Персонализированная медицина

Известно, что большинство лекарств действуют не на всех пациентов, для которых они предназначены, а лишь на 30-70 % их числа. Кроме того, многие лекарства оказываются токсичными или аллергенными для части пациентов. Причины этого — отчасти в индивидуальных различиях в восприимчивости и метаболизме лекарств и их производных. Эти различия детерминируются на генетическом уровне. Например, у одного пациента определенный цитохром (белок печени, отвечающий за метаболизм чужеродных веществ) может быть более активен, у другого — менее. Для того, чтобы определить, какой разновидностью цитохрома обладает данный пациент, предложено проводить ПЦР-анализ перед применением лекарства. Такой анализ называют предварительным генотипированием (англ. prospective genotyping).

Клонирование генов

Клонирование генов (не путать с клонированием организмов) — это процесс выделения генов и, в результате генноинженерных манипуляций, получения большого количества продукта данного гена. ПЦР используется для того, чтобы амплифицировать ген, который затем вставляется в вектор — фрагмент ДНК, переносящий чужеродный ген в тот же самый или другой, удобный для выращивания, организм. В качестве векторов используют, например, плазмиды или вирусную ДНК. Вставку генов в чужеродный организм обычно используют для получения продукта этого гена — РНК или, чаще всего, белка. Таким образом в промышленных количествах получают многие белки для использования в сельском хозяйстве, медицине.

Секвенирование ДНК

В методе секвенирования с использованием меченых флуоресцентной меткой или радиоактивным изотопом дидезоксинуклеотидов ПЦР является неотъемлемой частью, так как именно в ходе полимеризации в цепь ДНК встраиваются производные нуклеотидов, меченые флуоресцентной или радиоактивной меткой. Это останавливает реакцию, позволяя определить положения специфических нуклеотидов после разделения синтезированных цепочек в геле.

В настоящее время ПЦР стала основным методом проведения мутагенеза. Использование ПЦР позволило упростить и ускорить процедуру проведения мутагенеза, а также сделать её более надёжной и воспроизводимой.

Ахондроплазия

Ахондроплази́я (диафизарная аплазия, болезнь Парро-Мари, врожденная хондродистрофия) — известное с древности наследственное заболевание человека, проявляющееся в нарушении процессов энхондрального окостенения (вероятно, в результате дефектов окислительного фосфорилирования) на фоне нормальных эпостального и периостального окостенений, что ведет к карликовости за счет недоразвития длинных костей; наследуется по аутосомно-доминантному типу. Это наиболее частая врожденная патология скелета.

Нарушение процессов эндохондрального окостенения на фоне нормального эндостального и периостального окостенения, начинающееся уже во внутриутробном периоде.

В результате порочного, беспорядочного расположения клеток росткового хряща нарушается процесс окостенения, и рост костей в длину замедляется.

Причины, вероятность появления ахондроплазии

Причины появления неизвестны, в 80-90% случаев – результат новой генной мутации. Ахондроплазия встречается (частота в популяции) примерно 1 раз на 50 000 - 100 000. Вероятность повторного рождения ребенка с ахондроплазией у здоровых родителей – незначительная. Вероятность рождения ребенка с ахондроплазией у лица, имеющего это же заболевание – высокая, 50% (аутосомно-доминантный тип наследования), ген ахондроплазии картирован на коротком плече 4-й хромосомы [1].

Клинические формы

Основные проявления ахондроплазии – укорочение конечностей, в основном, за счет плечевых и бедренных костей, относительно большие размеры головы, характерное лицо с запавшей переносицей (седловидный нос), короткие пальцы рук. Уменьшение размеров грудной клетки. Интеллект, как правило, в норме.

Диагностика ахондроплазии

Как правило, ахондроплазия обнаруживается при ультразвуковом исследовании во время беременности с конца II – начала III триместра. При наличии семейной отягощенности имеются возможности ДНК-диагностики с использованием инвазивных методик (биопсии хориона, амниоцентеза).

Акушерская тактика

Прогноз для жизни – благоприятный. Лечение симптоматическое, лечение осложнений – хронического отита, неврологических и ортопедических проблем. Акушерская тактика – зависит от срока выявления патологии; в большинстве случае, в связи с большими сроками беременности, при которых удается обнаружить ахондроплазию с помощью УЗИ, прерывание беременности не проводится.

Билет 14.

Секвенирование ДНК

Методы расшифровки нуклеотидной последовательности нуклеиновых кислот в отечественной литературе принято называть методами сЕквенирования.

Еще в 50-е годы прошлого века были разработаны методы, позволяющие определять последовательность аминокислот в полипептидной цепи. Теоретически это несложно, поскольку все аминокислоты, встречающиеся в природных белках, имеют разные свойства. Поэтому, когда был расшифрован генетический код, появилась возможность восстанавливать нуклеотидную последовательность транскрибируемой ДНК по аминокислотной последовательности соответствующего белка. Однако, генетический код является вырожденным. Следовательно, первичная структура ДНК, полученная на основе анализа последовательности аминокислот, не является однозначной. Кроме того, для эукариот таким способом можно восстановить лишь нуклеотидный состав экзонов, тогда как информация о составе интронов теряется в результате сплайсинга.

К концу 60-х годов Ф.Сэнгером были разработан метод секвенирования РНК, получаемой с ДНК-матрицы при помощи РНК-полимеразы. Применив этот способ, Ш.Вейссман и У.Фирс смогли концу 1976 г. определить последовательность более половины молекулы ДНК SV40, длина которой превышает 5200 нуклеотидных пар. Следующим шагом должна была стать разработка методов прямого секвенирования ДНК.

Секвенирование ДНК по Сэнгеру: "плюс-минус" метод

Первым методом прямого ферментативного секвенирования ДНК стал метод, предложенный Ф. Сэнгером и Д. Коулсоном в 1975 г. В качестве матрицы в реакции полимеразного копирования использовался одноцепочечный фрагмент ДНК, в качестве праймеров - синтетические олигонуклеотиды или природные субфрагменты, получаемые при гидролизе рестрицирующими эндонуклеазами, а в качестве фермента - фрагмент Кленова ДНК полимеразы I (PolI) из E.coli. Метод включал два этапа. Сначала в ограниченных условиях проводили полимеразную реакцию в присутствии всех четырех типов dNTP (один из них был мечен по альфа-положению фосфата), получая на выходе набор продуктов неполного копирования матричного фрагмента. Смесь очищали от несвязавшихся дезоксинуклеозидтрифосфатов и делили на восемь частей. После чего в "плюс" системе проводили четыре реакции в присутствии каждого из четырех типов нуклеотидов, а в "минус" системе - в отсутствие каждого из них. В результате, в "минус" системе терминация происходила перед dNTP данного типа, а в "плюс" системе - после него. Полученные таким образом восемь образцов разделяли с помощью электрофореза, "считывали" сигнал и определяли последовательность исходной ДНК. Этим способом была секвенирована короткая ДНК фага фХ174, состоящая из 5386 нуклеотидных пар.

Секвенирование ДНК по Сэнгеру: метод "терминаторов"

В 1977 г. автор "плюс-минус" метода предложил еще один способ ферментативного секвенирования, получивший название метода терминирующих аналогов трифосфатов. Более мощный и более технологичный, этот способ, несколько модифицированный, применяется до сих пор. В основе метода тоже лежало ферментативное копирование с помощью фрагмента Кленова ДНК полимеразы I из E.coli. В качестве праймеров использовали синтетические олигонуклеотиды. Специфическую терминацию синтеза обеспечивали добавлением в реакционную смесь помимо четырех типов dNTP (один из которых был радиоактивно мечен по альфа положению фосфата) еще и одного из 2',3'-дидезоксинуклеозидтрифосфатов (ddATP, ddTTP, ddCTP или ddGTP), который способен включаться в растущую цепь ДНК, но не способен обеспечивать дальнейшее копирование из-за отсутствия 3'-ОН группы. Отношение концентраций dNTP/ddNTP авторы подбирали экспериментально, так, чтобы в итоге получить набор копий ДНК различной длины. Таким образом, для определения первичной структуры исследуемого фрагмента ДНК требовалось провести четыре реакции копирования: по одному типу терминаторов в каждой из реакций. После этого полученные продукты разгонялись в полиакриламидном геле на соседних дорожках и по расположению полос определялась последовательность нуклеотидов.

Секвенирование ДНК по Максаму и Гилберту: метод химической деградации

В 1976 г. А. Максамом и У. Гилбертом был разработан метод секвенирования, основанный на специфической химической деградации фрагмента ДНК, радиоактивно меченного с одного конца. Препарат меченной ДНК разделяли на четыре аликвоты и каждую обрабатывали реагентом, модифицирующим одно или два из четырех оснований. А. Максам и У. Гилберт предложили модифицировать пуриновые основания диметилсульфатом. При этом происходит метилирование адениновых остатков по азоту в положении 3, а гуаниновых - по азоту в положении 7. Обработка образца ДНК соляной кислотой при 0°С приводит к выщеплению метиладенина. Последующая инкубация при температуре 90°С в щелочной среде вызывает разрыв сахарно-фосфатной цепи ДНК в местах выщепления оснований. Обработка пиперидином приводит к гидролизу образца по остаткам метилгуанина. Пиримидиновые основания модифицируют гидразином. Если реакцию вести в бессолевой среде, то модифицируются как цитозин, так и тимидин; если обработку вести в присутствии 2М NaCl, то модифицируется лишь цитозин. Расщепление цепи ДНК на фрагменты и в этом случае осуществляется пиперидином. Условия реакций авторы подбирали таким образом, чтобы в итоге получить полный набор субфрагментов разной длины. Последующий электрофорез в полиакриламидном геле позволяет восстановить полную структуру исследуемого фрагмента.

Автоматическое секвенирование ДНК

В основе автоматического секвенирования лежит уже упоминавшийся выше метод ферментативного секвенирования с использованием терминирующих ddNTP (*). Как и классический вариант Сэнгера, автоматическое секвенирование включает две стадии: проведение терминирующих реакций и разделение продуктов этих реакций с помощью электрофореза. Как правило, автоматизирована лишь вторая стадия, т.е. разделение меченных фрагментов ДНК в ПААГ, получение спектра эмиссии флуорофоров и последующий обсчет собранных данных. Таким образом, автоматическое секвенирование идеологически отличается от современного ему ручного секвенирования только типом используемой метки.

Флуоресцентную метку включают либо в праймер, либо в терминатор транскрипции согласно следующим схемам: меченный праймер (четыре разных красителя) и немеченые терминаторы; меченный праймер (один краситель) и немеченые терминаторы; меченные терминаторы (каждый тип терминатора своим красителем) и немеченый праймер. Использование меченных праймеров предполагает проведение четырех независимых реакций (отдельно с каждым из терминаторов) для каждого секвенируемого образца. Использование меченных терминаторов позволяет совместить все четыре реакции в одной пробирке. Если используется единственный краситель, то разделение продуктов сиквенсовой реакции в геле проводят на четырех разных дорожках. Использование четырех разных красок позволяет разгонять продукты реакции(й) на одной дорожке.

(*) Строго говоря, это не совсем верное утверждение, поскольку существует как минимум два альтернативных подхода - пиросеквенирование и секвенирование с помощью чип-гибридизации. К сожалению, эти методы имеют довольно серьезные ограничения, а их аппаратное воплощение еще очень далеко от совершенства, поэтому в данном обзоре они рассмотрены не будут.

Флуоресцентные красители

Note: Флуоресценция - это излучение, сопровождающее переход электрона из возбужденного состояния в основное без изменения мультиплетности (т.е. переход синглет-синглет, либо триплет-триплет). Типичное время излучения для флуоресценции - 10^-8 с. Флуоресценции должен предшествовать обратный процесс - переход электрона в возбужденное состояние в результате поглощения (абсорбции) кванта света. Для флуоресценции доказана справедливость следующих правил: спектр испускания (эмиссии) не зависит от длины волны возбуждения; испускание сдвинуто относительно поглощения в сторону бОльших длин волн из-за энергетических потерь (сдвиг Стокса); спектр испускания представляет собой зеркальное отражение спектра поглощения. Для измерения флуоресценции используют время затухания флуоресценции и квантовый выход флуоресценции (отношение числа испущенных фотонов к числу поглощенных).

Спектр абсорбции, равно как и спектр эмиссии, зависят от химической структуры флуорофора, а также от условий в которые молекула флуорофора помещена (рН, температура, среда и т.д.). В автоматическом секвенировании используют флуорофоры, абсорбция и излучение у которых происходит в диапазоне длин волн 450-650 нм (видимая область спектра; секвенаторы ABI и Pharmacia) и 650-825 нм (ближняя инфракрасная область спектра; секвенаторы фирмы LI-COR).

К настоящему времени синтезировано большое число разнообразных флуоресцентных красителей и постоянно продолжается работа над новыми, с улучшенными характеристиками. Помимо высокого квантового выхода флуоресценции красители должны

удовлетворять двум требованиям, перечисленным ниже. Присоединение молекулы флуорофора способно изменять подвижность меченного фрагмента ДНК в геле. Поэтому, если используются одновременно несколько красителей, то необходимо, чтобы влияние каждого из них на подвижность было либо минимальным, либо одинаковым у всех. Выравнивание электрофоретической подвижности (когда это нужно) проводят с помощью линкерных молекул, встраиваемых между красителем и, например, праймером. Еще одним важным моментом является условие минимального перекрывания спектров эмиссии. К сожалению, полностью избежать перекрывания спектров до сих пор не удалось. В качестве альтернативы синтезу все новых соединений недавно был предложен подход, основанный на определении не спектра, а времени флуоресценции. Правда, какого-либо практического выхода эта симпатичная идея пока не получила. [3]

Первыми флуорофорами, адаптированными к нуждам секвенирования, стали соединения из семейства флуоресцеиновых (FAM, JOE) и родаминовых (TAMRA, ROX, R110, R6G) красителей [4]. Их структурные формулы показаны на рисунках 3 и 4, а спектральные характеристики сведены в Таблицу 1. Как видно из значений спектров эмиссии - R110 и R6G могут быть использованы вместо FAM и JOE. Следующее поколение флуорофоров этого семейства - dTAMRA, dROX, dR110, dR6G - получило довесок из двух остатков хлора [5, 6]. Это позволило несколько снизить перекрывание спектров испускания и значительно повысить интенсивность флуоресценции, а значит и чувствительность. Еще более высоким выходом флуоресценции характеризуются "трехкомпонентные" красители класса BigDye™ (Applied Biosystems) [7] и DYEnamic™ ET (Amersham-Pharmacia-Biotech) [8], при конструировании которых был использован принцип переноса энергии. Под переносом энергии понимают явление безизлучательного переноса энергии возбужденного состояния от донора к акцептору. Донором в BigDye™ является 4'-аминометил-5(или 6)-карбоксифлуоресцеин (5CF или 6CF), который связан с акцептором (представителем семейства d-родаминов) через остаток 4-аминометилбензойной кислоты (рисунок 5).

Полимеразы, используемые при секвенировании ДНК

В оригинальной работе Ф. Сэнгера для проведения сиквенсовых реакций был использован Кленовский фрагмент ДНК-полимеразы I из E.Coli. В настоящее время для секвенирования используют рекомбинантные ДНК-полимеразы, отвечающие следующим требованиям: отсутствие 3'- и 5'-экзонуклеазной активности, отсутствие дискриминации по включению в растущую цепь как обычных, так и модифицированных (меченных) ddNTP. Выбор конкретной полимеразы зависит от условий проведения сиквенсовой реакции. Всего существует два разных подхода. В первом случае копирование осуществляется при 37°С высокопроцессивными термолабильными полимеразами (например, T7 DNA polymerase - Sequenase v1.0 и v2.0, Amersham Pharmacia Biotech [13]). Во втором - реализуется циклический процесс, который включает денатурацию, отжиг и элонгацию, и предполагает использование термостабильных полимераз (например, Thermo Sequenase™, Amersham Pharmacia Biotech и AmpliTaq FS™, PE Biosystems).

Секвенирующий гель и электрофорез

Полученные в реакции секвенирования радиоактивно/флуоресцентно меченные одноцепочечные фрагменты ДНК разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле. Гели, используемые в секвенировании должны уметь разделять фрагменты, отличающиеся друг от друга на один нуклеотид в широком диапазоне длин. Разделение должно проходить в денатурирующих условиях, препятствующих ренатурации и возникновению вторичных структур у разделяемых фрагментов. В общем случае этим требованиям удовлетворяют 5-8% полиакриламидные гели, содержащие 7М мочевину. Обычно электрофорез проводится в трис-боратном буфере (89 mМ Трис-HCl, 8.9 mM борной кислоты, 2mM ЭДТА, рН 8.0-8.5). Для эффективного разделения напряжение должно составлять 30-50В на см длины геля. Важным условием при проведении э/ф является однородность температуры по всей поверхности геля. Неравномерный нагрев геля и стекол во время электрофореза способен привести к разнице в скоростях движения фрагментов ДНК по ширине геля и, как следствие, к искажению результатов. Для борьбы с этим явлением используют тонкие (обычно 0.4 - 0.1 мм) гели и принудительный подогрев стекол. В автоматическом секвенировании помимо электрофореза в пластинах полиакриламида чрезвычайно популярен капиллярный электрофорез в линейном полиакриламиде. Капилляры представляют собой стеклянную трубку длинной 30-100 см, закатанную в полимерный пластификатор. Небольшой диаметр капилляра (50-100 мкм) позволяет проводить разделение значительно быстрее, чем в обычных гелях. Кроме того, капиллярные секвенаторы позволяют обеспечивать гораздо более высокую чувствительность за счет отсутствия горизонтальной диффузии.

Cеквенаторы

Современные секвенаторы можно разделить по типу проводимого электрофореза на капиллярные и те, в которых разделение происходит в гелевых пластинах. Последние могут также различаться по количеству детектируемых красителей: один, два или четыре. Капиллярные секвенаторы выпускаются только в варианте, использующем детекцию четырех флуоресцентных красок.

Наиболее успешным секвенатором начала 90-х стал ABI 373 (Applied Biosystems). В этой модели используется одновременная детекция четырех красителей (TAMRA, FAM, ROX, JOE), возбуждаемых излучением аргонового лазера. Лазер генерирует непрерывное излучение в сине-зеленой области спектра в диапазоне 488-514 нм. Разделение фрагментов проводится в геле толщиной 0.4 мм. Возбуждение флуорофора и следующая за этим эмиссия флуоресценции происходят при прохождении меченным фрагментом ДНК зоны сканирования. Для уменьшения эффекта перекрывания спектров эмиссии, получаемый сигнал пропускается через колесо с четырьмя последовательно заменяемыми фильтрами. В результате, первичные данные представляют собой наборы из четырех чисел (в соответствии с сигналом, прошедшим через каждый из фильтров) для каждой точки сканирования (по ширине геля), собранные через равные интервалы времени в течение всего электрофореза.

Среди секвенаторов, детектирующих флуоресценцию одного красителя, можно выделить секвенатор MicroGene Blaster фирмы Visible Genetics. MicroGene Blaster позволяет одновременно проводить анализ четырех образцов, меченных Cy5.5, на 16-ти дорожках. Разделение происходит в одноразовых MicroCel кассетах, заполняемых фотополимеризуемым акриламидом. Высота кассет варьирует от 140 до 280 мм, что позволяет секвенировать от 300 (MicroCel 300 Cassette) до 700 (MicroCel 700 Cassette) нуклеотидов. В качестве источника излучения используется HeNe лазер с длинной волны 632.8 нм. Луч лазера направляется не через, а между стеклами, т.е. поперек геля. Это позволило отказаться от любых движущихся частей и, следовательно, значительно повысить надежность прибора и уменьшить его размеры.

Интересные секвенаторы, работающие на двух красителях в инфракрасной области спектра, выпускает фирма LI-COR. Ее основная машина - IR2 DNA Sequencer. Как известно, естественное инфракрасное излучение не свойственно биологическим макромолекулам и компонентам акриламидных гелей и это положительно отражается на качестве секвенирования. IR2 несёт два твердофазных полупроводниковых лазера, один из которых генерирует излучение с длиной волны 680 нм, а другой - 780 нм. В качестве красителей используются IRDye700 и IRDye800 или их производные. Детекция каждого из флуорофоров осуществляется своим фотодиодом. Причем, возбуждение/детекция красителей происходит не одновременно, а последовательно. Подобная двухканальная система позволяет: во-первых, избежать перекрывания спектров эмиссии (они разнесены на 100 нм), и во-вторых проводить одновременное двунаправленное секвенирование (сразу с двух праймеров, каждый из которых мечен своим красителем). Разделение фрагментов в IR2 проводится в гелях с высотой от 18 до 48 см и шириной 25 см, способных вмещать от 32 до 96 дорожек. Толщина гелей может варьировать от 0.2 мм до 0.4 мм. За один прогон IR2 DNA Sequencer способен определять более 1000 нуклеотидов и является по этому показателю рекордсменом.

Конкурентом IR2 DNA Sequencer стал секвенатор ABI Prism 377, который пришел на смену ABI 373. Основное новшество этой машины заключается в замене оптической фильтрации флуоресценции, которая использовалась в ABI 373 для разделения спектров испускания красителей, на "виртуальную" фильтрацию. В процессе сканирования эмиссия флуоресценции отделяется от отраженного света лазера, рассеивается посредством дифракционной решетки (это позволяет разложить исходный световой пучок на спектральные составляющие) и, наконец, фиксируется CCD-камерой. Т.е. в итоге кванты света преобразуются в пиксели во всем промежутке спектра от 514 до 680 нм. Какой именно набор пикселей преобразовать в пик на хроматограмме задается заранее через интерфейс программы Data Collection в зависимости от используемых флуорофоров и способа введения метки. Выпускается несколько модификаций ABI 377. Самый простой вариант обеспечивает автоматический обсчет 18-ти образцов, самый продвинутый - 96-ти. Расстояние до точки сканирования (т.е. дистанция разгонки) может варьировать в зависимости от размеров используемых стекол и составлять 12, 36 или 48 см (при толщине геля 0.2 или 0.4 мм). Максимально возможный размер определяемых фрагментов - 800-900 нуклеотидов.

Схожая технология записи и обработки данных используется в другом секвенаторе фирмы Applied Biosystems - ABI Prism 310. Это однокапиллярный секвенатор, способный в автоматическом режиме последовательно просканировать 96 образцов. Полный цикл для каждого из них составляет приблизительно полтора часа и включает: электрокинетическую инжекцию образца в капилляр, электрофорез, возбуждение/детекцию эмиссии флуоресценции и смену полимерного материала в капилляре перед инжекцией следующего образца. За указанное время ABI 310 способен прочитать приблизительно 450 нуклеотидов.

Несовершенные остеогенез

Несоверше́нный остеогене́з (лат. osteogenesis imperfecta) — группа генетических нарушений. Одна из заболеваний ломкости костей. Люди с НО либо имеют недостаточное количество коллагена, либо его качество не соответствует норме. Так как коллаген важный протеин в структуре кости, это заболевание влечёт за собой слабые или ломкие кости.

Будучи генетическим нарушением, НО является аутосомно-доминантным дефектом. В большинстве переданным по наследству от родителей, однако, возможна и индивидуальная спонтанная мутация.

Типы

Существует четыре типа НО, однако, симптомы варьируют от человека к человеку. 1-й Тип наиболее частая и лёгкая форма, за которой следуют 2-й, 3-й и 4-й Типы. Сравнительно недавно были классифицированы типы 5-й и 6-й, которые разделяют те же клинические особенности что и 4-й, но каждый из них имеет уникальные гистологические данные.

Й тип

Коллаген нормального качества, но вырабатывается в недостаточных количествах.

· Кости легко ломаются, в особенности до пубертата

· Лёгкое искривление спины

· Слабость связочного аппарата суставов

· Пониженный мышечный тонус

· Обесцвечивание склер (глазного белка), обычно придающие им голубовато-карий цвет

· Ранняя потеря слуха у некоторых детей

· Слегка выступающие глаза

Так-же различают 1-й тип A и 1-й тип B по наличию или отсутствию несовершенного дентиногенеза (характеризуемый опаловыми зубами; отсутствует в IA, присутствует в IB). Помимо повышенного риска фатальных переломов костей, ожидаемая продолжительность жизни в пределах нормы.

Й тип

Коллаген недостаточного количества или качества.

· Большинство случаев умирает на протяжении первого года жизни по причине дыхательной недостаточности или внутричерепного кровоизлияния,

· трудности с дыханием в связи с недоразвитыми лёгкими,

· тяжёлые деформации кости и невысокий рост.

2-й тип может быть далее разбит на подклассы A, B, C, различаемые радиографическим анализом длинной трубчатой кости и рёбер.

Й тип

Коллаген в достаточных количествах, но недостаточного качества.

· Кости ломаются легко, иногда даже при рождении,

· деформация костей, часто тяжёлые,

· возможны проблемы с дыханием,

· невысокий рост, искривление позвоночника, иногда так же бочковидная грудная клетка,

· слабость связочного аппарата суставов,

· слабый мускульный тонус в руках и ногах,

· обесцвечивание склер (глазных белков),

· иногда ранняя потеря волос.

3-й тип выделяется из других классификаций будучи типом «Прогрессивной деформации», где новорожденный представляет лёгкие симптомы при рождении и развивает вышеуказанные симптомы в процессе жизни. Продолжительность жизни может быть нормальной, хотя и с тяжёлыми физическими препятствиями.

Й тип

Коллаген достаточного количества, но недостаточно высокого качества.

· Кости ломаются легко, особенно до пубертата

· невысокий рост, искривления позвоночника и бочковидная грудная клетка,

· деформация костей в диапазоне от слабой до средней,

· ранняя потеря волос.

Подобно 1-му типу, 4-й тип может быть далее разделён на подклассы IVA и IVB, которым характерно отсутствие (IVA) или наличие (IVB) несовершенного дентиногенеза.

Методы терапии

Так как НО является генетическим заболеванием, возможные формы терапии ограничиваются исключительно симптоматическими методами лечения.

В частности к ним принадлежат:

· остеосинтез штифтом,

· физиотерапия,

· терапия Бисфосфонатом.

Остеосинтез штифтом

При остеосинтезе штифтом изогнутая кость сначала многократно остеотомируется, для того чтобы затем бусообразно нанизывать костные сегменты на интрамедуллярный гвоздь. Сначала для этого использовались жёсткие штифты. В растящей кости, однако, такие штифты приходилось периодически заменять, так как кость однажды становилось длиннее штифта, в следствии чего штифт не был больше способен служить поддержкой для кости. Следовали фрактуры в этих незащищённых областях. По этому в 1963 году ортопедами был сконструирован выдвижной штифт. При росте кости два сегмента штифта выдвигаются друг из друга по принципу устройства подзорной трубы и как-бы растут вместе с костью.

· Показан остеосинтез штифтом, людям с частыми переломами одной и той-же кости, с ложными суставами, а так же имеющим средние и тяжёлые смещение или функциональное нарушение суставов.

· Противопоказан в том числе при тяжёлом общем состоянии, сердечно-дыхательной недостаточности или отсутствии возможности закрепления штифта в кости из-за недостатка костной ткани.

Билет 15.