Консервация путем замораживания

Консервации крови и ее компонентов путем замораживания также включает в себя несколько способов:

Криоконсервирование эритроцитов при ультранизкой темпера­туре. В настоящее время имеется методика замораживания и хранения от­мытых эритроцитов и других форменных элементов крови при ультранизкой температуре (-196°С) с применением защитных добавок, предохра­няющих эритроциты от разрушения. Различают эндоцеллюлярные (прони­кающие в клетку) и экзоцеллюлярные (не проникающие в клетку) крио­протекторы. Чаще применяют эндоцеллюлярные криопротекторы: глице­рин, диметилсульфоксид (ДМСО), диметилацетамид (ДМАЦ), 1, 2- пропандол (α-пропиленгликоль). Они хорошо защищают клетку от кри­сталлизации. Существенным недостатком является то, что требуется уда­ление их после оттаивания. Это достигается серийным отмыванием рас­творами не проникающих в клетку веществ (сахароза, маннит, сорбит, на­трия хлорид) в убывающей концентрации.

Для замораживания эритроцитной взвеси (ЭВ) применяют раствор ЦНИИГПК, содержащий 30% глицерина, 4% маннита, 0,7% натрия хлори­да и 0,03% натрия фосфата двузамещенного. Соотношение эритроцитов и консерванта составляет 1:1. Сначала ЭВ выдерживают в криоконсерванте 20 минут для равномерного распределения глицерина во внутри- и внекле­точной среде, после чего контейнеры погружают в жидкий азот с темпера­турой -196°С для замораживания и длительного хранения. При необходи­мости контейнер извлекают и проводят оттаивание его в водяной бане при температуре +5°С до полного исчезновения льда. Освобождение эритроци­тов от глицерина производят путем трехкратного отмывания растворами маннита (16,5%, затем 5% и 3,5%) или натрия хлорида (4%, затем 2% и 1%). Отмытые эритроциты взвешивают в плазмозамещающем растворе ЦНИИГПК 8-В в соотношении 1:1. Этот раствор содержит сахарозу (7%), натрия хлорид (3%), однозамещенный натрия фосфат (1%) и двузамещенный натрия фосфат (2%).

Сложная технология и высокая стоимость данного метода ограничи­вает его применение. Он используется для хранения эритроцитов редких групп крови, а также аутоэритроцитов от доноров из группы риска (работ­ники АЭС и др.). Созданы определенные банки крови, в которых отмытые эритроциты хранятся в металлических кассетах, погруженных в жидкий азот при температуре -196°С. Замороженные эритроциты сохраняются в течение пяти лет.

Криоконсервирование эритроцитов при умеренно низких темпе­ратурах (от -30 до -40°С). Этот способ консервирования лишен основ­ных недостатков замораживания ультранизкими температурами. Так, за­мораживание проводится в обычной таре, в которой заготовлена кровь, а вместо жидкого азота используется холодильники, что делает этот способ более простым, дешевым и доступным. Недостатком этого способа являет­ся необходимость в применении более высоких концентраций глицерина (50 - 80%), что усложняет процесс деглицеринизации.

В настоящее время разрешен способ медленного замораживания и хранения эритроцитов в растворах ЦНИИГПК 11₅-55 и 11₅ при -30°С в холодильнике. Соотношение эритроцитов и криоконсервантов равняется, соответственно, 1:1 и 1:6. Оба консерванта обеспечивают более низкую концентрацию глицерина в замораживающей среде (первый - 27%, второй24,6%).

Криоконсервирование эритроцитов при низких температурах.Внастоящее время в Российском НИИ гематологии и трансфузиологии ис­пользуется способ криоконсервирования эритроцитов при температуре -25-38°С (±2°С) в холодильниках, со сниженной концентрацией глицерина (20%), что упрощает процесс деглицеринизации, который проводится сна­чала путем центрифугирования а затем отмыванием дешевыми растворами натрия хлорида (3,2%, затем 2% и 0,9%). Замораживание проводят как в стеклянных флаконах, так и в полимерных контейнерах. Срок хранения при температуре -25°С - до пяти месяцев, при температуре -40°С - до 1 года.

В 50-е годы РНИИГТ предложен раствор 31^E, предназначенный для холодовой консервации крови. Этот раствор содержит спирт, который, снижая точку замерзания среды, позволяет хранить кровь в жидком со­стоянии при температуре от -8 до -10°С, что приводит к более глубокому торможению метаболизма в эритроцитах и обеспечивает хранение крови до 50 суток без гемолиза. К тому же, такая кровь является гиперосмолярной, что способствует эффективному восстановлению ОЦК при кровопотере.