Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Что такое титр вир и принцип его опред-ия по инфекц-му д-ию вир.
Титр – это кол-во вируса, содер в ед объема материала.Вир м титровать по инфекц-му д-ию. Титр по эф-ти их д-ия,те какой эф-т вир оказ-ет на ту или иную жив сист..Эф-ть д-ия вир выр-ся в эффект-х дозах(ЭД). За 1ЭД50 прин-ем такую дозу вир,кот при введ гр живых сист.выз-ет эф-т в 50% случаев(не мене 4 жив систем). Инфекц Титр вируса-кол-во эффект-х доз его в ед V(чаще в 1мл) 1ЭД м обозн-ся по-разному,в зав-ти от эффекта и от той живой сист,на кот мы титруем вирус: 1)Гибель: ЛД50 (летальная доза)-лаб жив, ЭЛД50(эмбр лет доза)-кур эмбр, кк-нет гиб 2)Видимые изменения(клиника,пат изм): ИД50(инфекц доза)-лаб жив,ЭИД50 (эмбр инф доза) и ООЕ(оспообр-ие вир ед-вир оспы голубей)-кур эмбрионы,ЦПД50 (цитопат доза) и БОЕ(бляшкообраз-ие ед- под ТВ питат средой)-кк. Берем неск-ко пробирок(напр 5),размор-ем вирус.В кажд проб-ку по 9мл физ р-ра. Затем в 1 проб из бутыли с вир переносим 1мл вир(пипетку в физ р-р),размешать. Затем из сод-го 1й во 2 1мл смеси,из 2й в 3ю и тд…из последний не выливаем. Каждым развед-ем мы зар-ем четное число биол систем(не менее 4х)-4 кур эмбриона.Ставим в термостат,затем учитываем. Положит-й эф-т(+)-гибель 1(1:10)++++ 2(1:100)++++ 3(1:1000)++-- 4(1:10000)---- 5(1:100000)---- В развед 1:1000-50% эф-т =>в этом развед сод-ся 1ЭД50 =1 ЭЛД50 Титр вир=числу(во сколько раз надо развести исх-й вир,чтобы пол-сь 1ЭД50) Тв=1000 ЭЛД50/0,2=5*103 ЭЛД50/мл 0,2-кол-во мл,каким зар эмбрион. Если эф-т не виден,то подсчёт инфекц титра проводят по методу Кербера или методу Рида и Менча. Формула Кербера: lgЛД50=lgD+lgd/2-lg∑r/n D-наибольшее развед вир,кот дает еще 100% эф-т d-коэф-т разведения(=10);r-кол-во (+)-павших;n-кол-во живых систем,зар-х каждым разведением(со 2-го развед,тк в 1-м они и так погибнут).
Что такое титр вир и принцип его опред по гемаглютинир-му д-ию.(Тга) Титр – это кол-во вируса, содер в ед объема материала.Вир имеют белок- гемагглютинин.Они склеивают эр. Титр опред-ют по эф-ту гемагглютинации.Выр-ся ГАЕ(гемагл ед). 1ГАЕ-наибольшее развед вир,кот еще выз-ет агглют-ию эр на «++» РГА Мб качественной(для индикации (обнаруж)вируса-капельная РГА) и колич-й(Тга). Р-ция пров-ся в плестеглазовых (пласти-ковых) планшетах.Не треб-ся стирильн условий 1)Готовят последов-ое 2х кратное развед вир(1:2,1:4,1:8…) 2)В каждое развед доб-ют равный V 1% взвеси эритр-в опред-го вида и оставл-ют на контакт
3)Уч-т рез-т РГА в крестах: ГА(100-75%эр)-«+++» - полный зонтик ГА(50%эр)-«++» - неполн зонтик (пол эр обр-ют взвсь,а др пол осела на дно) ГА(25%)-«+»- маленький зонтик ГА-«-»-пуговка(все эр оседают) 4)Опред-ют гемаглют-й титр(Тга):снач узнают в каком развед нах-ся 1ГАЕ. Тга-то число,во сколько раз был разведен вирус,чтоб в получ-м развед сод-сь 1ГАЕ Берем 6 пробирок,6-контроль(эр+физ р-р): 1)(1:2)0,2мл физ р-ра(разбавитель)+0,2мл вир БН+0,2мл 1%взвеси эр-в петуха;2)(1:4)0,2мл из пред-й проб-ки+0,2физ р-ра+0,2 1%взвеси и тд до 5-й.Оставляем на контакт на 30 мин при комн-й темпер-ре. От чего зав-т р-ия ГА: 1)от наличия вир гемагглютинирующего 2)исп-ся эр опред-го вида хозяина(ВБН-эр кур и петухов); 3)опред усл для постан р-ции:буф-й р-р (физ р-р,карбонатный,фосфатный буфер); рН(нейтр),комн темп,время конт(30мин) Учет нач-ем с того мом-та как сраб контроль: 6)контроль-все эр осели «-» 5)пуговка «-» 4)неполный зонтик «++»(1ГАЕ) =>эф 50% 3,1 и 2)полн зонтик «+++»=>2,4 и 8 ГАЕ => Тга=16ГАЕ-во сколько раз разведение(в 16 раз в 4 лунке)
Использование куриных эмбрионов в вирусологии. Куриный эмбрион развивается 21 день. Заражение вирусом производится с 5-го по 12-й день.
Топография куриного эмбриона (продольный разрез, 12 дней)
1. Скорлупа 2. Подскорлупная оболочка 3. Воздушная камера 4. Аллантоисная полость 5. Желточный мешок 6. Альбуминный мешок 7. ХАО – хорион-аллантоисная оболочка 8. Амниотическая полость 9. Эмбрион 10. Канатик (соединение желточного мешка с пуповиной)
Для заражения выбирают здоровые эмбрионы. Для этого проводят овоскопию. На скорлупе делают пометки карандашом – границы воздушной камеры и местоположение зародыша.
I. Заражение в аллантоисную полость.
Все операции проводят асептично с горящей газовой горелкой. Место введения обрабатывают 2% йодированным спиртом, вводят 0,1-0,2 мл жидкости. Отверстие закрывают каплей расплавленного парафина. На скорлупе пишут: - название вируса - дату - фамилию
|
|||||
Последнее изменение этой страницы: 2017-02-16; просмотров: 185; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 3.149.254.110 (0.009 с.) |