Ход работы: вместо сыворотки ротовую жидкость.

Принцип метода: О трансаминазной активности сыворотки крови судят по количеству ПВК, образующейся при переаминировании из аланина или в результате декарбоксилирования щавелеуксусной кислоты, образующейся при переаминировании из аспарагиновой кислоты (АСТ). ПВК взаимодействует с 2,4-динитрофенилгидразином, с образованием 2,4-динитрофенилгидразона пировиноградной кислоты. При обработке динитрофенилгидразона щелочью образуется окрашенное в красный цвет соединение. Интенсивность окрашивания пропорциональна количеству ПВК.

Ход работы: В пробирку вносят 0,1мл сыворотки и 0,5мл субстратной смеси, составленной из аланина и альфа-кетоглутаровой кислоты. Пробирку помещают в термостат при 37 град С на 15 минут, затем добавляют 0,5мл раствора 2,4-динитрофенилгидразина и оставляют стоять при комнатной температуре на 10 минут, после чего приливают 5мл NаОН и через 10-15 минут колориметрируют на ФЭКе в кювете на 0,5см с зеленым светофильтром против контроля.

Контроль: К 0,2мл Н2О приливают 1мл субстратной смеси, 1мл 2,4- динитрофенилгидразина и через 15 минут 10мл NаОН (обязательно соблюдать порядок добавления реактивов). После фотометрирования используют калибровочный график. Активность АЛТ выражают в мкм ПВК, образованной под действием ферментов, содержащихся в 1мл слюны за час при 37 град

Норма: АЛТ- 0,1-0,68 мкм/л.ч

АСТ- 0,1-0,45 мкм/л.ч

 

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №5

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОЗЫ В СЛЮНЕ ГЛЮКОЗООКСИДАЗНЫМ МЕТОДОМ (ПО ОКИСЛЕНИЮ ФЕНОЛФТАЛЕИНА)

Принцип метода:

 

В-d глюкоза + в-d глюкозооксидаза глюколактон + ФАДН2

-------------------------

ФАД

 

 

ФАДН2+О2 = ФАД +Н2О2

 

 

Образущаяся перекись водорода в присутствии ионов меди окисляет фенолфталеин до соединения, которое в щелочной среде окрашено в красный цвет.

Ход работы: 0,2 мл слюны вливают в 2мл 5% ТХУ, перемешивают и фильтруют через смоченный дистил. водой фильтр. К 1мл фильтрата прибавляют 2мл 0,25 моль/л фосфата натрия и 1 каплю раствора глюкозооксидазы. Перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 5 мин. Затем добавляют 2 мл рабочего реактива и через 5мин фотометрируют в кюветах толщиной 1 см при зеленом светофильтре против дистил. воды.

Количество глюкозы в слюне определяется по калибровочному графику. Концентрацию глюкозы в слюне определить до и через 15 мин. после приема сладостей и последующего применения различных гигиенических средств. Для гигиенических мероприятий использовать общедоступные средства: водопроводную воду, 1-2% раствор бикарбоната натрия, зубную щетку или одну из не содержащих сахара жевательных резинок.

Содержание глюкозы определять орто-толуидиновым методом.

 

 

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №6

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАЛЬЦИЯ В СЛЮНЕ ТИТРОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ С ПРИМЕНЕНИЕМ МУРЕКСИДА

Принцип метода: мурексид образует с ионами Са в щелочной среде комплексное соединение, окрашенное в красно-фиолетовый или бледно-розовый цвет (в зависимости от концентрации). При титровании р-ром более сильного комплексо-образователя - трилона Б, этот комплекс разрушается, что приводит к изменению окраски, свойственной свободному мурексиду (бледно-сиреневой).

Ход определения: в стаканчик вносят 50 мл дистил.воды, 10 капель 9Н р-ра NаОН и прибавляют несколько крупинок мурексида. Сразу появляется бледно-сиреневое окрашивание, обусловленное свободным мурексидом. Приблизительно половину раствора переливают в другой чистый стаканчик и эта часть служит эталоном окраски свободного мурексида. К оставшейся части раствора добавляют 1мл слюны, что приводит к появлению бледно – розового окрашивания, обусловленного образованием кальциево-мурексидного комплекса. Раствор немедленно титруют трилоном Б до возращения прежней окраски индикатора. Конец титрования устанавливают путем сопоставления опытной и контрольных проб.

Стр.б * V тр.б 1,8(мм/л) *Vтрб

Са=--------------------- = ----------------------- = ммол/л

 

V слюны 1

 

 

Vтр.б: 0,9-2,3 ммоль/л

 

 

ИНТЕРПРИТАЦИЯ ЛАБОРАТОРНЫХ БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ

Глюкоза

Универсальный источник энергии для клеток - главное вещество, из которого любая клетка человеческого организма получает энергию для жизни. Потребность организма в энергии, а значит - в глюкозе - увеличивается параллельно физической и психологической нагрузке под действием гормона стресса - адреналина, во время роста, развития, выздоровления (гормоны роста, щитовидной железы, надпочечников). Для усвоения глюкозы клетками необходимо нормальное содержание инсулина - гормона поджелудочной железы. При его недостатке (сахарный диабет) глюкоза не может пройти в клетки, ее уровень в крови повышен, а клетки голодают.

Повышение (гипергликемия):

- сахарный диабет (недостаточность инсулина)

- физическая или эмоциональная нагрузка (выброс адреналина)

- тиреотоксикоз (повышение функции щитовидной железы)

- феохромоцитома (опухоль надпочечников, выделяющая адреналин)

- акромегалия, гигантизм (повышение уровня гормона роста)

- синдром Кушинга (повышение уровня гормона надпочечников - кортизола)

- заболевания поджелудочной железы (панкреатит, опухоль, муковисцидоз)

- хронические заболевания печени, почек

Снижение (гипогликемия):

- голодание

- передозировка инсулина

- заболевания поджелудочной железы (опухоль из клеток, синтезирующих инсулин)

- опухоли (избыточное потребление глюкозы как энергетического материала опухолевыми клетками)

- недостаточность функции эндокринных желез (надпочечников, щитовидной, гипофиза (гормон роста)

- тяжелые отравления с поражением печени (алкоголем, мышьяком, соединениями хлора, фосфора, салицилатами, антигистаминами)

- состояние после гастрэктомии, заболевания желудка и кишечника (нарушение всасывания)

- врожденная недостаточность у детей (галактоземия, синдром Гирке)

- у детей, рожденных от матерей с сахарным диабетом

- недоношенность

 

Общий белок

Белки - главный биохимический критерий жизни. Они входят в состав всех анатомических структур (мышцы, клеточные мембраны), переносят вещества по крови и в клетки, ускоряют течение биохимических реакций в организме, распознают вещества - свои или чужие и защищают от чужих, регулируют обмен веществ, удерживают жидкость в кровеносных сосудах и не дают ей уходить в ткани. Белки синтезируются в печени из аминокислот пищи. Общий белок крови состоит из двух фракций: альбумины и глобулины.

Повышение (гиперпротеинемия):

- обезвоживание (ожоги, диарея, рвота - относительное повышение концентрации белка за счет снижения объема жидкости)

- миеломная болезнь (избыточная продукция гамма-глобулинов)

Снижение (гипопротеинемия):

- голодание (полное или белковое - строгое вегетарианство, нервная анорексия)

- заболевания кишечника (нарушение всасывания)

- нефротический синдром (потеря в почках)

- повышенное потребление (кровопотеря, ожоги, опухоли, асцит, хроническое и острое воспаление)

- хроническая печеночная недостаточность (гепатит, цирроз)

 

Альбумин

Одна из двух фракций общего белка. Выполняет транспортную функцию.

Повышение (гиперальбуминемия):

Истинной (абсолютной) гиперальбуминемии не бывает. Относительная возникает при снижении общего объема жидкости (обезвоживании) - см. гиперпротеинемия.

Снижение (гипоальбуминемия):

Те же, что и для общей гипопротеинемии.

 

Билирубин общий (норма

Компонент желчи, состоит из двух фракций - непрямого (несвязанного), образующегося при распаде клеток крови (эритроцитов), и прямого (связанного), образующегося из непрямого в печени и выводящегося через желчные протоки в кишечник. Является красящим веществом (пигментом), поэтому при его повышении в крови изменяется окраска кожи - желтуха.

Повышение (гипербилирубинемия):

- избыточное разрушение эритроцитов (гемолитическая желтуха: резус-конфликт, переливание крови, гемолитическая анемия, малярия, физиологическая желтуха новорожденных)

- повреждение печеночных клеток (гепатиты, гепатозы - паренхиматозная желтуха)

- непроходимость желчных протоков (механическая желтуха)

- врожденные особенности обмена веществ (синдром Жильбера, семейная гипербилирубинемия)

 

Билирубин прямой

Одна из двух фракций общего билирубина (см). Определяют для дифференциальной диагностики гипербилирубинемии (желтухи).

Повышение:

- гемолиз эритроцитов

 

Мочевина

Продукт обмена белков, удаляющийся почками. Часть остается в крови.

Повышение:

- нарушение функции почек

- непроходимость мочевыводящих путей

- повышенное содержание белка в пище

- повышенное разрушение белка (ожоги, острый инфаркт миокарда)

Снижение:

- белковое голодание

- избыточное потребление белка (беременность, акромегалия)

- нарушение всасывания

 

Креатинин

Креатинин - как и мочевина, продукт обмена белков, выводящийся почками. В отличие от мочевины зависит не только от уровня белка, но от интенсивности его обмена. т.о. при акромегалии и гигантизме (повышенный синтез белка) его уровень растет, в отличие от уровня мочевины. В остальном причины изменения уровня те же, что для мочевины (см).

 

Мочевая кислота

Мочевая кислота – продукт обмена нуклеиновых кислот, выводящийся из организма почками.

Повышение (гиперурикемия):

- подагра (нарушение обмена нуклеиновых кислот)

- почечная недостаточность

- миеломная болезнь

- токсикоз беременных

- пища, богатая нуклеиновыми кислотами (печень, почки)

- тяжелая физическая работа

Снижение (гипоурикемия):

- болезнь Вильсона-Коновалова

- синдром Фанкони

- диета, бедная нуклеиновыми кислотами