2002. – 512 с.

2. Пустовалова Л.П. Практикум по биохимии. – Ростов-на-Дону: Феникс, 1999.

3. Алейникова Т.Л., Рубцова Г.В., Павлова Н.А. Руководство к практическим занятиям по биохимии: Учеб. пособие/ Е.С. Северина. – М.: Медицина, 2000. – 128 с.

4. Глинка Н.Л. Общая химия: Учеб. пособие/ В.А Рабмновича. – Л.: Химия, 1985. – 704 с.

5. Гороновский И.Т., Назаренко Ю.П., Некряч Е.Ф. Краткий справочник по химии/ А.Т. Пилипенко. – Киев: Наукова Думка, 1987. – 830 с.

6. Лурье Ю.Ю. Справочник по аналитической химии. – М.: Химия, 1989. – 448 с.

Оглавление

 

 

Введение.............................................................................................................

Особенности работы в биохимической лаборатории и инструктаж по тех-

нике безопасности.....................................................................................................

Тема 1. Белки....................................................................................................

Тема 2. Количественные методы в биохимии................................................

Тема 3. Ферменты.............................................................................................

Тема 4. Витамины.............................................................................................

Тема 5. Нуклеиновые кислоты........................................................................

Тема 6. Фотосинтез...........................................................................................

Тема 7. Углеводы. Липиды ..............................................................................

Тема 8. Химия молока .....................................................................................

Приложение........................................................................................................

Список литературы...........................................................................................

 

Редактор М.Б. Тимофеева

Компьютерная верстка: А.В. Ражева

Лицензия А № 001633 от 2 февраля 2004 г.

Подписано к печати 00.10.06. Тир. 25. Формат 60 ´ 84 ¹/₁₆.

Уч.-изд. л. 2,5. Усл. п. л..

Гарнитура Таймс. Зак.

 

ГОУ ВПО Череповецкий государственный университет

162600 г. Череповец, пр. Луначарского, 5.