Влияние криопротекторов на методе гранул замораживания

Влияние криопротекторов на методе гранул замораживания показан на рис. 2. Когда нет криопротектора не использовался, нет роста T.влагалищной наблюдалось после 48-часового культуры. С другой стороны, когда ДМСО и этиленгликоль были использованы при концентрациях 10-20%, пропиленгликоль в концентрации 15-20%, а глицерина при всех концентрациях, рост был признан. Максимальное количество T.влагалищной наблюдалась при ДМСО использовали при концентрации 20% (р  <0,05).

Инжир. 2

Влияние вида и концентрации криопротектора по методу гранул замораживания.Результаты представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение (п  = 4)

Влияние времени установления равновесия по методу гранул замораживания

Как важно для проникновения криопротекторов (Hubalek 2003;. Miyake и др 2004), влияние времени установления равновесия по методу гранул замораживания сиспользованием 10 или 20% криопротектора исследовали 0-4 ч на льду (. Рис 3).Замораживание с глицерином проводили при 25 и 37 ° С в дополнение к "на льду", так как температура уравновешивающим является еще одним важным фактором для глицерина (Мията 1975). С помощью метода гранул замораживания, замораживание без уравновешивания было наиболее эффективным, а количество трихомонады уменьшается с увеличением времени уравновешивания. Когда время установления равновесия был более 1 ч, отсутствие роста T.влагалищной наблюдалось.

Инжир. 3

Влияние времени для уравновешивания с 10 и 20% ДМСО (в), этиленгликоль (б), пропиленгликоль (гр) и глицерин (D, E, F) по методу гранул замораживания.Уравновешивание с глицерином проводили на лед (D), и при 25 ° С (е) и 37 ° C (F). Результаты представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение (п  = 4)

Сравнение между методом гранул замораживания и медленного охлаждения протокола

Метод гранула замораживание установлено здесь также сравнивали с обычным медленным протоколом охлаждения. В качестве криопротекторов, 20% ДМСО использовали в первом случае, в то время как 10% ДМСО использовали в последнем. Оба протокола были проведены без уравновешивания. Результаты показаны на рис. 4.Кривая роста, полученный после того, как оттаивании показал, что рост T.влагалищной с методом гранул замораживания была медленнее, чем с медленным протоколом охлаждения; задержка составила 5,4 ч. С другой стороны, коэффициент выживаемости по методу гранула замораживания составляла 48 ± 4% и 73 ± 8% с медленным протоколом охлаждения. Эти различия были статистически значимыми (р  <0,05).

Инжир. 4

Сравнение T.влагалищной жизнеспособность между медленным охлаждением и быстрых протоколов замораживания в соответствии с соответствующими кривыми роста (через) и коэффициента выживаемости (б). Результаты представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение (п  = 5)

Обсуждение

С момента создания Т.влагалищной, криоконсервации по McEntegart (1954), много успешных cryopreservations было зарегистрировано (McEntegart 1959; Алмазное 1964; Лумсден и др. 1966; Wasley и Рейнер 1970; Miyata 1973, 1975;. Miyake и др 2004). Тем неменее, исследования по криоконсервации Т.влагалищной в основном были связаны с медленным протоколом охлаждения, поскольку скорость замораживания является одним из наиболее важных факторов, влияющих на выживаемость после разморозки (Diamond1964; Рампа и др. 1987; Miyake и др. 2004). Например, McEntegart (1954) сообщили,что "привязок замораживание" быстрый протокол замораживания, вызвало больше разрушение клеток, чем медленный протокол охлаждения, хотя быстрый протокол замораживания было возможно с использованием 10% глицерина в качестве криопротектора. Лумсден и др. (1966) также сообщили, что быстрое замораживание протокол, который включает в себя погружение трубки в -79 ° C метанольной бане, было невозможно, используя 10% ДМСО, глицерин или поливинилпирролидон в качестве криопротектора. В последнее время, Мияке и др. (2004) исследовали взаимосвязь между скоростью замораживания и выживаемости и пришел к выводу, что Т.влагалищной имеет низкую толерантность замерзания.

С другой стороны, Samarawickrema и др. (2001) показали полезность быстрого протокола замораживания для E.гистолитика, который также считается имеющим низкую толерантность (Miyake и др. 2004), путем внесения изменений в криопротектора используется. В связи с этим было задумано возможно, что быстрое замораживание протокол будет применяться для T.влагалищной аналогичным изменением криопротекторов. Хотя Samarawickrema и др. (2001) использовали метод быстрого охлаждения, который вовлекал погружаясь криогенную флакон в спиртовой ванны, в данном исследовании, метод замораживания осадок был принят из - за своей простоты и легкости протокола (Otoi и др. 2000).

Вид и концентрация криопротектора также являются важными факторами для улучшения жизнеспособности (Hubalek 2003;. Miyake и др 2004), и ДМСО и глицерин широко используются (Diamond, 1964; Hubalek 2003). В этом исследовании, этиленгликоль и пропиленгликоль, спирт дериватов, также были использованы. Из них только ДМСО имела сильный эффект с помощью метода гранул замораживания, оптимальное условие является концентрацией 20%, а не на 10%, что является оптимальной концентрации с обычным медленным протоколом охлаждения (Miyake идр. 2004). Соответственно, неудачная метод замораживания гранул документально в исследовании Miyake и др. (2004), возможно, произошло из - за 10% ДМСО использовали в качестве криопротектора. Кроме того, для уравновешивания, что очень важно для медленных проникающих криопротекторов, таких как глицерин, не было необходимости в настоящем исследовании, предполагая, что защитный эффект криопротекторами отличается от метода гранул замороженным продуктом и медленного охлаждения протокола.

Samarawickrema и др. (2001) показали, что выживаемость с быстрым протоколом замораживания составляет 25%, в то время как при контролируемых режимов охлаждения составляет 30-40%. В настоящем исследовании, выживаемость с методом гранула замораживания составляла 48 ± 4%, в то время как с медленным протоколом охлаждения составляло 73 ± 8%. Кроме того, задержка в росте с методом гранул замораживания по сравнению с медленным протоколом охлаждения был не более чем 5,4 ч. Эти результаты показывают, что способ гранул замораживание полезен для криоконсервации T.влагалищной, хотя жизнеспособность не может достичь этого медленного охлаждения протокола. Это явление может быть вызвано клеточными повреждениями от образования внутриклеточного льда.

Замораживание имеет важное значение для формирования Криобанк микроорганизмов (УПР и др. 1987; Росси и Pozio 1988; Де Паоли 2005). В прошлом, коллекции культур протозойных паразитов были ограничены из - за технических трудностей, для коллекций культур, таких как коллекции культур американского типа в Соединенных Штатах (АТСС, за исключением http://www.atcc.org/) и коллекции культур водорослей и простейшими в Соединенном Королевстве (CCAP, http://www.ccap.ac.uk/~~HEAD=pobj; Эккерт 1997; De Paoli 2005). Причина этого, как полагают, связано с тем, что многие простейшие паразиты только успешно замораживании с медленным протоколом охлаждения. Это исследование показало, что разные условия тем, которые используются в медленный протокол охлаждения может быть успешно применен в качестве быстрого протокола замораживания. Таким образом, это может быть возможно, что многие простейшие одноклеточные организмы быстро замораживают при соответствующих условиях. В общем случае, для хранения при низкой температуре с жидким азотом не влияет на выживаемость при длительном хранении, например, путем повышения активности фермента, так как молекулярные движения не происходят (Samarawickrema идр. 2001; De Paoli 2005). Таким образом, если процесс замораживания успешна, может быть возможно, что криоконсервации будет полупостоянных.

В данной работе, успешное криоконсервация Т.влагалищной с использованием быстрого протокола замораживания было показано в первый раз. В заключение, этот протокол, метод замораживания гранул, предлагается в качестве действительного метода для криоконсервации T.влагалищной, будучи и экономии пространства, а также простым и легким.

Трихомонады: обзор эпидемиологического, клинического и лечения проблем

· Патрисия КиссинджерE-mail автора

BMC инфекционная 2015 15: 307

DOI: 10,1186 / s12879-015-1055-0

© Киссинджер. 2015

Поступила вредакцию: 6 мая 2015

Принято: 22 июля 2015

Опубликовано: 5 августа 2015

Обзорные доклады Открыть Peer

Абстрактные

Трихомонады (TV), вероятно, наиболее распространенным невирусная инфекций, передаваемых половым путем(ИППП) в мире. Это является важным источником репродуктивной заболеваемости, содействующей передачи ВИЧ -инфекции и приобретения, и, таким образом, она является важной проблемой общественного здравоохранения.Несмотря на свою важность в области репродуктивного здоровья человека и передачи ВИЧ - инфекции, это не регистрируемое заболевание и наблюдение обычно не делается. Это проблематично, так как большинство людей,инфицированных ТВ являются бессимптомными. Метронидазол (MTZ) был препаратом выбора для женщин в течение многих десятилетий, и разовая доза была рассмотрена первая линия терапии. Тем не менее, высокие показатели повторных испытаний положительного встречаются среди телевизионных инфицированных лиц после однократной дозы лечения MTZ. Это не было объяснено лекарственной устойчивости, так как сопротивление в пробирке только 2-5%. Неэффективность лечения может варьироваться от 7-10% и даже выше среди ВИЧ - инфицированных женщин.Эффективность лечения может зависеть от вагинальной экологии. Истоки повторных позитивов требуют дальнейшего объяснения и лучшие варианты лечения необходимы.

Ключевые слова

Трихомонады трихомониаз Эпидемиология Лечение

Введение

ТВ, вероятно, наиболее распространенным невирусная инфекций, передаваемых половым путем (ИППП) в мире. Хотя это и не отчетному заболевания, Всемирная организация здравоохранения оценкам, насчитывалось 276,4 миллиона случаев в 2008 году и почти 90% этих инфекций произошло среди людей, живущих в условиях ограниченных ресурсов [ 1 ]. Телевизор является более распространенным, что хламидиоза, гонококков, и сифилисом, вместе взятых. Глобальная распространенность телевидения оценивается в 8,1% женщин и 1,0% для мужчин [ 2 ]. Эти тарифы могут быть занижению, поскольку они получены в результате исследований, которые использовали микроскопию, а не более чувствительные тесты амплификации нуклеиновых кислот (NAAT) и никаких формальных систем наблюдения существуют.

При отсутствии программ наблюдения на месте, эпидемиология телевизора не полностью известна. Известно, однако, сильно различаются по численности населения и географии. В Соединенных Штатах, два исследования населения наоснове, которые использовали тестирование ПЦР найдены цены на 2,3% среди подростков [ 3 ] и 3,1% среди женщин 14-49 [ 4 ]. Популяционные исследования в Африке показывают заметно более высокие показатели. В Зимбабве этот показатель составил 9,5% среди обоих полов с использованием антител тестирования [ 5 ]. Используя NAAT, уровень позитивности среди мужчин в Танзании было 11% [ 6 ]. Женщины в Papau Новой Гвинеи также, кажется, имеют исключительно высокие показатели ТВ в диапазоне от 21% у беременных женщин до 42,6% в общей популяции [ 7, 8]. Другие исследования населения на основе, которые использовали тестирование NAAT среди репродуктивных женщин в возрасте и в других частях мира, нашли более низкие ставки (т.е. 1% в сельских районах Вьетнама [ 9 ] и 0,37% во Фландрии, Бельгия [ 10 ], 2,9% в провинции Шаньдун в Китае [ 11 ].) Скрининг ставок среди женщин,посещающих дородовые или планирования семьи клиники часто используются как показатель распространенности среди населения в целом. Исследования в этих местах найдены показатели распространенности от 3.2-52% в условияхограниченных ресурсов и 7.6-12.6% в США [ 12 ]. Таким образом, показатели телевизора сильно различаются и зависят от профиля факторов риска населения.

В целом, африканцы или лица африканского происхождения имеют более высокие показатели ТВ, о чем свидетельствует более высокими темпами в странах Африки к югу от Сахары [ 5, 6 ], а также среди лиц африканского происхождения, таких как гарифунас [ 13 ] и афро - американцев в США [ 4, 14 ]. В Соединенных Штатах, самая высокая распространенность ТВ - инфекции у американских женщин наблюдается среди афро-американцев с процентными ставками от 13-51% [ 15 ]. Афро - американских женщин есть ставки, которые в десять раз выше, чем среди белых женщин, составляющих замечательное медицинское неравенство [ 4 ]. Другие факторы риска для телевидения включают увеличение возраста, лишение свободы, внутривенное употребление наркотиков, коммерческий секс [ 16 ] и наличие бактерий вагиноз [ 17 ].

Патогенез ТВ

ТВ является жгутиковые протозойные паразитарные, как правило, грушевидные, но иногда амебовидные в форме, внеклеточной эпителия мочеполового дорожки с главным образом анаэробный образ жизни [ 18 ]. Индивидуальный организм составляет 10-20 мкм в длину и 2-14 мкм в ширину. Четыре жгутиков проект от передней части клетки и один жгутик проходит в обратном направлении к центру организма, образуя волнистую мембрану. Axostyle проходит от задней поверхности организма. Телевизор имеет большой геном (штамм G3, 176441227 пар оснований) с генов,кодирующих белок ~ 60 000 организованных в шесть хромосом [ 19 ]. ТВ является весьма хищный облигатным паразитом, который phagocytoses бактерии, эпителиальные клетки и эритроциты и сам поглощаются макрофагами.ТВ использует углеводы в качестве основного источника энергии посредством ферментативного метаболизма в аэробных и анаэробных условиях. Инкубационный период, как правило, от 4 до 28 дней [ 20 ].

ТВ в первую очередь поражает чешуйчатый эпителий половых путей. Телевизор находится в женском нижних отделов половых путей и мужской уретры и предстательной железы, где размножается бинарного деления. ТВ передается среди людей, его единственным известным хозяином, главным образом половым путем. Инфекция может сохраняться втечение длительного времени, возможно, месяцев или даже лет, у женщин, но в целом сохраняется менее чем за 10 дней у мужчин [ 21 ]. Паразит, похоже, не имеют форму кист и не хорошо выживают во внешней среде, но может выжить вне человеческого организма во влажной среде в течение более трех часов [ 22 ]. Там может быть, однако, может быть формой псевдокиста. ТВ псевдокиста было установлено, что более вирулентными у животных и может иметь значение для человека, особенно в случае неоплазий [ 23, 24 ]. В то время как считались редкими [ 20 ], чтосвидетельствует о несексуальных передачи через фомиты и, возможно, вода была описана [ 25, 26, 27 ]. Телевизор может быть заражен с двухцепочечной РНК (дцРНК) вирусы, которые могут иметь важные последствия для трихомонадного вирулентности и Патогенез заболевания [ 28 ].

Клинические особенности ТВ

[Большинство женщин (85%) 4 ] и мужчины (77%) [ 29 ] с телевизором бессимптомно. Одна треть бессимптомных женщин становятся симптоматическое в течение 6 месяцев [ 20 ]. Среди тех, у кого есть симптомы, они включают всебя уретральные и дизурия. Среди женщин, распространенные места инфекции включают влагалища, мочеиспускательного канала и канала шейки матки. Симптомы включают в себя выделения из влагалища (которая часто диффузный, зловонные, желто-зеленый), дизурия, зуд, раздражение вульвы и боли в животе. Нормальный вагинальный рН 4,5, но с ТВ - инфекции при этом увеличивается заметно, часто> 5 [ 20 ]. Macularis Coplitis или клубничный шейка видно примерно 5% женщин, хотя и с кольпоскопии эта цифра возрастает до почти 50% [ 30 ].Другие осложнения включают инфекцию придатков, эндометрий и Скене и бартолиновой железы. У мужчин, это может вызвать эпидидимит, простатит, и уменьшение подвижности клеток спермы [ 31 ].

Осложнения ТВ

Репродуктивную

Исследования показывают связь между телевизором и вагинит, цервицит, уретрит, бактериальный вагиноз, кандидоз, герпес 1- го типа и вирус простого типа 2, хламидиоз, гонорею и сифилис [ 32 ]. ТВ также было связано с неблагоприятными исходами при рождении, таких как низкий вес при рождении, преждевременных родов, воспалительных заболеваний органов таза и преждевременным разрывом плодных оболочек [ 33 ]. Одно исследование показало связь между ТВ - инфекцией матери и интеллектуальной инвалидности у детей [ 34 ]. Хотя и редко, ТВ -инфекция может передаваться перинатальной [ 35 ] и вызвать вагинальные и инфекции дыхательных путей у новорожденных [ 36, 37 ].

Приобретение и передача ВИЧ

Несколько исследований поперечного сечения и когорты, которые указали на более высокий риск заражения ВИЧ -инфекцией среди TV + по сравнению с ТВ- женщин [ 38 ]. Эта большая восприимчивость является биологически правдоподобным по трем причинам: воспалительная реакция на результаты ТВ - инфекции в увеличении появления клеток - мишеней ВИЧ [ 39 ]; ТВ инфекция может ухудшить механический барьер для ВИЧ с помощью точечными кровоизлияниями слизистых оболочек [ 40 ]; и ТВ инфекция может изменить нормальную вагинальную флору, чтоделает его более снисходительными для бактериального вагиноза [ 41 ], которые, в свою очередь, может увеличить риск заражения ВИЧ - инфекцией [ 42 ]. Эти последствия облегчают ВИЧ в ТВ-инфицированных женщин. Несколько исследований также показали повышенную экспрессию ВИЧ - инфекции среди ВИЧ + / TV + женщин. Исследование, проведенное Sorvillo и соавт. считает, что в обществе с высоким уровнем распространенности ТВ, целых 20% ВИЧ можно было бы отнести к ТВ - инфекции [ 43 ]. Чессон и др. По оценкам, 6,2% всех случаев ВИЧ - инфекции среди женщин США могут быть отнесены к ТВ - инфекции [ 44 ]. Управление телевизором, следовательно, может обеспечить экономически эффективную стратегию снижения риска передачи ВИЧ - инфекции, особенно в тех местах,где телевизор является общим [ 45, 46 ] или среди подгрупп, которые находятся на более высоком риске для ТВ,таких как афро - американцев [ 47 ].

Среди ВИЧ + женщин, ТВ было связано с повышенным вагинального пролития ВИЧ в нескольких исследованиях [ 38]. К счастью, лечение для ТВ продемонстрировало снижение ВИЧ генитальным пролития в нескольких исследованиях.ВИЧ + мужчин с уретритом в Малави, с телевизором, диагностированного NAAT, наблюдалось снижение в семенных ВИЧ после лечения MTZ [ 48 ]. ВИЧ вагинальные линять была снижена после лечения в одной группе женщин, диагностируется с помощью микроскопии и культуры в Кении [ 49 ], а другой, диагноз культуры, в штате Луизиана, США [ 50 ] Эти данные подчеркивают важность скрининга и лечения среди ВИЧ - инфицированных человек.

ВПГ-2

Телевизор, как представляется, имеют аналогичную двунаправленную связь с вирусом простого герпеса II (HSV-2),как это делает с ВИЧ-1. Сопутствующая инфекция с ТВ было связано с ВПГ-2 проливая [ 51 ] и были найдены женщины есть телевизор имеют более высокую заболеваемость ВПГ-2 [ 52 ].

Неоплазия

Доказательства того, что телевидение связано с приобретением ВПЧ, таким образом, может быть в косвенной связи между телевизором и неоплазии шейки матки. Мета-анализ показал, что телевизор был связан с 1,9 - кратным риском неоплазии шейки матки [ 53 ]. Исследования финских, голландских, бельгийских и китайских женщин все нашли повышенные шансы (1,4-2,0) неоплазии шейки матки у женщин, у которых есть телевизор или наоборот [ 10, 54, 55, 56, 57 ]. Сатклифф и др. была обнаружена связь между телевизором и раком простаты в одном исследовании, но не в последующем исследовании [ 58, 59 ].

Диагностика

Диагноз ТВ становится все более точным и более испытаний стали доступными в последнее десятилетие. Мокрый монтаж микроскопии был использован в течение многих десятилетий, чтобы диагностировать телевизор. Испытание недорог, низкая технология и является точка ухода, однако, она не чувствительна, особенно у мужчин. Sensitivities варьируются от 50-70% в зависимости от опыта читателя и его следует читать в течение 10 мин сбора [ 60 ]. В то время как культура обладает более высокой чувствительностью, что мокрые горы, у женщин это более дорого, отнимает много времени, а также демонстрирует слабую чувствительность у мужчин. Отсутствие чувствительности культуры было обнаружено в продольных исследований лечения ТВ. Одно исследование ВИЧ и одно исследование ВИЧ + женщин показало, что, что после однократной дозы лечения MTZ, ТВ инфекция была не поддающихся обнаружению в течение нескольких месяцев через культуру, а затем вновь появился в отсутствие сообщаемой сексуального контакта [ 61, 62 ] подчеркивает необходимость более чувствительно тестирование, чем культуры.

Методы нуклеиновые кислоты зондов являются наиболее чувствительные тесты, имеют умеренную цену и быстро, но требуют приборов. Эти тесты не считаются точки оказания медицинской помощи. APTIMA трихомонады анализ (Hologic Gen-Probe, San Diego, CA) был Соединенные Штаты Федеральный наркотиками Adminstration (FDA) -cleared в 2011 году для использования с мочой, эндоцервикальных и вагинальных тампонов и эндоцервикса образцов, собранных в растворе Hologic PreserveCyt (ThinPrep) от самок только. Чувствительность 95-100%, а специфичность также 95-100% [ 63 ]

Есть два (ПСУ) тесты пункт-ухода, которые были одобрены FDA США для диагностики Т влагалищной среди женщин, Osom Trichomonas Rapid Test (Genzyme Diagnostics, Cambridge, MA), А.Н. иммунохроматография технология капиллярных потоков масляный щуп [ 64 ] и Подтверждают В.П. III (Becton, Dickinson & Co.; Franklin Lakes, NJ), пробник нуклеиновой кислоты, которая оценивает для ТВ, G.влагалищной и C.Albicans [ 65 ]. Оба испытания проводятся на влагалищных выделениях и имеют чувствительность более 83% и специфичность более 97%.Результаты теста Osom доступны в примерно 10 мин, пока результатов этого теста Affirm В.П. III может быть доступна в течение 45 мин. Xpert® ТВ от цефеиды (Саннивейл, Калифорния) не был одобрен FDA, но перспективен в бедных странах с ограниченными ресурсами и для POC диагностики у мужчин.

Было принято считать, что только вагинальные образцы должны быть собраны для ТВ тестирования среди женщин.Существует, однако, некоторые доказательства того, что эндоцервикса образцы пригодны. Эндоценвикальных образцы были признаны 88% чувствительных и 99% специфичность для ТВ с помощью ПЦР по сравнению с 90% и 99% для вагинального тампона [ 66 ]. Юппер показали, что образцы были эндоцервикса 100% чувствительностью и 98% специфичностью по сравнению с TMA 100% чувствительность и специфичность для вагинальных образца сиспользованием анализа латентных классов [ 67 ].

Тестирование NAAT слишком рано после лечения может привести к обнаружению остатка ДНК трихомонады, таким образом производя ложных срабатываний. К 2-3 недели после обработки наиболее остатки ДНК очистили [ 68 ], однако, одно исследование показало, 15% ложных срабатываний на 3 недели [ 69 ]. Справедливость NAAT тестирования после лечения нуждается в дальнейшем изучении.

Управление и лечение

Лечение с 5-нитроимидазола

В течение почти четырех десятилетий, метронидазол (MTZ) был препаратом выбора для ТВ [ 70 ]. MTZ принадлежит к 5-нитроимидазола семьи наркотиков, и, как сообщается, о показатель успеха 95% в лечении телевизор вместе со своими родственными соединениями, такими как тинидазол (ТНЦ) и seconidazole [ 71 ]. Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) и Центры США по контролю и профилактике заболеваний (CDC) методические рекомендации по лечению ТВ включают в себя: MTZ или ТНЦ 2 г разовая доза в качестве рекомендованных режимов и MTZ 400-500 мг BID 7 день доза, как альтернативный режим лечения. Воздержание от употребления алкоголя должна продолжаться в течение 24 ч после завершения MTZ или 72 ч после завершения ТНЦ. Если пациент не однократной дозы MTZ терапии они могут быть даны однократной дозы ТНЦ или 7 дней дозу MTZ. Если это не удается, 2 г MTZ или ТНЦ втечение 5 дней можно вводить. Если это не удается, и нет никакой истории сексуального повторного контакта, консультации для тестирования сопротивления лекарства должно быть сделано. Консультация и ТВ восприимчивость тестирование доступно в США от CDC (телефон: [phone]; сайт: http://www.cdc.gov/std).