Мікроклональному розмноженні рослин.

Теоретичні відомості

Для вкорінення рослин, що утворилися при мікрочеренкуванні, їх необхідно пересадити на нове поживне середовище. Живці і пагони легко вкорінюються на середовищах із низьким складом мінеральних солей (середовище Уайта, Мурасіге-Скуга, розбавлене удвічі), або на середовищах з додаванням ауксинів: ІОК, НОК, ІМК.

Проростки, що сформувалися в пробірках з середовищами, можна розглядати як невеликі вкорінені рослини, які необхідно адаптувати до звичайних умов вирощування. Такі рослини краще пересаджувати в грунт, коли повністю сформуються 5-6 листків і досить розростеться коріння. Проте, різні види культурних рослин по-різному прилаштовуються до зміни умов середовища. Кожна рослина вимагає спеціально підібраних умов культивування в грунті, які встановлюють експериментально.

 

Матеріали і устаткування. Пробірки з проростками, пробірки з поживними середовищами для індукції коренеутворення: без гормонів і з додаванням ІОК, стерильні інструменти, ламінар-бокс, спиртівки, флакон з 96% спиртом, вата, стерильні чашки Петрі.

 

Хід роботи.

1. У стерильних умовах проростки витягнути з пробірок і стерильним пінцетом перенести в пробірки з поживними середовищами для вкорінення.

2. Пробірки з пересадженими рослинами поставити в штативи і перенести в культуральну кімнату з освітленням 5 кLx, температурою 25 + 2^оС і вологістю повітря 70 %.

3. Результати вкорінення оцінити через 1-4 тижні, зробити малюнки.

4. Укорінені рослини перенести в ящики або вегетаційні посудини з торфом і піском (3:1).

 

 

Робота 4. ОТРИМАННЯ МІКРОБУЛЬБ КАРТОПЛІ IN VITRO

 

Теоретичні відомості

У практиці біотехнології на штучних поживних середовищах з певним набором біологічних регуляторів можна викликати проліферацію бруньок і пагонів, укоренити їх, а також індукувати утворення мікробульб. Для цього зазвичай використовують середовища з високим вмістом мінеральних солей (Мурасіге-Скуга), вуглеводів (сахарози до 8 % від об’єму середовища), цитокінінів, абсцизової кислоти, хлорхолінхлориду.

Протягом перших 10- 12 діб після живцювання рослини вирощують на звичайному фотоперіоді (16-17 год) з інтенсивністю освітлення 3-5 кLx, при температурі 25^оС вдень і 19-20^оС вночі. Наступне культивування проводять на 12 годинному фотоперіоді при тій же мірі освітленості і температурі. В деяких випадках, після вирощування в умовах довгого дня пробірки переносять в холодильник з температурою 10^оС. Утворення мікро-бульб відбувається через 1-1,5 місяця.

Мікробульби зберігають в холодильнику при температурі +2…+5^оС і вологості повітря до 95 %. Їх закладають в стерильні пробірки без середовища по 10 штук в кожну і закривають пробками (термін зберігання до 6 місяців). Таким чином, створюються умови, відповідні періоду спокою картоплі, що сприяє кращій схожості і життєздатності рослин.

Увесь період від мікроживцювання до отримання мікробульб складає 60-65 днів.

 

Матеріали і устаткування. Ламінар-бокс, пробірки з поживним середовищем для отримання мікробульб, пробірки із стерильними проростками, що мають 5-6 сформованих листків, флакони з 96 % спиртом для стерилізації інструментів, скальпелі, пінцети, препарувальні голки, спиртівка, вата, стерильні чашки Петрі.

 

Хід роботи.

1. У стерильних умовах, стерильними інструментами витягнути проростки з добре сформованим корінням з пробірок і перенести на поживні середовища для індукції бульбоутворення.

2. Пробірки з пересадженими в них рослинами закрити і перенести в культуральну кімнату.

3. Провести спостереження процесу бульбоутворення через 4-6-8 тижнів культивування.

4. Результати замалювати, зробити висновки на підставі теорії гормональної регуляції.

5. Закласти мікробульби на зберігання.

 

Робота 5. ІМУНОФЕРМЕНТНИЙ АНАЛІЗ. ТЕСТУВАННЯ