Тема 2. Микроскопический анализ микрофлоры микробных сред.

Микроскопический анализ позволяет обнаружить в исследуемой среде (субстрате) микроорганизмы и описать особенности строения обнаруженных микробных клеток. Анализ включает в себя следующие этапы:

- отбор пробы исследуемой среды;

- приготовление микроскопического препарата и его микроскопирование.

 

Работа 2.1. Техника отбора пробы исследуемого

микробного материала.

 

Пробу из жидкой микробной массы отбирают микробиологической петлей, а из плотной – микробиологической иглой. Для этого инструмент предварительно прокаливают в пламени спиртовки, после чего вводят в посуду с исследуемым материалом и отбирают каплю (петлей) или комочек (иглой) микробной массы.

Метод используется чаще всего для выделения из исследуемой микробной среды определенной физиологической группы микробов и изучение процессов превращения веществ, осуществляемых ими. При этом соблюдают правила стерильности, направленные на то, чтобы не допустить попадание в посуду с микробным материалом «чужих» микробов и не допустить выхода микробов из посуды с микробным материалом в окружающую среду.

Отобранную пробу используют для приготовления микроскопического препарата.

 

 

Работа 2.2. Техника приготовления прижизненного препарата микроорганизмов (раздавленная капля).

 

Для этого отобранную петлей каплю исследуемого микробного материала переносят на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. Если исследуется плотная среда (субстрат), то отобранный иглой комочек микробного материала переносят на предметное стекло в каплю воды, тщательно перемешивают и накрывают покровным стеклом. Готовый препарат микроскопируют. Преимуществом данного препарата является то, что микробы остаются живыми и сохраняют подвижность.

Работа 2.3. Техника приготовления фиксированного и

окрашенного препарата (мазок).

 

Каплю исследуемого микробного материала, нанесенного на предметное стекло как указано выше (см. работа 2.1.) размазывают по поверхности предметного стекла (отсюда название препарат - мазок).

Затем осуществляют следующие операции:

1. Мазок сушат; можно при подогреве, но препарат не должен быть горячим.

2. Фиксируют: препарат подогревают до ощущения легкого жжения – при этом микробы погибают и, следовательно, легче будут окрашиваться.

3. Красят: после остывания препарата на мазок наносят 2-3 капли краски (фуксин или метиленовая синь) и выдерживают 3-5 минут.

4. Смывают избыток краски.

5. Сушат.

Готовый препарат микроскопируют. Преимуществом данного препарата является то, что окрашенные клетки лучше видны, а при особых методах окраски можно обнаружить и структурные компоненты клетки.

 

 

Работа 2.4. Ознакомится с техникой микроскопирования

микробных препаратов.

 

Подготовленный препарат помещают на предметный столик микроскопа. Тубус микроскопа при этом должен быть приподнят.

а) микроскопирование на малом увеличении.

Устанавливают объектив малого увеличения. Наблюдая сбоку, микровинтом опускают тубус до тех пор, пока объектив не приблизится к препарату на 3-5мм. Затем, наблюдая в окуляр, макровинтом медленно поднимают тубус до получения четкого изображения объектива. После этого, перемещая препарат по предметному столику, просматривают весь препарат и находят наиболее удачный его участок, который, затем микроскопируют при среднем и (или) большом увеличении.

б) микроскопирование при среднем увеличении.

Тубус поднимают, устанавливают объектив среднего увеличения, наблюдая сбоку. Опускают тубус до тех пор, пока он не приблизится вплотную к препарату. Затем, наблюдая в окуляр, микровинтом медленно поднимают тубус до получения изображения объекта. После этого микровинтом корректируют фокусировку изображения и рассматривают препарат.

в) микроскопирование при большом увеличении (с иммерсией).

Тубус поднимают, устанавливают иммерсионный объектив. На препарат наносят каплю иммерсионного масла. Наблюдая сбоку, макровинтом опускают тубус до тех пор, пока объектив не погрузится в масло, и не приблизится в плотную к объективу (допускается касание объектива). Затем, наблюдая в окуляр, микровинтом медленно поднимают тубус до получения изображения объекта, после чего корректируют фокусировку микровинтом. После этого просматривают препарат.

 

 

Работа 2.5. Микроскопический анализ микрофлоры бактериальных сред.

Целью микроскопического анализа является обнаружение микроорганизмов в исследуемой среде и описание их морфологических особенностей, в первую очередь формы клеток.

Бактерии – одноклеточные микроорганизмы могут иметь разнообразную форму: шаровидную (кокки), палочковидную, извитую. Каждая из этих форм представлена несколькими морфологическими типами, описание которых приведено ниже.

 

Морфологические типы шаровидны х бактерий (кокки).

Монококки: одиночные шаровидные клетки.

 

Диплококки: две шаровидные клетки, соединенные вместе.

 

 

Тетракокки: четыре шарика, соединенные “квадратом”.

 

Сарцины: восемь и более шариков, соединенных “кубом”.

 

Стрептококки: множество шариков, соединенных “цепочкой”.

 

Стафилококки: множество шариков, соединенных бессистемно, при этом полученные образования напоминают кисть винограда.

 

Морфологические типы палочковидных бактерий.

Бактерии: бесспоровые палочки.

 

Бациллы: спорообразующие палочки, спора небольшая и не растягивает стенки клетки.

 

Клостридии: спорообразующие палочки, спора крупная, размещена в средней части палочки и растягивает её в виде веретена.

 

Плектридии: спорообразующие палочки, спора крупная, размещена на конце палочки, которая, принимает вид “барабанной палочки”.

 

 

Морфологические типы извитых бактерий.

Вибрионы: слегка изогнутые палочки.

 

Спириллы: палочки, изогнутые в 1-3 витка.

 

Спирохеты: длинные палочки, изогнутые во множество витков.

 

 

Ход выполнения задания:

 

1. Приготовить препараты “раздавленная капля’’, отобрав микробный материал из накопительных сред (настой сена, настой навоза, культура дрожжей). Зарисовать подвижные формы микроорганизмов.

 

Записи при выполнении работы

 

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

-----------------------------------------------------------------------------------

Контрольные вопросы

1. Для чего проводят микроскопический анализ микробных сред.

2. Как отбирают пробу микробного материала для приготовления микропрепаратов.

2. Как готовят препарат “раздавленная капля”? Каковы достоинства этого препарата.

3. Назовите и охарактеризуйте этапы приготовления препарата “мазок”. Каковы достоинства данного препарата?

4. Как проводят микроскопирование на малом, среднем и большом увеличении микроскопа?

5. Дайте описание морфологическим типам бактерий.