Вопрос 23/8. Техника приготовления препаратов для диагностики микозов, описание элементов гриба в препарате

вопрос 24   Техника приготовления препаратов, окраска препаратов Мокроты

Приготовление нативных (неокрашенных) препаратов.

Мокроту распределяют шпателем или иглой в чашке Петри. Выбирают частицы, которые выделяются своим цветом, консистенцией. Если таковых нет, то выбирают частицы из середины комков. Отобранный материал переносят на предметное стекло. Накрывают покровным стеклом и слегка его придавливают. При этом следует получить тонкий полупрозрачный препарат. Мокрота не должна выступать за края покровного стекла.

3. Микроскопическое исследование нативного препарата мокроты.

Полученный нативный препарат просматривают с опущенным конденсором сухими системами микроскопа при малом увеличении (объектив 10х), продвигая его, пока не будет просмотрен весь препарат. Для уточнения элементов, обнаруживаемых под малым увеличением, меняют объектив 40х. Подсчет найденных элементов ведется под большим увеличением по полям зрения.

Для бактериоскопического исследования готовят обычно два препарата: один для обнаружения микобактерий туберкулеза, другой — для обнаружения прочих микроорганизмов. Для первого препарата отбирают те же частицы, которые были предназначены для микроскопии, для второго — гнойные частицы. Взятый материал распределяют по предметному стеклу до получения достаточно тонкой ажурной сеточки (материал на первом стекле распределяют на 2/3 его поверхности, на втором — в центре). Затем оба эти препарата фиксируют путем троекратного проведения над пламенем горелки. Первый препарат окрашивают по методу Циля — Нильсена, окраску второго препарата производят по методу Грама.

Окраска по Цилю — Нильсену.

 Предметные стекла помещают на мостик с промежутками между краями. Мазки накрывают фильтровальной бумагой. На всю поверхность фильтровальной бумаги, покрывающей стекло, наносят карболовый фуксин Циля. Стекло с мазком медленно нагревают над пламенем спиртовки до появления пара. Не допускается кипение или высушивание окрашивающего раствора на предметном стекле. Если раствора недостаточно, его можно добавить еще и нагреть второй раз. Мазок с прогретым раствором оставляют на 5 мин, после чего фильтровальную бумагу удаляют пинцетом и помещают в бачок для сбора отходов. Каждое предметное стекло аккуратно ополаскивают отдельно под слабой струей воды из водопроводного крана до полного удаления окрашивающего раствора. Мазок держат ребром к струе воды. Не разрешается смывать и обесцвечивать одновременно несколько мазков во избежание перекрестного заражения. Все стекла помещают на мостик и обрабатывают, каждый из них индивидуально, 250 г/л раствором серной кислоты до полного отхождения краски. Смывают каждое предметное стекло, как описано выше. Затем каждый мазок обрабатывают 96% этиловым спиртом в течение 5 мин и промывают водой. Обесцвеченные, промытые стекла с мазками докрашивают (3 г/л водным раствором метиленового синего в течение 60 с), промывают, как описано выше, оставляют сушить на воздухе.

Окраска по Граму.

Краски и реактивы:

· разведенный фуксин Циля;

· реактив Люголя.

Техника окраски. На фиксированный препарат накладывают белую фильтровальную бумажку, на которую наносят несколько капель 1 % карболового раствора кристаллического фиолетового. Через 1—2 мин бумажку сбрасывают и на препарат наливают 1—2 капли реактива Люголя. Через 1—2 мин препарат обесцвечивают 1—2 каплями 96 % этанола до появления бледно - серой окраски материала, смывают водой, на 10—15с наносят разведенный фуксин Циля, после чего вновь смывают водой и высушивают. В препаратах могут быть обнаружены стафилококки, стрептококки, диплококки, спирохеты Венсана и другие микроорганизмы.