Работа № 9. Определение группы крови по системе аво

 

Под группами крови АВО понимают различные сочетания антигенов (агглютиногенов), находящихся в эритроцитах, и антител по отношению к ним (агглютининов), находящихся в плазме крови.

Существует два групповых агглютиногена (А и В) и два агглютинина (α и β). Разные сочетания этих свойств образуют четыре группы крови: О

(I), А (II), В (III) и АВ (IV).

Для установления группы крови используются стандартные сыворотки, содержащие определенный титр агглютининов или цоликлоны.

Метод определения группы крови по системе АВ0 основан на смешивании капли крови с раствором, содержащим агглютинины – антитела против антигенов А и В (агглютиногенов).

В качестве таких растворов служат моноклональные анти-А и анти-В антитела, поликлональные иммунные сыворотки или сыворотки крови лиц со II и III группами крови.

 

Ход работы

Исследование группы крови производите в цельной крови, забранной из пальца. На планшет в разные лунки индивидуальными пипетками нанесите растворы анти-А и анти-В по одной большой капле (0,1 мл). Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01–0,03мл). Стеклянной палочной (разными концами в каждой лунке) смешайте кровь с реагентами.

За ходом реакции наблюдайте визуально при легком покачивании пластины в течение 3 минут. Результат реакции в лунках может быть либо положительным, либо отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты наблюдаются в виде мелких красных агрегатов, быстро склеивающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

Таблица. Интерпретация результатов реакции агглютинации

 

Результат реакции с раствором агглютинина		Принадлежность исследуемой крови
анти-А	анти-В	к группе крови
—	—	0 (I)
+	—	A (II)
—	+	В(III)
+	+	АВ(IV)

Примечание. «+» - наличие агглютинации, «–» – отсутствие агглютинации.

Рекомендации по оформлению протокола работы

Интерпретируйте результаты реакции агглютинации в соответствии с данными, приведенными в таблице.

 

Работа № 10. Определение резус-фактора

 

Определение резус-принадлежности заключается в выявлении в эритроцитах крови человека наличия или отсутствия особого белка (антигена), названного резус-фактором.

Выделяют три разновидности резус-антигена: D, С, Е. Наибольшей активностью обладает антиген D, поэтому именно его определение имеет важное значение. Группы крови, в которых содержится антиген Rh(D), условно принято считать резус-положительными (Rh+), а группы крови, не содержащие антигена Rh(D) – резус-отрицательными (Rh-).

Метод определения резус-принадлежности – резус-фактора (Rhфактора) крови человека – основан на смешивании капли крови с раствором, содержащим антитела против резус-антигена (D).

В качестве таких растворов служат моноклональные анти-Dантитела или поликлональная иммунная антирезусная сыворотка. Ход работы

Исследование группы крови производите в цельной крови, забранной из пальца. В лунку эмалированного планшета внесите большую каплю (0,1 мл) реагента – раствора с антирезусными антителами. Рядом поместите маленькую каплю исследуемой крови (0,01–0,03мл). Стеклянной палочкой кровь смешайте с реагентом.

В течение 3 мин наблюдайте за ходом реакции визуально при легком покачивании пластины. Результат реакции в лунках может быть либо положительным, либо отрицательным.

Рекомендации по оформлению протокола работы

Сделайте вывод, исходя из того, что положительный результат выражается в агглютинации (делается вывод о наличии в крови испытуемого резус-фактора, то есть резус-положительности). При отрицательном результате агглютинация отсутствует (делается вывод об отсутствии в крови испытуемого резус-фактора).