Drechslera (Bipolaris) sorokiniana; 2 - Drechslera graminea; 3 – Drechslera teres.

Для стимуляции образования конидиеносцев и конидий с целью идентификации па­тогенов некоторых грибов, например, полосатая пятнистость, сетчатая пятнистость, снежная плесень и др., необходимо 12 ч чередование света и темно­ты при проращивании семян в чашках Петри, Коха или стекляных стаканах с фильтровальной бумагой (освещенность 750-1250 люкс).

Анализ семян на питательных средах

Из средней пробы, предназначенной для определения зараженности, выделяют навес­ку семян основной культуры, из которой отбирают четыре рабочие пробы по 50 семян в каждой и помещают их в стерильную посуду с питательной средой.

Приготовление картофельного агара

200 г вымытого, очищенного, нарезанного ломтиками картофеля заливают 1000 см³ воды и кипятят в течение 40 мин, затем жидкость фильтруют. В отфильтрованную жидкость доливают воду до 1000 см³, добавляют 20 г агара и подогревают до его полного растворения. После растворения агара раствор фильтруют в горячем состоянии через несколько слоев марли с ватной прокладкой и стерилизуют под давлением 0,09807 МПа (1 атм) в течение 30 мин или текучим паром два раза по 1 ч через сутки. После стерилизации в питательную среду добавляют стерильный 50 %-ный раствор лимонной кислоты из расчета 0,1-0,05 см³ (одна капля) на 10 см³ или концентрированную молоч­ную кислоту (4 см³ кислоты на 1000 см³ среды) и жидкость разливают по чашкам Петри.

 

Рис.19. Возбудители болезней на семенах бобовых культур:

1 – Ascochyta pisi (пикниды и споры); 2 – Colletotrichum lindemuthianum (ложе гриба с конидиеносцами, конидиями и щетинками); 3 – Aureobasidium pullulans (ложе со спороношением гриба); 4 - Botrytis anthophila (конидиеносцы с конидиями); 5 – Botrytis cinerea (конидиеносцы с конидиями); 6 – Fusarium solani (макро - и микроконидии).

Приготовление картофельно-глюкозного агара:

На 1 дм³ приготовленного картофельного агара перед стерилизацией добавляют 20-30 г глюкозы, а после стерилизации лимонную или молочную кислоту.

Приготовление среды из сухого агара Чапека

На 1 дм³ берут 45-50 г сухого агара Чапека и стерилизуют под давлением 0,09807 МПа (1 атм) в течение 30 мин.

Стерилизацию питательных сред проводят в автоклаве под давлением, без давления (текучим паром) или в кипятильнике.

Питательные среды без глюкозы стерилизуют под давлением 0,09807 МПа (1 атм) в течение 30 мин, питательные среды с глюкозой стерилизуют под давлением 0,04904 МПа (0,5 атм) в тече­ние 25 мин.

Стерилизацию питательных сред текучим паром проводят в два приема по 1 ч через сутки. В перерыве между первым и вторым приемами стерилизуемые жидкости держат при температуре 25-30°С.

В стерильные чашки Петри диаметром 9,5-10 см наливают 10 см³ простерилизованного агара. Толщина слоя среды в чашке Петри должна быть 3-4 мм. Разливку питательных сред в чашки и закладку семян проводят в бактериологической камере (стерильном боксе). Раскладку се­мян проводят на застывшую питательную среду пинцетом, периодически стерилизуя его обжигани­ем на спиртовке.

Рис.20. Возбудители болезней на соплодиях и семенах свёклы:

Phoma betae (пикнида со спорами); 2 – Uromyces betae (а – урединиоспоры, б – телиоспоры); 3 – Cercospora beticola (конидиеносцы с конидиями); 4 – Peronospora schachtii (конидиеносец с конидиями); 5 – Erysiphe communis (а – конидиеносцы с конидиями, б – клейстотеций, в – сумка с сумкоспорами).

Семена промывают струей воды под водопроводным краном в течение 1-2 ч и дезин­фицируют 1 %-ным раствором марганцовокислого калия или 0,1 %-ным раствором азотнокислого серебра, или 96 %-ным спиртом в течение 1-2 мин. Затем семена промывают в стерильной или прокипяченной воде и просушивают между листами стерильной фильтровальной бумаги. Семена помещают в чашки Петри по 10-25 шт. в зависимости от культуры и ставят их для проращивания в термостат при температуре 22-25 °С. Проращивание семян проводят в течение срока, указанно­го для определения всхожести семян по ГОСТ 12038 - 84. Для контроля правильности определения болезней при просмотре семян небольшую часть развившейся колонии исследуют в капле воды под микроскопом.

 

Рис.21. Возбудители болезней на семенах овощных культур:

1 - Colletotrichum lagenarium на тыквенных (видны щетинки, конидиеносцы и конидии); 2 - Alternaria brassicae (конидии гриба); 3 – Alternaria oleraceae (конидии); 4 – Alternaria rodicina (конидии).