Эмбриологические аспекты экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбриона.

Оплодотворение проводиться сконцентрированной спермой через 4-6 часов после получения яйцеклеток

При тяжелых формах мужского бесплодия, при которых существенно снижена оплодотворяющая способность спермы, выполняется процедура интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида

День 1. Через 16-18 часов после того, как яйцеклетка и сперматозоиды помещаются вместе, проводиться оценка оплодотворения. Оплодотворённая яйцеклетка имеет два пронуклеуса, представляющих хромосомы от мужчины и женщины и двух полярных тел, хромосом, которые были экструдированы после завершения мейоза. Нормально оплодотворившиеся яйцеклетки продолжают культивировать дальше.

День 2. На 2-е сутки после слияния генетического материала сперматозоида и яйцеклетки происходит дробление – деление клетки на две. Клетки дробящего эмбриона называются бластомерами. На этой стадии можно оценить качество эмбриона по степени фрагментации (объему эмбриона, занимаемому безъядерными фрагментами цитоплазмы), считается, что чем она больше, тем ниже считается потенциал этого эмбриона к имплантации и дальнейшему развитию. Помимо фрагментации оценивается форма и относительные размеры бластомеров.

Наиболее общепринятая классификация дробящихся эмбрионов по качеству – A-B-C-D, где А – самый лучший, D – самый худший. Цифрами указывают количество бластомеров.

День 3. На 3-и сутки эмбрион уже состоит из 6-8 бластомеров. До этого момента эмбрион развивался как бы «по инерции», исключительно на материнских «запасах», накопленных в яйцеклетке за время ее роста и развития в яичнике. Если «генетическая книга», в которой закодирована программа нормального развития эмбриона, содержит ошибки, эмбрион останавливается в развитии. Это природный процесс отбора генетически нормальных эмбрионов. Поэтому именно на стадии 4-8 бластомеров 4-19% эмбрионов останавливаются в развитии (так называемый «блок развития»).

День 4. На 4-е сутки развития эмбрион человека состоит уже, как правило, из 10-16 клеток, межклеточные контакты постепенно уплотняются и поверхность эмбриона сглаживается (процесс компактизации) – начинается стадия морулы (от лат. Morulae – тутовая ягода). Именно на этой стадии invivo (в организме матери) эмбрион попадает из маточной трубы в полость матки. К концу

4-х суток развития внутри морулы постепенно образуется полость – начинается процесс кавитации.

День 5. Перенос бластоцисты (перенос на 5-е сутки) имеет большую частоту успешной имплантации, позволяя переносить меньшее количество эмбрионов высокого качества, снижать риск многоплодной беременности при увеличении частоты наступления беременности.

5-6 день эмбриологического развития. С того момента как полость внутри достигает 50% ее объема, эмбрион называется бластоцистой. Бластоциста состоит из 2-х популяций клеток – трофобласт (наружный слой) и внутренняя клеточная масса. Трофобласт отвечает за имплантацию — внедрение эмбриона в маточный эпителий (эндометрий). Клетки трофобласта в дальнейшем превращаются в плаценту. Внутренняя клеточная масса дает формирование тканям и органам будущего ребенка. Чем больше полость бластоцисты и лучше развита внутренняя клеточная масса и трофобласт, тем больше потенциал эмбриона к имплантации.

Развитие бластоцисты и имплантация

Бластоциста формируется к 5-6 дню эмбриологического развития. Когда полость бластоцисты достигает значительного размера, истончившаяся за счет растяжения блестящая оболочка разрывается и начинается процесс естественного хэтчинга («выклева») эмбриона из блестящей оболочки, в случае затруднения естественного хэтчинга произваодится вспомогательный хэтчинг

В течение 24 часов после окончания хэтчинга, бластоциста начинает имплантироваться (прикрепляться) в эндометрий матки

Имплантация происходит, как правило, на 6-7 день развития эмбриона

Бластоциста вырабатывает ХГЧ (гормон беременности), который поступает в кровь женщины и подтверждает имплантацию и наступление беременности.

Интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида.

ИКСИ была разработана для преодоления мужского фактора бесплодия. При ИКСИ производится введение единичного сперматозоида в цитоплазму каждой яйцеклетки при помощи тонкой стеклянной иглы.

Первые этапы ИКСИ проходят так же, как и стандартный цикл ЭКО. Женщине назначают инъекции гормональных препаратов, которые стимулируют созревание нескольких фолликулов в яичниках. Яйцеклетки извлекают во время амбулаторной процедуры под контролем ультразвука и помещают в специальную среду для культивирования. После получения яйцеклеток их исследуют под микроскопом и оценивают их качество. Затем их помещают в инкубатор на 2-6 часов, после чего достают из инкубатора и удаляют кумулюсные клетки, окружающие яйцеклетку, чтобы оценить степень зрелости яйцеклетки, поскольку ИКСИ можно проводить только зрелым яйцеклеткам.

Незрелые яйцеклетки можно оставить в среде для культивирования и провести ИКСИ на следующий день, если яйцеклетки окончательно созреют.

Сперматозоиды, полученные из эякулята или путем биопсии яичка или придатка яичка (ТЕЗА/ПЕЗА), обрабатывают в специальных средах. Сперматозоиды могут быть также получены из замороженного образца спермы.

После оценки зрелости яйцеклеток сперматозоиды помещают в специальную среду, отбирают сперматозоиды с нормальной морфологией, обездвиживают их, всасывают в кончик очень тонкой стеклянной иголки, а затем впрыскивают непосредственно внутрь яйцеклетки. Яйцеклетка при этом удерживается на месте путем легкого присасывания с противоположной стороны холдинговой пипеткой. Это очень тонкая процедура и для ее выполнения требуется микроманипулятор. Данная последовательность действий повторяется для каждой полученной яйцеклетки. Мембрана яйцеклетки очень эластична, и микроскопическое отверстие от микроиглы затягивается очень быстро, однако около 1% яйцеклеток могут быть повреждены в ходе проведения ИКСИ.

На следующее утро яйцеклетки исследуют для проверки оплодотворения. Развивающиеся эмбрионы культивируют на протяжении последующих 2-5 дней, в течение которых происходит их дробление и дальнейшее развитие. Не все оплодотворенные яйцеклетки начинают дробление, а некоторые эмбрионы могут остановиться в развитии на самых ранних стадиях. В полость матки обычно переносят 2 эмбриона (в исключительных случаях – 3 эмбриона). Оставшиеся эмбрионы хорошего качества криоконсервируют для будущего переноса в полость матки.

Медикаментозная терапия для поддержки лютеиновой фазы назначается по той же схеме, как и после стандартного цикла ЭКО.

Донация ооцитов – это способ помощи женщине при бесплодии. Ей подсаживаются донорские яйцеклетки, полученные от другой женщины. Полученная яйцеклетка оплодотворяется спермой партнера женщины, желающей забеременеть, или донорской спермой, и образовавшийся эмбрион подсаживается реципиенту (женщине, которая желает забеременеть).

Этапы донации по дням

 

· Итак, нулевой день - это день пункции и забора ооцита 2-го порядка, который затем оплодотворяется спермой мужа или донора.

· Первый день - оценка процесса оплодотворения (в яйцеклетке должно быть два ядра: мужское и женское).

· На второй день формируется зигота, то есть мужской и женский геномы сливаются и происходит процесс первого дробления. Дробящий эмбрион состоит из бластомеров. В конце второго дня образуется 2, 3 или 4 бластомера.

· На третий день эмбрион состоит из 6-8 бластомеров. В процесс развития вступает личный геном эмбриона, который сформировался при слиянии женского и мужского ядра.

· Четвертый день - эмбрион состоит из 10-16 бластомеров. Начало стадии морулы - поверхность эмбриона сглаживается. И в этот момент эмбрион из маточной трубы попадает в полость матки.

· На 5-7 день развития эмбриона идет процесс имплантации его к эндометрию полости матки.

Донация ооцитов и метод экстракорпорального оплодотворения это единственный шансу бесплодной супружеской паре иметь ребенка. В современном мире этим методом пользуется большой процент женщин.