CD-классификация мембранных молекул иммунокомпетентных клеток.

CD3 – главный маркер зрелых Т-клеток. Кроме CD3, на мембране Т-клеток экспрессируются CD2, CD5, CD7. CD4 являетсякорецепторной структурой TCR, представлена на Т-клетках-хелперах и участвует в распознавании антигена в контексте с молекулами MHC II. Молекула CD8 представлена на Т-киллерах и участвует в распознавании антигена в контексте с молекулами MHC I.

CD3 входит в состав Т-клеточного рецептора, (TCR), распознающего антиген. CD3+CD4+ – субпопуляция Т-хелперов; CD3+CD8+ – цитотоксические Т-клетки. Молекула CD19 экспрессируется только на В-клетках и ее идентификация рекомендуется для количественной оценки общей популяции В-лимфоцитов. CD20 экспрессируется на ранних этапах развития В-клеток, начиная с про-В-клеток. CD16 участвует в антителозависимой цитотоксичности, осуществляемой NK. NK -клетки имеют фенотип CD3-CD16+CD56+.

Основные CD - маркеры иммунокомпетентных клеток следует знать, так как они являются обязательным составляющим компонентом иммунограмм.

2.1.2. Маркеры активации лимфоцитов. Молекулы HLA-DR экспрессируются в основном на антиген-представляющих клетках (АПК) – моноцитах/макрофагах, дендритных клетках, В-клетках, и на лимфоцитах – CD4+, CD8+. Повышение экспрессии HLA-DR на Т-лимфоцитах происходит при воспалительных процессах под действием цитокинов. Молекула CD25 представляет собой α-цепь рецептора ИЛ-2. Повышение количества C D25-позитивных лимфоцитов может говорить о воспалительном процессе любой природы (инфекционный, аутоиммунный процессы). CD45RA экспрессируется на наивных Т-клетках, В-клетках, CD45RO – на эффекторных Т-клетках, Т-клетках памяти, В-клетках, моноцитах и макрофагах Содержание активированных Т-лимфоцитов может повышаться при иммунной активации, вызванной инфекцией или отторжением трансплатата.

Согласно рекомендациям ВОЗ (1988) определение содержания основных популяций лимфоцитов имеет диагностическое значение при первичных, вторичных иммунодефицитах, ВИЧ-инфекции, лимфопролиферативных заболеваниях.

Большое значение имеет определение субпопуляций лимфоцитов, прежде всего CD4+ клеток, при ВИЧ-инфекции. Определение уровня CD4-лимфоцитов позволяет судить о глубине развившегося у больного иммунодефицита. Степень снижения уровня CD4-клеток может служить критерием для вероятности возникновения вторичных заболеваний. Стойкое снижение этого показателя до 500 кл в мкл ассоциируется с переходом в стадию вторичных заболеваний. Так, саркома Капоши может впервые появиться при уровне CD4-лимфоцитов более 200 кл в мкл, а пневмоцистная пневмония обычно появляется при их уровне менее 200 кл в мкл. При успешной антирертровирусной терапии уровень CD4-лимфоцитов начинает повышаться.

Клинический пример. Пациент 22 лет госпитализирован в инфекционную больницу с диагнозом «лакунарная ангина, паратонзиллит». На фоне лечения антибиотиками состояние больного улучшилось и он был выписан через 7 дней лечения (при обследовании на антитела к ВИЧ результаты отрицательные). Через 1 неделю он был повторно госпитализирован с температурой тела 38^оС и жалобами на боль в горле. При осмотре диагностирован паратонзиллярный абсцесс, а при лабораторном исследовании обнаружены антитела к ВИЧ. Больной переведен в специализированный стационар. Начата антиретровирусная терапия.В течение 2 месяцев на фоне антибактериального лечения у него развивались рецидивы и трижды производилось вскрытие паратонзиллярного абсцесса (с выделением из содержимого абсцесса культуры Escherichia coli). В это время отмечалось значительное снижение уровня CD-лимфоцитов (210 кл в мкл). В дальнейшем, через 2 месяца после выписки, уровень CD-клеток стал более высоким (380 кл в мкл).

Клинический пример. У больногодиагностирована ВИЧ-инфекция в возрасте 47 лет. В течение 5 лет с момента установления диагноза самочувствие было удовлетворительным. Обратился за медицинской помощью в связи с появлением выраженной лихорадки, кашля с мокротой, изменениями на рентгенограмме органов грудной клетки; был диагностирован инфильтрированный туберкулез легких и назначены специфические противовирусные и противотуберкулезные препараты, которые получал в течение 6 мес. При выписке уровень CD4-клеток составил 110 кл в мкл. Несмотря на это, больной исчез из поля зрения врачей на 3 мес. Вновь был госпитализирован в тяжелом состоянии: температура тела 38^оС, больной истощен, на коже лица, шеи, туловища, конечностей множественные узловые элементы разных размеров с некрозами и кровоточивостью. Уровень CD-4 клеток 0. Клинический диагноз: ВИЧ-инфекция в стадии СПИД, двусторонний инфильтративный туберкулез легких, саркома Капоши. Несмотря на начатое лечение, больной умер через 6 дней от начала госпитализации.

 

Методы оценки функциональной активности лимфоцитов.

2.2.1.Определение пролиферативной способности лимфоцитов. Ответ лимфоцитов на действие антигенов имеет клональный характер,

поскольку лишь клетки конкретных клонов несут на своей поверхности рецепторы для определенных антигенов. Интенсивное деление лимфоцитов определенных клонов после распознавания ими антигена должно обеспечить эффективный иммунный ответ. Оценка способности лимфоцитов к пролиферативному ответу in vitro в ответ на стимуляцию является важным показателем их функциональной активности. В лабораторных условиях для стимуляции лимфоцитов используют поликлональные стимуляторы – митогены, на них отвечают практически все представители лимфоцитов. Специфичным для Т-клеток является фитогемагглютинин (ФГА) и конканавалин А (КонА). В-клеточным митогеном является митоген лаконоса (МЛ) и липолисахарид (ЛПС).

Для оценки пролиферации используются различные методы – морфологический, радиометрический, цитофлуориметрический. Наиболее распространенным способом оценки пролиферации является оценка включения Н³-тимидина, которая позволяет объективно оценить изменение пролиферативного ответа клеток.

Принцип метода состоит в культивировании лимфоцитов в присутствии митогена с последующим добавлением Н³-тимидина и оценкой его включения в пролиферирующие клетки. Поскольку репликация ДНК – неотъемлимая и обязательная часть процесса пролиферации, считается, что включение Н³-тимидина может служить мерой пролиферации.

Оценка пролиферативного ответа на действие митогенов считается наиболее универсальным тестом для оценки функции лимфоцитов. Отсутствие реакции на митогены свидетельствует о тяжелой недостаточности клеточного иммунитета.

Определение цитотоксической активности Т-лимфоцитов.

Исследуют ограниченную по HLA цитотоксичность CD8 клеток. Исследуемые T-лимфоциты предварительно инкубируют с антигеном, присутствующим на клетках-мишенях. Клетками-мишенями служат собственные клетки, несущие на своей поверхности чужеродный антиген, связанный с антигенами HLA I класса. Оценку цитотоксической активности лимфоцитов проводят следующим образом: 1) клетки-мишени обрабатывают радиоактивной меткой (⁵¹cr); 2) к меченым клеткам-мишеням добавляют исследуемые лимфоциты; 3) гибель клеток-мишеней оценивают по выходу радиоактивной метки в раствор. Полученные результаты сравнивают с нормальными показателями.

Оценка ГЗТ in vivo.

Кожные пробыпозволяют оценить способность Т-лимфоцитов вызывать реакцию замедленного типа при внутрикожном введении антигена. Размеры эритемы и папулы в месте инъекции определяют через 24 и 48 ч. Поскольку отрицательная реакция может быть следствием не только нарушения иммунитета, но и отсутствия предшествующего контакта с данным антигеном, пробу проводят с набором широко распространенных антигенов, в который входят очищенный туберкулин, столбнячный и дифтерийный анатоксины. Отрицательная реакция на несколько распространенных антигенов у больных с оппортунистическими инфекциями свидетельствует о выраженной недостаточности клеточного иммунитета.

Снижение функциональной активности Т-лимфоцитов приводит к клиническим проявлениям инфекций, вызываемых внутриклеточными бактериями, вирусами, грибами, простейшими (пневмония, вызываемая Pneumocystic carinii, цитомегаловирусная инфекция, токсоплазмоз, криптоспоридиоз и др.); опухолевому росту.

Активация клеточных эффекторных функций может лежать в основе воспаления при аллергии (контактный дерматит) и аутоиммуных заболеваниях (ревматоидный артрит, рассеянный склероз, псориаз).