Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь FAQ Написать работу КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Отбор проб с небольших делянокСодержание книги Поиск на нашем сайте
На мелкоделяночных посевах, которые должны быть как минимум в двух повторностях, срезают от 1/3 до 1/2 куста и не менее как с 10 растений в разных местах делянки каждой повторности. Злаковые срезают целиком. Другой прием сбора состоит в том, что по диагонали срезают не менее 10 растений через одинаковые интервалы или через один рядок на делянке в каждой повторности. Для сравнения различных образцов необходимо иметь данные по стандартному образцу, который высевают через каждые 5—10 образцов и также берут пробы для анализов [12, 20]. Отбор проб с более крупных площадей Пробы растений отбирают со всех повторностей опыта. На каждой повторности по диагонали срезают по 1/4 куста от 10-15 растений и помещают в мешки (лучше из водонепроницаемого материала). В дальнейшем для анализа поступают пробы от каждой повторности или средняя проба со всех повторностей. Сбор растений на значительных площадях рядового и гнездового посевов производят по двум диагоналям участка. По каждой диагонали через равные промежутки срезают по 1/3 - 1/4 — куста от каждых 10-15 растений, что доставит пробы 20-30 растений. Уменьшение объема пробы допустимо после предварительного грубого измельчения образца. Большое внимание должно быть уделено составлению средних проб листостебельной массы таких растений, как кукуруза, сорго, подсолнечник, топинамбур, кормовая капуста и другие однолетние растения, используемые для кормовых целей. В этих случаях срезают на высоте 10-12 см от земли 10 растений. Отобранные образцы, перевязанные и снабженные этикеткой с необходимыми сведениями, должны сразу же поступать в лабораторию для подготовки к анализу. Для уменьшения веса влитых растений каждое из них разрезают вдоль на 2 части, одну из которых употребляют для анализа. Дальнейшее деление пробы допускается только после измельчения всех проб на отрезки длиной 1,5-2 см [12]. Подготовка проб кормовых растений к анализу Так как одной из поставленных целей исследования является доказательство утверждения об использовании зеленой массы анализируемого растения в качестве корма или добавки в комплексе с зимними кормами, то целесообразно отразить в обзоре литературы общую характеристику подготовки проб кормовых растений к анализу. Среднюю пробу растений, взятую в поле в тот же день, обрабатывают в зависимости от целен изучения и предполагаемых анализов. Для химической оценки высушенных образцов (сена) по общему содержанию химических веществ срезанные растения в виде снопов (лучше в капроновой сетке) подвешивают на укрепленных жердях в крытых помещениях. Когда растения достигнут воздушно-сухого состояния, их помещают в марлевые мешки. Применение марлевых мешков необходимо для того, чтобы предупредить потерн листьев высушенных растений. Однако часто необходимо знать содержание сухих веществ в листостебельной массе; в этом случае взвешивают пробы (снопы) перед сушкой и после высушивания до воздушно сухого состояния и, определив содержание влаги в сене, вычисляют в исходном образце содержание сухих веществ в процентах. Для анализа отдельных органов растения их сразу разделяют на части (работу ведут в тени) и каждую часть высушивают в марлевом мешке; стебли при этом лучше разрезать на части. Для оценки химического состава растений в свежем виде взятые образцы (пробы) немедленно измельчают и приступают к их обработке, направленной к прекращению деятельности ферментов. Под влиянием различных ферментов в срезанных растениях происходит распад белковых веществ, полисахаридов и других соединений, что не позволяет получить правильного представления о первоначальном химическом составе взятых образцов. Для этого измельченные на стеблерезке или другим путем пробы помещают рыхлым слоем в кюветы (эмалированные) или алюминиевые пластины и прогревают в стерилизаторном шкафу и здесь же высушивают. Можно обрабатывать также паром, поместив листостебельную массу в алюминиевых ситах (диаметр 18-20 см) на 10-15 мин над кипящей водой в большую кастрюлю. После этого потерявшую тур гор листостебельную массу высушивают в термостате (с вентиляцией или без нее). Высушенные до воздушно-сухого состояния пробы листостебельной массы перед размельчением до необходимого помола подсушивают в течение 3-4 часов при 45° и еще в теплом состоянии размельчают на мельнице или мясорубке до грубого помола затем отделяют часть последнего и размельчают до более тонкого помола на мельнице типа «Пируэт». Измельченный материал хранят в стеклянных банках с пробкой или в пакетах из поливиниловой пленки в эксикаторах [20].
1.2. Методы определения содержания углеводов в растениях Содержание углеводов и их разнообразие определяется видом растения, фазой развития, абиотическими факторами среды и изменяются в широких пределах. Определение углеводов в растительной продукции позволяет: установить закономерности обмена этих веществ; оценить качество зеленой массы, плодов, овощей и возможность их технической переработки; В здравоохранении составить энергетический баланс, в зоотехнии рассчитать пищевой рацион [25]. Существуют количественные методы определения моносахаридов: химические, поляриметрические. Определение полисахаридов в растениях осуществляется теми же методами, но прежде кислородная связь этих соединений разрушается в процессе гидролиза [19, 22]. В некоторых источниках указывается на цианидный метод, который является быстрым, простым с точки зрения используемых реактивов и при соблюдении рекомендуемой техники анализа дает вполне удовлетворительные результаты. Метод используют для определения сахаров в овощах, плодах и корнеплодах. Он основан на способности железосинеродистого калия (красной кровяной соли) в щелочной среде окислять редуцирующие сахара. Реакцию осуществляют путем титрования раствором исследуемого сахара кипящего щелочного раствора железосинеродистого калия в присутствии метиленовой сини в качестве индикатора. Содержание моносахаров (редуцирующих Сахаров) вычисляю по количеству титрованного раствора железосинеродистого калия и объему израсходованного на его титрование раствора сахара неизвестной концентрации [21, 6]. В практике широко используется определение углеводов по Бертрану. Растворимые углеводы извлекаются из растительного материала горячей дистиллированной водой. В одной части фильтрата определяют моносахариды, в другой – после гидролиза соляной кислотой ди- и трисахариды, которые распадаются при этом до глюкозы. Метод основан на способности моносахаридов, содержащих альдегидную группу, восстанавливать феллингову жидкость [18, 21, 22]. Отдельные авторы в своих работах указывают на определение углеводов фотометрически с пикриновой кислотой (модификация Соловьева). Моносахариды, имеющие альдегидную или кетонную группировку, могут восстанавливать динитросоединения, при этом образуются интенсивно окрашенные соединения. Окраска пропорциональна количеству углеводов в реакции, поэтому возможно их колориметрическое определение. В этом случае используют реакцию восстановления пикриновой кислоты (2,4,6-тринитрофенола) в пикраминовую [20]. К. П. Петров приводит определение редуцирующих сахаров (по Офнеру). С целью упрощения метода Офнер для определения редуцирующих веществ предложил раствор, в состав которого входит медный купорос, сегнетовая соль и карбонат натрия. Таким образом, в этом растворе концентрация ионов гидроксила понижена по сравнению с реактивом фелинга, и поэтому раствор хорошо сохраняется. Редуцирующие сахара окисляются несколько медленнее, чем с раствором фелинга. Однако, используя этот метод, не надо отфильтровывать Сu2О, так как его количество легко определяется иодометрическим титрованием. Иодометрическим методом определяют оставшийся невосстановленный нон Сu2+ или непосредственно Сu2О. При этом используют ту же обратимую реакцию, только равновесие должно быть смещено влево. Весь Сu2О, перед окислением иодом, переводят в раствор, прибавляя достаточное количество НСl. Избыток иода оттитровывают раствором тиосульфата натрия и, таким образом (по разности), определяют количество иода, связанного Сu2О [17]. Для измерения количественного содержания дисахаридов (сахарозы) удобнее всего использовать оптический метод. Он основан на способности сахарозы в водных растворах вращать плоскость поляризации световых лучей [21]. 1.3. Методы определения хлорофилла в растениях Под названием хромопротеиды объединяют все цветные белки. Типичным представителем хромопротеидов является гемоглобин крови. Сходным по структуре с гемом гемоглобина крови и других сложных белков (ферментов) является хлорофилл растений, который связан также с белком. Хлорофилл принадлежит к группе жирорастворимых пигментов, он растворяется в жирах и органических растворителях. Хлорофилл, как показали работы К. А. Тимирязева и его последователей, играет огромную роль в процессе ассимиляции углекислого газа. Процесс фотосинтеза представляет собой окислительно-восстановительное взаимодействие углекислого газа и воды, идущее в присутствии хлорофилла, который поглощает энергию солнечных лучей. Фотосинтез настоящее время является главным источником образования органических веществ на Земле. К. П. Петров в своей работе «Методы биохимического анализа сырья» приводит метод определения хлорофилла по Т. Н. Годневу. Данный способ анализа заключается в выделении хлорофилла из зеленой части растения 96%-ным раствором этилового спирта и измерении оптической плотности вытяжки [17]. Также количественно хлорофилл можно определить с помощью методов хроматографии (по Сапожникову). Разделение смеси пигментов основывается на селективной абсорбции фильтровальной бумаги. Когда по бумаге под действием капиллярных сил движется раствор, молекулы его разделяются на две фазы в соответствии с их коэффициентом разделения (подвижная и неподвижная фазы). Чем больше растворимость пигмента в мобильной фазе, тем дальше он продвинется по хроматографической бумаге вместе с растворителем. В ходе исследования проводят такие операции, как экстракция, извлечение, элюация и количественное определение пигмента [4, 18]. В некоторых источниках подробно описывается спектрофотометрический метод количественного измерения этого хромопротеида. Спектрофотометрический анализ — наиболее точный количественный метод определения содержания пигментов листа. Как и на фотоэлектроколориметре, концентрация пигментов на спектрофотометре определяется по оптической плотности. Однако в отличие от первого спектрофотометр позволяет выполнять анализ смесей веществ с близкими максимумами поглощения, что достигается за счет использования монохроматора, вследствие чего удается установить содержание хлороиллов и каротиноидов в вытяжке без предварительного разделения. Плотность экстракта на спектрофотометре измеряют при длинах волн, соответствующих максимумам поглощения хлорофиллов а и b в красной области спектра и при длине волны абсорбционного максимума каротиноидов. При этом учитывают, что положение максимума поглощения несколько меняется в зависимости от используемого растворителя. Концентрацию пигментов рассчитывают по уравнениям [4, 23]. Достаточно эффективно и удобно определение концентрации хлорофилла на фотоэлектроколориметре (ФЭКе). Для установления концентрации окрашенных растворов на фотоэлектроколориметре измеряют разность силы электрических токов, возникающих между двумя фотоэлементами в результате неодинаковой интенсивности световых потоков, прошедших через растворитель и раствор [4, 23].
1.4. Методы качественного определения аскорбиновой кислоты в растениях Качественные реакции на аскорбиновую кислоту (витамин С) основаны на его способности легко вступать в окислительно-восстановительные реакции и восстанавливать, например, метиленовую синь, 2,6-дихлорфенолиндофенол, гексациано-(III) феррат калия, нитрат серебра и др. В литературе достаточно подробно описывается взаимодействие аскорбиновой кислоты с метиленовой синью, в ходе которого заранее обесцвеченный раствор метиленовой сини вновь приобретает синий цвет [8]. Протекающие при этом реакции можно представить схемами: Аскорбиновая Анион аскорбиновой Дегидроаскорбиновая кислота кислоты кислота Метиленовый синий (окрашенная Метиленовый синий (бесцветная окисленная форма восстановленная форма При встряхивании обесцвеченного раствора метиленовой сини на воздухе протекает процесс: Аскорбиновая кислота, окисляясь, восстанавливает гексациано-(III) феррат калия K3[Fe(CN)6] до гексациано-(II) феррата калия K4[Fe(CN)6], который с ионом железа в степени окисления +3 образует в кислой среде берлинскую лазурь: берлинская лазурь (синий осадок) . Многие авторы указывают на реакцию с 2,6-дихлорфенолиндофенолом. К 1 мл сока прибавляют 1 мл 0,02%-ного раствора 2,6-дихлорфенолиндофенол. Тщательно перемешивают, раствор обесцвечивается за счет образования лейкоформы индикатора. При дальнейшем прибавлении индикатора раствор окрашивается в розовый цвет, так как вся аскорбиновая кислота в пробе уже окислена и 2,6-дихлорфенолиндофенол больше не восстанавливается [10]. Реакция с раствором нитрата серебра.При этом происходит восстановление серебра, а аскорбиновая кислота окисляется в кетоформу. К извлечению прибавляют 1 мл раствора нитрата серебра, при этом выпадает осадок металлического серебра [8]. Реакция с солью железа (II) [8, 10].К 1 мл извлечения добавляют 1 мл раствора гидрокарбоната натрия и 1 мл сульфата железа (II). Наблюдают образование аскорбината железа фиолетового цвета: . 1.5. Методы качественного определения некоторых биологически активных веществ растений Определение алкалоидов Метод Крафта. Метод Крафта может быть рекомендован в качестве полевого экспресс-метода для рекогносцировочной оценки растений на наличие алкалоидов. а) Каплю свежевыжатого из растения сока наносят на фильтровальную бумагу, пропитанную реактивом Драгендорфа. При наличии алкалоидов в соке на бумаге появляется оранжевое пятно. б) О наличии алкалоидов можно судить также по оранжевым пятнам, возникающим на местах соприкосновения свежего растения и бумаги при их сжатии. Для проведения анализа методом Крафта необходимо иметь щипцы для сдавливания и индикаторную бумагу, качество которой имеет решающее значение. Небольшой срез того или иного органа растения (лист, стебель, цветы) накладывают на полученную бумагу и с помощью плоскогубцев сдавливают. При наличии алкалоидов, выступивший при сжатии сок окрашивает бумагу в оранжево-красный цвет. При наличии хлорофилла оранжевое окрашивание наблюдается в виде каймы вокруг зеленого пятна или в виде оранжево-красных участков между зелеными пятнами. Определение алкалоидов методом извлечения. Растения грубо измельчают, помещают в пробирку, заливают 1% раствором соляной кислоты так, чтобы кислота покрывала весь материал (1:10) и нагревают до начала кипения. До охлаждения жидкость фильтруют через фильтр и испытывают на присутствие в нем алкалоидов, для чего 1-2 капли фильтрата помещают при помощи стеклянной палочки на часовое стекло, рядом с ним наносят каплю реактива Вагнера и осторожно наклоняя стекло, обе капли соединяют. При слиянии капель, в случае присутствия алкалоидов жидкость мутнеет, а затем происходит выпадение трудно растворимых солей алкалоидов с реактивом Вагнера (осадок бурого цвета) [25, 23]. Определение сапонинов Реакция пенообразования. Растение грубо измельчают и в пробирке готовят извлечение 1:10 на дистиллированной воде, фильтруют. В одну пробирку помещают 5 мл фильтрата, а в другую. 5 мл дистиллированной воды (контроль). Обе пробирки энергично встряхивают. Содержащие сапонины настои при этом дают обильную пену, не исчезающую в течение длительного времени. Реакция с раствором ацетата свинца. К 2 мл настоя прибавляют несколько капель ацетата свинца. Образуется осадок. Причем, терпеновые сапонины осаждаются средним ацетатом свинца, а стероидные - основным. Реакция Лафона. К 2 мл водного настоя прибавляют 1 мл концентрированной серной кислоты, 1 мл этилового спирта и 10 капель 10% раствора сернокислого железа. При нагревании появляется сине-зеленое окрашивание [25].
|
||||
Последнее изменение этой страницы: 2016-04-08; просмотров: 378; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 13.59.236.101 (0.008 с.) |