Часть 2. Развернутая реакция агглютинации в пробирках.

Ход работы: в штативе устанавливают 7 пробирок. В 7-ю наливают 2,4мл физ. р-ра. Во все остальные – по 1мл.

1. В 7-ю пробирку добавляют 0,1мл сыворотки больного – получают разведение сыворотки 1:25.

2. Из 7 пробирки в 1-ю вносят 1,0мл разведенной сыворотки (получают разведение 1:50), перемешивают. Из нее 1,0 мл сыворотки переносят во вторую пробирку (получают разведение 1:100), перемешивают и переносят 1,0 мл сыворотки в 3-ю пробирку…и т.д. до 5-ти. В 6-ю пробирку сыворотку не вносят, так как в ней – контроль антигена.

3. В 1-6 пробирки вносят по 3 капли диагностикума. Штатив помещают в термостат на 2 часа при 37С. Делают предварительный учет, окончательный учет через 18-20 часов, выдерживая при комнатной температуре.

 

Ингредиенты	1	2	3	4	5	6	7
	1:50	1:100	1:200	1:400	1:800	КА	КС(1/25)
0,9%р-р Nacl   сыворотка больного   диагностикум (в каплях).	1,0   1,0 3	1,0   1,0 3	1,0   1,0 3	1,0   1,0   3	1,0   1,0 3	1,0   1,00 Вылить 3	2,4   1,0   3 -
Результат

Учет результатов начинают с контролей. Контроль сыворотки должен оставаться прозрачным, контроль антигена – равномерно мутным. Просматривают пробирки в подхлдящем свете с помощью лупы или агглютиноскопа. Агглютинат постепенно оседает на дно в виде «зонтика», а жидкость над осадком просветляется.

       Вывод:

Занятие № 9                                                                          Дата_____________________

 

Тема: Иммунодиагностика инфекционных заболеваний. Серологические реакции II порядка. Современные иммунодиагностические реакции.

Основные вопросы, разбираемые на занятии:

1. Реакции иммунного лизиса. Бактериолиз.

2. Реакция связывания комплемента.

2. Реакции иммунофлюоресценции: сущность, способы постановки.

3. Иммуноферментного анализа: сущность, способы постановки.

4. Радиоиммунологического анализа: сущность, способы постановки.

5. Иммуноблоттинг, механизмы и применение.

 

Задание №1. Заполните таблицу «Механизмы серологических реакций второго порядка».

НАЗВАНИЕ РЕАКЦИИ	МЕХАНИЗМ РЕАКЦИИ (рисунок-схема и описание)
Реакция бактериолиза
Реакция гемолиза
Реакция связывания комплемента, РСК

Лабораторная работа: Постановка основного опыта РСК

Оттитрованные ингредиенты (АГ, комплемент, гемолитическая сыворотка) разводят физ.раствором. При постановке реакции вначале смешивают исследуемую сыворотку, антиген и комплемент. Смесь выдерживают в термостате при 37°С в течение 20-30 минут. По истечении указанного срока в пробирки добавляют сенсибилизированную гемолитическую систему. пробирки встряхивают, помещают в термостат при 37°С на 20-30 минут, а затем оценивают результат.

Схема основного опыта РСК

 

Ингредиенты в мл.	1	2 (КА)	3 (КС)
Испытуемая сыворотка в разведении 1:5
Антиген
Комплемент
Физ. раствор
Пробирки инкубируют при 37°С в течение 20 – 30 минут
Гемолитическая сыворотка
Взвесь эритроцитов
Пробирки инкубируют при 37°С в течение 20 – 30 минут
Учет и оценка результата

 

Учет и оценка результатов РСК.

В зависимости от степени выраженности гемолиза РСК оценивается по 4-плюсовой системе следующим образом:

“++++” резко положительная реакция – полная задержка гемолиза: эритроциты оседают на дно пробирки, жидкость над осадком бесцветна;

“+++” и “++” положительная реакция – полная задержка гемолиза: имеется осадок эритроцитов, жидкость окрашена в розовый цвет, более интенсивны      й при ++;

“+” сомнительная реакция – неполный гемолиз: незначительный осадок эритроцитов, жидкость окрашена в розовый цвет;

“-” отрицательная реакция – полный гемолиз: жидкость ярко-розового цвета.

Вывод: