Определение количества эритроцитов в крови лягушки

Абсолютное количество эритроцитов во всем объеме крови животного организма определить трудно. По­этому число форменных элементов определяют в 1 мм³ цельной крови. У человека в этом объеме содержится 4,5-5 млн эритроцитов. В организме среднее количество эритроцитов удерживается на постоянном уровне. Распад одних эритроцитов и образование новых совершаются непре­рывно, одновременно и взаимно уравновешенно.

Для облегчения подсчета форменных элементов под микроскопом кровь разбавляют в 100 раз, используя специальный прибор, называемый смесителем. Смеситель для подсчета количества эритроцитов представляет собой капилляр, в верхней части имеющий шарообразное рас­ширение. В образующей это расширение части капилляра име­ется палочка, которая механически размешивает кровь в разба­вляющей жидкости для равномерного распределения формен­ных элементов. В смесителях для эритроцитов палочка окра­шена в красный цвет. На капилляре смесителя имеются метки 0,5 и 1,0; которые обо­значают половину и целый объем капилляра. Выше шарообраз­ного расширения метка 101 в смесителе для эритроцитов озна­чает, что полость расширения имеет объем в 100 раз больший, чем объем полости капилляра.

В по­следнее время широкое распространение в клиниках получил метод автоматического подсчета форменных элементов крови с помощью электронных приборов. Существует несколько моделей приборов, в основу которых положены различные принципы. Метод автоматического подсчета отличается большой скоростью и точностью. В автоматических счетчиках форменных элементов крови разбавленная кровь пропускается через узкий стеклянный ка­пилляр. Прохождение форменных элементов регистрируется с помощью фотооптических или электрических датчиков. При этом форменные элементы разного диаметра будут вызывать импульсы различной величины. Электронная схема разделяет эти импульсы, и прибор может сразу подсчитывать эритроциты и другие форменные элементы крови.

Цель работы

Знакомство с техникой подсчета эритроцитов (на примере крови лягушки, в 1 мл крови лягушки содержится в среднем 470000 эритроцитов).

Оборудование, материалы и объект исследования

Препаровальный набор, счетная камера Горяева, смеситель для эритроцитов, покровное стекло, 2%-ный раствор NaCl, вата, лягушка.

Ход работы

Знакомятся с устройством счетной камеры Горяева (рис. 31). Счетная камера представляет собой толстое предметное стекло с желобками, разграничивающими три поперечно расположенных площадки. Средняя из площадок разделена поперечным желобком на две половины, на каждой из них нанесена сетка. Боковые площадки на 0,1 мм выше средней и служат для притирания покровного стекла, под которым над сетчатой поверхностью остается пространство в 0,1 мм высотой. Сетка камеры состоит из 225 больших равных по площади квадратов. Из них 25 разделены на 16 маленьких. Сторона маленького квадрата = 1/20 мм, а его площадь 1/20х1/20=1/400 мм².

Объем крови над одним маленьким квадратом = 1/400х1/10=1/4000 мм³. Рассматривают сетку счетной камеры под микроскопом. Накрывают среднюю площадку покровным стеклом и притирают его к боковым площадкам до появления радужных полос.  

Рис. 31. Счетная камера Горяева

 

В часовое стекло наливают около 1 мл. 2%-ного раствора NaCl.

Из сердца предварительно обездвиженной лягушки набирают без пузырьков воздуха кровь в смеситель до метки 1. Кровь, приставшую к кончику смесителя, снимают ватой, а затем быстро, но осторожно, добирают в смеситель 2%-ный раствор NaCl из часового стекла до метки 101 (кровь при этом разводится в 100 раз).

Держа смеситель между двумя пальцами горизонтально, встряхивают его в течение 3 мин для перемешивания крови с раствором.

Из капиллярной части смесителя выдувают первые 2 –3 капли жидкости на вату, а следующую каплю наносят на среднюю пластину камеры Горяева у края покровного стекла. Камера под покровным стеклом работает как капилляр, и капля заполнит обе половины камеры.

Камеру помещают  на предметный столик микроскопа и через 3-4 мин приступают к подсчету эритроцитов в 80 маленьких квадратиках (или 5 больших), взятых по диагонали или посередине сетки. Чтобы не сосчитать одни и те же эритроциты, подсчитывают все эритроциты внутри квадратика и те, которые располагаются по верхней и левой пограничной линиям.

Вычисляют среднее количество эритроцитов в одном маленьком квадратике, а затем рассчитывают количество эритроцитов в 1 мм³ крови лягушки.

Оформление работы

Зарисовывают картину, наблюдаемую под микроскопом. Указывают количество эритроцитов в 1 мм³ крови лягушки.