Химическое исследование мочи.

Реакцию определяют в свежей моче. При длительном стоянии мочи реакция сдвигается в щелочную сторону. Качественное определение проводят при помощи лакмусовой (индикаторной) бумажки. В щелочной моче красная бумажка синеет, в кислой - синяя краснеет, в нейтральной - цвет бумажки не изменяется, в амфотерной - меняется.

Истинная кислотность мочи зависит от концентрации водородных ионов и выражается в рН (водородное число). Определение проводят электрометрически рН-метром, потенциометром, специальными индикаторами (Михаэлиса и др.). Существует титрационный способ, когда кислотность мочи определяют титрованием едким натром. Нейтральной моча читается при рН = 7,4. Степень титрационной кислотности определяют в суточной моче в миллиэквивалентах.

Реакция мочи непостоянна, как у крови, и не отражает истинного колебания кислотно-щелочного равновесия в организме.

Белок.

Качественное определение белка. Кипятят 3-5 мл мочи после добавления нескольких капель 10 % - ного раствора уксусной кислоты. При наличии белка образуется опалесценция или хлопьевидный осадок. При низкой плотности мочи к 5-10 мл ее добавляют 1-2 мл насыщенного раствора поваренной соли и 3-6 капель 30 %-ного раствора уксусной кислоты.

Проба с азотной кислотой (Геллера). В пробирку наливают 2-3 мл мочи, подслаивают ниткой 1-2 мл 50%-ного раствора азотной кислоты или мочу осторожно наслаивают по стенке пробирки. В присутствии белка на границе жидкостей появляется белое кольцо из свернувшегося белка. При содержании белка 0,0033 % кольцо появляется через 3 мин. Такое же кольцо дают протеозы, бальзамические вещества, нуклеальбумины, муцин, желчные пигменты. Моча, богатая уратами, может дать кольцо выше границы жидкостей. При легком подогревании оно исчезает. Муть, появившаяся от присутствия муцина, располагается выше границы жидкостей и выражена нерезко.

Количественное определение белка в ветеринарной практике проводят редко. Используют методы Эсбаха и Робертса-Стольникова. Последний основан на пробе с азотной кислотой. Делают с дистиллированной водой разведения мочи 1:2, 1:4,, 1:8, 1:16, 1:64. Подслаивают раствор азотной кислоты, отмечают, в какой пробирке через 3 мин образуется белое кольцо. Умножают на степень разведения мочи и получают процентное содержание в ней белка.

Определение альбуминоз. К 5 мл мочи добавляют 5-7 капель 20 %-ного раствора сульфосалициловой кислоты. Получается осадок, который при нагревании растворяется. Когда в моче имеются и белок, и протеозы, хлопьевидный осадок или опалесценция при нагревании не исчезают. Нагретое до кипения содержимое пробирки фильтруют. Помутнение фильтрата после охлаждения указывает на наличие в моче протеоз. которые проходят через фильтр, а белок остается.

Различают пиогенную протеозурию и гематогенную (энтозагенную). Первая возникает при сильном клеточном распаде в организме, гнойно-гнилостных процессах, паранефрите, пиелонефрите, иногда после введения туберкулина; вторая - при отравлении различными ядами (фосфором и др.), нарушениях процессов всасывания в желудочно-кишечном тракте, язвах желудка и кишечника, заболеваниях печени, лейкозе, в физиологических условиях при попадании спермы в мочу. При наличии в моче белка могут быть протеозы в незначительных количествах вследствие действия на белок пепсина мочи.

Протеинурия. Протеинурию различают почечную (истинную), внепочечную (ложную) и смешанную. Почечная протеинурия может быть физиологической, функциональной и патологической. К физиологической протеинурии относят временное незначительной появление белка в моче, не связанное с заболеваниями. Может быть при скармливании животным кормов, богатых неденатурированными белками (сырое молоко, яйца, большое количество концентратов), сильных мышечных напряжениях, обильном потоотделении, переохлаждении, сильных эмоциях (у собак).

Функциональная протеинурия возникает вследствие нарушений и не связана с органическими поражениями почек. Она может быть в последний период беременности вследствие расстройства почечного кровообращения от механического давления матки на почечные сосуды, у новорожденных в первые 72 часа жизни вследствие незаконченности анатомического и функционального развития почек.

Циклическая протеинурия возникает при инфекционных заболеваниях без поражения паренхимы почек и характеризуется появлением белка, но только в дневных порциях мочи.

Ортостатическая протеинурия появляется у слабого рахитичного молодняка вследствие поражения поясничных позвонков и характеризуется отсутствием белка только в утренней моче.

Протеинурия возникает также при застойных явлениях в почках, нарушении кровообращения, аллергических состояниях, при нервных заболеваниях, лейкозе, ацидозе, пониженном артериальном давлении.

Патологическая почечная протеинурия связана со структурными изменениями в клубочках и эпителии канальцев. Она наблюдается при острых и хронических диффузных нефритах. Количество белка может колебаться в основном в пределах 0,5 - 1,0 %, при сморщенной почке в пределах - 0,025 -0,05 %, при некрозах 3-5 %.

Симптоматическая протеинурия нередко возникает при инфекционных (чума собак, рожа свиней др.) и паразитарных заболеваниях, отравлениях фосфором, мышьяком, хлороформ, растительными ядами, плесенью и обширных ожогах. Внепочечная (нереальная) протеинурия появляется при заболеваниях почечной лоханки (пиелит), мочеточников, мочевого пузыря, предстательной железы, половых органов (у самок). Смешанная протеинурия возникает при наличии реальной и нереальной протеинурии.

Протеозурия. Протеозы представляют собой продукт расщепления -распада белка. Они в отличие от белка не свертываются при кипячении и дают биуретовую реакцию.

Сахар.

Проба с сернокислой медью (Гайнеса). Кипятят 3 мл реактива Гейнеса, добавляют 5-6 капель мочи и доводят до кипения. Проба положительная, если появляется желто-бурое (кирпичное) окрашивание от восстановления серно-кислой меди до закиси меди. Чувствительность пробы до 0,03 %. Реактив Гайнеса готовят следующим образом: 2 г сульфата меди растворяют при нагревании в 100 мл смеси из равных количеств чистого глицерина и дистиллированной воды и добавляют 150 мл 5%-ного раствора едкого калия.

Проба Ниляндера (с азотнокислым висмутом). В 2 мл мочи прибавляют 3-4 мл реактива Ниляндера, смесь нагревают до кипения. При наличии сахара в моче содержимое пробирки окрашивается в коричневый или черный цвет.

Нормальная моча содержит глюкозу в виде следов и поэтому она не обнаруживается качественными пробами. Различают глюкозурию физиологическую и патологическую. Физиологическая наблюдается в течение короткого времени при избыточном введении с кормом углеводов, особенно у беременных животных. Возникает она вследствие ограниченной способности почечного эпителия (канальцев) к реабсорци глюкозы. Она может быть при сильном беспокойстве животных, испуге (чаще у собак),перед родами и после них, при закупорке сосков, при отнятии сосунов от маток. В этих случаях в моче появляется не глюкоза, а лактоза.

Глюкозурия может возникнуть под влиянием некоторых лекарств; внутривенного введения изотонического раствора хлорида натрия, введения камфоры (появляются в моче пентозы), диуретина.

Патологическая глюкозурия отмечается при диабете, диффузном поражении почек (нефрите), заболеваниях нервной системы; воспалении головного и спинного мозга, травмах черепа, кровоизлияния в мозг, бешенстве, чуме собак. Он может быть при родильном парезе, мастите. Токсическая глюкозурия возникает при отравлении хлороформом, хлором гидратом, фосфором, окисью углерода, адреналином, при перекорме сахарной свеклой, фруктами (яблоками, грушами). Описаны массовые отравления при поедании 20 кг яблок и более. Патологическая глюкозурия чаще всего постоянна и длительна.

При наличии в моче значительного количества сахара она становится бледной, имеет кислую реакцию, повышенную кислотность, при отстаивании быстро мутнеет с образованием пузырьков газа.

Кровь и кровяные пигменты.

Появление эритроцитов в моче называется гематурией, а только одного гемоглобина при распаде - гемоглобинурией. Кровь в свежей моче можно определить под микроскопом. Наличие в моче крови и пигментов крови определяют химическими пробами.

Бензидиновая проба. К 2-3 мл перекиси водорода добавляют 15-20 капель раствора бензидина до появления молочной опалесценции. Смесь взбалтывают и в нее по каплям вносят мочу. При наличии в моче пигментов крови на границе соприкосновения жидкостей появляется зеленое окрашивание, быстро переходящее в синее или изумрудно-зеленое.

Проба с пирамидоном. К 5 мл мочи прибавляют 1 мл ледяной уксусной кислоты,смесь взбалтывают, добавляют 5-6 капель 5%-ного спиртового раствора пирамидона и 6-8- капель 3%-ного раствора перекиси водорода. При наличии пигментов крови в моче жидкость окрашивается в фиолетовый цвет.

Проба Геллера. К 5 мл мочи добавляют 2 мл едкой щелочи и кипятят. При наличии в моче крови выпадают красные хлопья.

Проба с перекисью водорода. В пробирку наливают 7-8 мл мочи, прибавляют 3-5 капель 3 % перекиси водорода, содержимое сильно встряхивают. При наличии крови в моче на поверхности жидкости образуется слой пены с пузырьками.

Макрогематурия - обнаружение в моче крови невооруженным глазом, микрогематурия - под микроскопом. С мочой в сутки выделяется до 2 мл лейкоцитов и до 1 мл эритроцитов. Выделение больших количеств является патологией. Под микроскопом в поле зрения видны отдельные лейкоциты и эритроциты. При наличии в 1 мл мочи 0,25 мл крови под микроскопом все поле зрения усеяно эритроцитами. При наличии 1 мл крови в 1 мл мочи она принимает красную окраску.

Гематурия возникает при многих заболеваниях: разрыве почек, застойных явлениях в почках, травмах почек и мочевого пузыря, наличии паразитов в почечной лоханке, цистите, инфекционных заболеваниях (сибирская язва, чума собак) и др. Незначительная гематурия может возникнуть после длительной перегонки скота. При мочекаменной болезни наблюдают постоянное присутствие крови в моче, количество которой при движении увеличивается. При сильной гематурии в моче появляются червеобразные сгустки темно-вишневого цвета. В литературе описана хроническая гематурия крупного рогатого скота, возникающая вследствие низкого содержания в почке и,соответственно, в кормах кальция и фосфора при одновременном высоком содержании алюминия, резком недостатке фосфора, отравлении папоротником. Можно установить, из каких отделов мочевой системы истекает кровь: если из уретры, то кровь истекает в виде капель или обнаруживается при мочеиспускании в первых порциях мочи; из мочевого пузыря - в последних порциях мочи, из почек и почечной лоханки -во-всех порциях мочи. В последнем случае под микроскопом можно обнаружить в моче эритроцитарные цилиндры, выщелоченные эритроциты вместе со свежими, а макроскопически - червеобразные сгустки крови. Для определения количества эритроцитов центрифугируют 100 мл мочи. В счетной камере Горяева подсчитывают эритроциты и результаты умножают на суточное количество мочи.

Гемоглобинурия возникает вследствие разрушения эритроцитов под воздействием гемолитических ядов, когда в организме гемолизируется более 1/60 части крови от общего количества. В осадке мочи нет или очень мало эритроцитов. Гемолобинурия может быть при солнечном и тепловом ударах, обширных ожогах, беременности и др. Симптоматическая гемоглобинурия возникает при кровепаразитарных и септических заболеваниях. Токсическая гемоглобинурия возникает вследствие действия биологических ядов (сулемы, креолина, карболовой кислоты, четыреххлористого углерода, фенолов и др.) и растительных алкалоидов (поедание куколя, горчака, гулявника, звездчатки, люпина, побегов сосны и др.).

Миоглобинурия - появление в моче миоглобина мышц - наблюдается при повреждении мышц, паралитической миоглобинурии лошадей. В мышцах накапливается молочная кислота, и под влиянием гидрофилина выщелачивается миоглобин, который, попадая в кровь, выделяется почками. По химической структуре миоглобин близок к гемоглобину, но качественными пробами на пигменты крови его обнаружить нельзя. Для выявления миоглобина применяют качественную пробу Блондингема. Она основана на том, что гемоглобин высаливается при более низких концентрациях соли, чем миоглобин, поэтому при 80% насыщенности гемоглобин выпадает из раствора, а миоглобин остается в нем.

Проба Блондингема. К 1 мл мочи прибавляют 3 мл раствора сульфосалициловой кислоты, смешивают и фильтруют. Наличие красно-коричневого осадка указывает, что в моче находится пигмент белковой природы - миоглобин или гемоглобин. Для выяснения характера пигмента в 5 мл мочи растворяют 2,8 г кристаллического сульфата аммония, фильтруют. Если фильтрат имеет красно-коричневую окраску, то в моче миоглобин, если цвет нормальный - то в моче гемоглобин (табл. 4).

 

19. Определение качества спермы сельскохозяйственных животных.

Понятие об оценке качества спермы включает в себя определение его биологической полноценности, т.е. способ­ности оплодотворить яйцеклетку и дать начало новому жизнеспособному по­томству. Методы определения оплодотворяющей способности спермы делят­ся на прямые и косвенные. К первой группе относится определение по ре­зультатам осеменения (отел, ректальное исследование через 2,5-3 месяца по­сле отела, отсутствие полового цикла). Как видно, для оценки спермы этими методами требуется длительное время. Поэтому в практике, наряду с прямы­ми, применяются косвенные методы. Эти методы позволяют быстро, в тече­ние 10-30 мин определять качество и количество спермиев, полученных в эя­куляте и назначить для осеменения такую дозу спермы, которая обеспечива­ла бы плодотворное осеменение, но не допускала ненужного перерасхода спермы. Ибо одним из необходимых условий получения максимального ко­личества приплода от ценных производителей - это рациональное использо­вание их спермы.

Ценность того или иного косвенного или предварительного метода оценки качества спермы определяется степенью его корреляции с показате­лем оплодотворяющей способности спермы.

Для прогнозирования оплодотворяющей способности спермы предло­жены физические, биохимические, биологические методы исследования. В их число входят органолептическая оценка по объему, запаху, цвету, конси­стенции, однородности, определение рН, осмотического давления, подвиж­ности, выживаемости спермиев, процента их с аномальной морфологией, ос­мотической резистентностью, устойчивости к холодовому удару, содержание аденозинтрифосфата, активности дегидрогеназ.

В практике искусственного осеменения наибольшее применение полу­чила оценка спермы по органолептическим признакам, концентрации, под­вижности и переживаемости.

Для определения качества спермы на чистое предметное стекло сте­рильной палочкой или пипеткой наносят каплю спермы, накрывают покров­ным стеклом и микроскопируют при увеличении 140-300 раз. Исследования проводят при температуре 38-40°С, для чего применяют специальные термо­статы или обогревательные столики (водяные, электрические).

Сперма может быть густой (средней густоты) - Г, редкой - Р, и без спер­миев - А - азоспермия.

Сперма густая - все поле зрения микроскопа густо заполнено спермия-ми. Соответствует приблизительно концентрации более 1 млрд. спермиев.

Сперма средняя - между спермиями имеются промежутки примерно равные длине спермия. Концентрация такой спермы от 600 млн. до 1 млрд. спермиев.

Сперма редкая - в поле зрения микроскопа промежутки между спер­миями превышают их длину. В 1 мл такой спермы содержится менее 600 млн. спермиев.

Для более точного определения концентрации спермиев применяют счетные камеры (Томма, Горяева и др.), фотоэлектрические колориметры или электрогемометры в соответствии с имеющимися наставлениями к этим приборам.

Активность (подвижность) спермы определяют по десятибалльной шкале. Чем она подвижнее, тем лучше качество спермы. Высшую оценку -10 баллов ставят, когда более 95% спермиев имеют прямолинейно-поступательное движение, 9 баллов соответственно - 90%, 8 баллов - 80% и т.д.

Если в поле зрения микроскопа видны спермии с манежным движением (при попадании в сперму воды), то такую сперму обозначают буквой М, с колебательным - К, а неподвижность их - Н. Окончательно оценивают каче­ство спермы с учетом густоты и активности, например: Г - 9 сперма густая, содержит 90% спермиев с прямолинейно-поступательным движением.

Микроскопическое исследование эякулята показывает, что среди нор­мальных спермиев всегда встречаются патологические формы в виде изоли­рованных головок и хвостиков, гигантских и карликовых спермиев, спермиев с двумя головками, с двумя хвостиками, с головками неправильной формы, с закрученными и ненормально искривленными хвостиками.

Присутствие в сперме большого количества спермиев с ненормальной формой называется тератоспермией. В качестве конкретных причин образо­вания уродливых форм спермиев отмечаются:

1. Поражение семенника и придатка (гигантские и карликовые спермия).

2. Длительные промежутки между коитусами (обуславливающие старе­ние и распад спермиев в придатке), отдельные головки, изолированные хво­стики.

3. Половое истощение производителя вследствие большой половой на­грузки или недостаточного кормления (спермии с протоплазматической кап­лей в области шейки, тела и хвоста, т.е. незрелые спермии).

Быки, дающие сперму с содержанием более 18% уродливых спермиев, должны рассматриваться как бесплодные.

Определение выживаемости (живучести) спермиев вне организма. Из­вестно, что чем дольше сохраняется жизнь спермиев, тем выше их оплодо­творяющая способность. В.К. Милованов (1962) предложил определять абсо­лютный показатель живучести спермы. Делается это так. Образец спермы, после разбавления эякулята, оставляют в холодильнике при 2-5⁰ С и ежеднев­но определяют активность спермиев при температуре 38-40⁰ С до полной их гибели. Суммировав все произведения времени (в часах), в течение которого наблюдалась та или иная активность, на активность спермиев (в баллах), получают абсолютный показатель живучести. Для спермы быка он должен быть не ниже 1400. Максимальная продолжительность жизни спермиев (в ча­сах) должна быть для спермиев быка - не менее 200.

Для определения выживаемости спермиев после оттаивания применяют экспресс-метод. Сперму после оттаивания ставят на инкубацию в водяную баню при температуре 38°С. Фиксируют время оттаивания и одновременно определяют исходную подвижность спермиев. Через 5 часов оценку повто­ряют. Пригодной для осеменения считают сперму быка, исходная подвиж­ность которой не менее 4 баллов и выживаемость 5 ч.

Согласно действующим в настоящее время ГОСТам, свежеполученная сперма быка считается пригодной для разбавления, если она соответствует следующим требованиям:

Объем эякулята не менее 3,0 мл;

Цвет - молочно-белый или кремовый;

Консистенция сливкообразная;

Запах - нормальная сперма быка запаха не имеет;

Концентрация спермиев - не менее 0,4 млрд/мл;

Подвижность - не менее 8,0 баллов;

Выживаемость спермиев при 2-5°С после разбавления ГЦЖ средой:

Относительная - не ниже 249 ч;

Абсолютная - не ниже 1400 ч.

Количество спермиев с аномальной морфологией - не более 18%;

Количество патогенных микробов в 1 мл - не более 5000.

 

 

20. Определение физических и биохимических свойств молока и молозива.

 

Биохимические свойства молока. Биохимические показатели молока обусловливаются свойствами его компонентов. Важнейший биохимический показатель молока - его кислотность. Определяют титруемую и активную кислотность.

Кислотность молока обусловливается главным образом наличием в нем кислых солей и белков. Ее выражают в показателях титруемой и активной кислотности.

Титруемая кислотность выражается в градусах Тернера (°Т). Под градусом Тернера понимают количество миллилитров 0,1 н раствора гидроксида натрия, которое расходуется на нейтрализацию (титрование) 100 мл молока, разбавленного вдвоедистиллированной водой.

Титруемая кислотность свежего молока 16-18⁰Т. Она обусловливается наличием в молоке лимонной кислоты и ее солей. В процессе хранения молока по мере развития микроорганизмов, сбраживающих молочный сахар, в молоке накапливается молочная кислота, повышающая титруемую кислотность.

Кислотность молока зависит от ряда факторов: породы, индивидуальных особенностей, условий кормления, стадии лактации коров. Молоко коров, больных скрытой формой мастита, имеет пониженную кислотность - 6-8⁰Т.

Показатель титруемой кислотности используется для установления свежести и сорта молока, а также для выявления возможности его пастеризации или стерилизации и переработки на молочные продукты.

Активная кислотность (рН) - это показатель, характеризующий активность ионов водорода.Активная кислотность (рН) свежевыдоенного молока 6,6-6,8. От активной кислотности молока зависит его термоустой-чивость, активность ферментов, условия роста микрофлоры заквасок и образование веществ, обусловливающих вкус и запах молочных продуктов.

Бактерицидные свойства молока. Способность свежевыдоенного молока препятствовать развитию в нем микроорганизмов называется бактерицидным свойством. Продолжительность (время) сохранения молоком бактерицидных свойств называется бактери­цидной фазой. Бактерицидные свойства молока обусловливаются наличием в нем бактерицидных веществ. Пока сохраняются бактерицидные вещества, молоко не скисает. Предполагают, что бактерицидные вещества близки к антите­лам сыворотки крови, из которой они попадают в молоко, и скон­центрированы в глобулине. Молозиво, содержащее больше глобу­лина, обладает более выраженными бактерицидными свойствами, чем молоко.

Физические свойства молока. По показателям, характеризую­щим физические свойства молока, можно судить о его качестве. К физическим свойствам молока относятся плотность, вязкость, поверхностное натяжение, точки замерзания и кипения, электро­проводность, удельная теплоемкость, окислительно-восстанови­тельный потенциал, число рефракции. Из физических показателей молока в практике наиболее широ­ко используют плотность и точку замерзания.

Плотность молока - это один из основных комплексных показателей как безопасности, так и качества молока-сырья при выработке всех молочных продуктов. Плотность молока зависит от его химического состава, породы скота, рационов кормления (при скармливании сочных кормов плотность снижается, концентрированных - увеличивается), состояния здоровья животных (при лейкозе плотность молока снижается до 1023 кг/м³).

Плотность молока зависит от температуры и содержания в нем составных частей, которые имеют в среднем следующую плотность (кг/м³): молочный жир - 922, белки - 1391, молочный сахар - 1610, соли - 2857. Так как химический состав молока непостоянен, то и плотность колеблется в пределах от 1027 до 1032 кг/м³.

Плотность молока, определенная сразу после дойки, ниже плотности, измеренной через несколько часов после дойки, на 0,8-1,5 кг/м³, что объясняется стабилизацией структуры молока (переходом жира из жидкого в твердое состояние, улетучиванием части воздуха и т.д.). В связи с этим плотность необходимо контролировать спустя 2 часа после дойки.

По плотности молока судят о его натуральности. При добавлении к молоку воды плотность его снижается (10 % добавленной воды снижает плотность молока в среднем на 3 кг/м³). Подснятие сливок или разбавление обезжиренным молоком вызывает повышение плотности молока.

Для установления натуральности молока используется показатель температуры (точки) замерзания молока.

Точка замерзания молока - постоянное физико-химическое свойство молока, которое обусловлено его истинно растворимыми составными частями - лактозой и солями. Определение точки замерзания - единственно надежный способ проверки натуральности молока. Температура замерзания молока в зависимости от породы животных и региона обитания животных имеет колебания от минус 0,525 до минус 0,565 °С.