Т. влагалищной изолирует и Препараты СНГ и CPI-GC

Ключевые слова -

Трихомонады; вульвовагинит; эпидемиология; диагностика; Тунис.

Статья

Вульвовагинит Трихомониаз это паразитарное заболевание, вызванное трихомонад (T.vaginalis). Это наиболее распространенный, передаваемых половым путем вируса не-инфекции во всем мире. По оценкам Всемирной организации здравоохранения, ежегодно затрагивает 174 миллионов человек [1]. У женщин, это третья причина вагинит после бактериального и кандидозного происхождения [2,3] с преобладанием в диапазоне от 2 до 48% [4-6]. Наше исследование направлено на определение распространенности трихомониаза вульвовагинита (ТВВ) в популяции тунисских женщин, пытаются выяснить роль определенных факторов риска в возникновении этой инфекции и проанализировать его клинические и паразитологические характеристики.

МЕТОДЫ

Это описательный перекрестное исследование на Nicolle больницы Чарльза в Тунисе, в течение 18 месяцев с 1 февраля 2010 года по 31 июля 2011 года клиническое исследование были включены 924 пациентов для вульвовагинального Levy -vaginal. Для каждого пациента информационный листок был заполнен с указанием возраста, семейного положения, род занятий, гинекологических истории, четности, причиной для проведения консультаций, концепция принятия лечения, предрасполагающие факторы (сахарный диабет, лечение гормональные, долгосрочное кортикостероидами, беременность, образ жизни и привычки в одежде, несколько партнеров, незащищенные внебрачные половые, рискованное сексуальное поведение, посещаемость парная, бассейны....). Отбор проб было сделано моечные слизистую оболочку влагалища
после размещения расширителем у женщин и просто мазок вульвы у молодых девственниц. Два стерильные тампоны были загружены путем сканирования слизистой оболочки влагалища. Бактериологические и паразитологические исследование было сделано для каждого образца. T.vaginalis исследование
было основано на непосредственном обследовании сразу после сбора в капле физиологического раствора. Наблюдение оптический микроскоп для увеличениях (x10) и (Х40) помогли обнаружить подвижные формы 15 до 25 мкм, круглые или овальные, при условии, с небольшой волнистой мембраной, а axostyle, которая превышает тело клетки букет из четырех предыдущих жгутиков и рецидивирующим.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Микроскопические результаты

Диагноз трихомониаза был положительным у 32 пациентов (3,5% образцов) или 6,6% от всех диагностированы вагинит (485 женщин), что составляет третью причину ИПВ после того, как те, кандидозного происхождения (57,9%) и бактериальные (35,5%). эпидемиологические результаты
средний возраст пациентов с трихомониазом составил 38 лет (± 9,7 лет) с крайностями в пределах от 24 до 57 лет. Возрастная группа наиболее пострадавших возрастной группе было то, что от 30 до 39 лет. Большинство наших консультантов были женаты (71,9%), одиночные игры представлены (12,5%). Причина консультации: Наиболее частой причиной для консультации был из влагалища (84,4%), с последующим зудом (18,75%), у трех пациентов консультировались по поводу бесплодия (9,4%) и 4 управления во время "беременность.
Вклад факторов: дискриминантный анализ был проведен среди женщин с трихомониазом вульвовагинита (32 больных) и тех, кто не ИПВ (439 больных) (таблица 1). Понятие многочисленных партнеров и долгосрочной кортикостероидами были взначительной степени связано с вагинальными факторами трихомониаз, в то время как беременность является фактором, в большей степени связано с отсутствием ТВВ.Другие факторы, изучаемые не выявили статистически значимых отношений.

Таблица 1: Факторы, способствующие участвующих в патогенезе вульвовагинального трихомониаза.

Клинические результаты
Клинические симптомы: Из 32 пациентов с ТВВ, бели было зарегистрировано в 31 из них (96,9%), вульвы зуд в 20 (62,5%), в то время как только 9 диспареуния (28, 1%).Знаки на клиническое обследование: только 6 из наших пациентов имели повреждения на клинических типов обследование: очищающие поражений в области наружных половых органов (2 больных), отек наружных половых органов (у 2 больных), вульвы эритема (2 больных), Среди 23 пациентов с выделениями из влагалища, они были беловато в 13 из них (40,6%), зеленоватый в 4 (12,5%), слизисто в 4 (12,5%) и кровавая в 2 (6, 25%). Среди 32 пациентов с трихомониазом, изучение шейки матки была проведена только в 19 женщин. Exocervicite было отмечено у 8 больных (42,1%).

ОБСУЖДЕНИЕ
В ряде исследований было проведено с целью оценки распространенности этого состояния, но особенности исследованных популяций колебалась от одной работы на другую объяснить разницу в цифрах найденных. В США два исследования на двух различных популяций молодых взрослых женщин нашли распространенность 2,8% втечение [7] и 3,1% для других [8]. Эта распространенность чуть ниже 2% в Италии [9],но выше, в Индии (8,5%) [10] и в Кот - д'Ивуаре (8,2%). [11] Аналогичные данные были найдены в Египте (8,7%) и что по численности населения, состоящего в браке женщин [12]. Это против 4,38% в перспективном исследовании в Марокко, в соседней стране втечение периода двух месяцев для женщин, посещающих Акушерство и гинекология консультация. [13] В Тунисе, ретроспективное исследование, проведенное в 1997 году командой паразитологии больницы Рабта нашли распространенность 8,47%. [14] Этот показатель находится ниже в более поздних исследованиях; 5% в 2004 году [15] и 5,37% в 2007 году [16]. В нашем исследовании, T.vaginalis был выявлен у 32 больных или 3,5% нашей выборки и был ответственен за 6,6% от всех вагинит. Возрастная группа пострадавших от этого паразита населения зависит, но обычно это происходит чаще, чем между 20 и 45 годами. Действительно, Madhivanan и др найден в исследовании, проведенном в Индии популяции молодых женщин детородного возраста, кроме беременности, что, скорее всего, возрастная группа трихомониаза составляет от 26 до 30 лет лет [10]. Су запустить образец 1090 женщин из северной Австралии, распространенность T.vaginalis была выше у женщин старше 40 лет. Это объясняется наличием Беспоставочной выздоровел бессимптомного носительства с другими ИППП из - за хламидиоза и гонореи Neisseriae [17]. В нашем примере крайние возрастные категории были вовлечены 24 и 57 лет. Возрастная группа наиболее пострадавших был возраст 30-39 лет с процентом 40,6%. Наши результаты подтверждают, найденными Sena и др [18] в Соединенных Штатах с процентом 29,9%.Кроме того, доля носителей T.vaginalis замужних женщин была самой высокой (71,9%), и только 12,5% одиноки. Что касается вдов, то они были менее заражены в
размере 6,25%. Потому что наше общество является мусульманином и консервативны, разница между ставками наблюдаемых по семейному положению объясняется.
Эта инфекция, чья распространенность зависит от возрастной группы и семейного положения, т.е. сексуальная активность является передающихся половым путем инфекции, потому что T.vaginalis строго паразиты человека, существует только вегетативную форму и очень чувствителен к высыханию. Передача может произойти во влажном состоянии, выполненных во время полового акта. Тем не менее, тот факт,что он может выдержать 1-2 ч на мокрой поверхности и 24 ч в моче и сперме, не исключают возможность загрязнения мокрой ванной белье, сидений, туалетной воды, ванны, бассейны и душевые. [19] Многие механизмы вовлечены в патогенез паразита: клеточной адгезии, гемолиз, выпуск внеклеточных протеаз или веществ в CPE. Он также дает возможность использовать несколько механизмов нерест в иммунной системы хозяина.
Существует также взаимосвязь между влагалищной флоры и патогенности.Принимающие-паразит взаимодействия являются сложными, неполно выяснены [20].Наша работа стремилась изучить факторы риска у женщин с трихомониазом и в тех,без инфекции. Рискованное поведение с несколькими партнерами существования была исследована в нашем исследовании населения в основном из женщин, состоящих вбраке (90%). Из 32 женщин с трихомониазом, двое из них имели несколько партнеров,а разница была значительной (р = 0,027). Недостаток использования презервативов было сообщено во всех наших
пациентов женского пола, что подтверждает риск сексуального болезни. Что
касается ношения внутри устройства матки (ВМК) фактически работают в Турции [21] студенческой ассоциации между ИСД и носить присутствие T.vaginalis, 190 женщин,перевозящих ВМС, 13 имели трихомониаз (6,84%), в то время как показатель распространенности у женщин не носить ИСД был 2,53%, а разница была значительной (р <0,001). В исследовании, проведенном Демирезена в 2001 году в Пакистане [22], 46 женщин (4,32%) среди неносителей 1065 ВМС имели эту инфекцию в то время как 10 (22,22%) из 45 женщин, использующих эту среду контрацепция страдают от этой инфекции с существенным различием (р <0,05). Точно так же, Насир и др [23] провели такое же исследование и обнаружили, что среди 45 женщин с ВМК, T.vaginalis был выделен
в 15 из них (33,33%), в то время как распространенность п 'только 5,56% (42/755) в не несущими нагрузку ВМК (р <0,05). К минусам, в нашем исследовании, этот фактор может не быть инкриминируется как ни один из пациентов с этой инфекцией был подшипник ВМК. Патогенность T.vaginalis связан с производством фактора открепления клеток (КОР), осуществляющего СРЕ на эпителиальных клетках [24].Активность КОР зависит от рН
вагинального, с максимальной активностью при рН 5-6. Это говорит о том, что относительно увеличилась рН у женщин после менопаузы может предрасполагают к колонизации и инфекции T.vaginalis [9] В исследовании, проведенном в Италии Spinillo и др, сообщалось, что увеличение распространенности T. влагалищной выше у женщин в постменопаузе (16/148) по сравнению с теми, в деторождении (30/1564) [9]. В нашем исследовании распространенность трихомониаза у женщин в постменопаузе было 18,75% против 8,4% для тех, кто не сделал, но разница не было статистически значимым (р = 0,05). Влияние половых гормонов на этот фактор конца не изучен, хотя сообщалось тормозящее действие эстрадиола вагинальных производства CDF в пробирке [9,24]. В нашем исследовании, 12,5% среди женщин с ТВВ, против 39,9% были беременные беременные среди тех, которые не несут эту инфекцию, с соответствующим докладом значительно (р = 0,002). С учетом этого, беременность, в нашем исследовании населения, а, кажется, защитный фактор,который можно объяснить тем фактом, что женщина имеет меньше секса в так меньше риск инфекции беременности, Однако, кортикостероиды, не исследованные в литературе фактор в нашем исследовании, как представляется, является фактором,трихомониаз с существенным различием (р <0.025). Посещений мавританские бани (хаммам), фактор, который может быть обнадеживающим из - за выживания паразита влажной, но не сообщается в литературе, не является фактором,вовлеченным в начале инфекции.
Несмотря на несущих исследований привлечение местных и общих факторов в возникновении инфекции и цитопатического действия паразита, он не учитывает всех наблюдаемых клинических признаков [20]. Клинически, острые, хронические или бессимптомные формы может произойти во время полового созревания и менопаузы.При острых формах, влагалищные выделения сопровождаются вульвита, а иногда имочевых расстройств. Эти признаки показывают увеличение во время менструации.При хронических формах вагинальных выделений является умеренным, с зудом и диспареунии. Почти половина инфицированных женщин бессимптомно, но половина из них будет развитие симптоматической инфекции в течение 6 месяцев [20]. Эти формы могут быть осложнены skénites к bartholinites, цистит и уретрит. Самый высокий Lescomplications генитальный (цервицит, метрит, сальпингит) встречаются редко. [25]
Заболевание также имеет медицинские последствия, социальные и экономические. У женщин, существует взаимосвязь между паразитарное и раком шейки матки или бесплодия. Во время беременности, он может нести ответственность за преждевременный разрыв плацентарных мембран, а также дети с низкой массой тела при рождении [20]. T.vaginalis инфекция также повышает риск заражения ВИЧ от 1,6 до 2 [19]. В исследовании, проведенном в США [18], наличие выделений из влагалища была основным симптомом сообщили инфицированных женщин и присутствовал в 58,6% с последующим вульвы зуд в 33% и дизурии в 21% в то время как 26, 8% женщин с этой инфекцией были бессимптомно. В другом исследовании, проведенном в Индии [10], выделения из влагалища присутствовали у 37% больных, зуда у 18% и дизурии у 16%.Бессимптомные случаи составляли 41% результаты подтверждают.Our других исследований с основным симптомом вагинальной сообщил на 96,9% наших пациентов с этой инфекцией. Вульвы, зуд приходит во 2 - м месте с 62,5%. Диспареунии была описана у 28,1% больных. При физическом осмотре во время трихомониаза, вульвы красная и пунктирная и влагалище, что имеет зеркалах катаральный тип воспалительного аспекта с красной подкладкой и утолщенные складки в 10-75% больных. Зеркалах шея ярко - красный пунктир с тонкими красными точками. Хороший аспект "малина" наблюдается в 1-2% случаев [26]. Из влагалища характерны; фол, гнойные, иногда желтоватый или зеленоватый, пенистый или пенистые присутствует в 50-75% случаев [26]. В исследовании в США [19], 31,5% пациентов с трихомониазом пришлось изучить вагинальный слизисто против 52,5% с белесыми или легкими потерями. Появление малина шея видно на уровне 5,4%, а 8,9% пациентов имели нормальный осмотр шейки матки. Изучение рН влагалища показало, что 82% инфицированных женщин имели рН> 4,5, подтверждая, что высокий рН предрасполагает к инфекции. В нашем исследовании, 18,75% пациентов имели вульвы повреждения (царапины, эритема или отек). Бели были объективируется у 23 больных (71,9%), из которых 12,5% был зеленоватый. Exocervicite было отмечено у 8 пациентов из 19, которые получили осмотр шейки матки после укладки рефлектора 42,1% пациентов с ТВВ. Для диагностики, такие как клинические проявления не являются специфическими, оно основано на обнаружении этого паразита может быть сделано прямо или косвенно. Взимают
вульвовагинит должны отвечать определенным условиям. В течение 2 -х дней до начала сбора, пациент не должен делать какие - либо промывание влагалища или заниматься сексом. После укладки расширитель, стерильно собирают с помощью отсоса с помощью пипетки или швабру, то слизисто выделениями на разных уровнях, culde- мешок, железы Скина и бартолиновой, эндоцервикальную, искать мобильного паразита. Экспертиза должна быть выполнена экспромтом. Можно также подать выделениями в сохранение среды отложить рассмотрение нескольких часов. Прямое микроскопическое исследование экссудата между горкой и крышкой, чтобы искать формы мобильного T.vaginalis. Это жгутиконосцев простейшим, который существует только вегетативная форма (Трофозоита) Умножая двоичным делением и быстро умирающих в окружающей среде. Там нет кистозная форма для этого паразита.Круглые формы, описанные не кистозные формы, но формы дегенерации. [20] Это Трофозоита, мобильный, миндалевидные, бесцветная, преломляющая свежие, размеры 10-15 мкм в длину и 7 мкм в ширину. Она представляет собой axostyle,который проходит через клетку и спину, чем овальное сердечник к передней части тела и kinetoplast, из которого предыдущая 4 бесплатно жгутики и рецидивирующий жгутик образуя волнистую мембрану, которая останавливается на 2 / 3 длины тела.Эти жгутики, которые обеспечивают подвижность (Трофозоита включается сам посебе). Когда температура падает, вегетативная форма округлая и ​​подвижность уменьшается. Он находится на наблюдении этих различных компонентов, которые несет в себе микроскопическую диагностику паразита.
Применение фазового контраста облегчает поиск. Чувствительность этого метода оценивается между 66 и 80%. Окрашивание мазка экссудата путем акридинового оранжевого и исследовали под микроскопом в ультрафиолетовом (УФ) может быть выполнена. Паразит появляется темно - красный, средние лейкоциты и флуоресцентные вагинальные клетки. Другие пятна, такие как те, которыеиспользуют периодическую кислотно-Шифф (PAS) или те, Фонтана или Папаниколау могут использоваться, но менее чувствительны. Демонстрация T.vaginalis может быть сделано путем маркировки паразита с флуоресцентным моноклональных антител наблюдается микроскопически при УФ. Чувствительность составляет 90% по этой методике. Культура этого паразита может быть сделано на среде TYM Даймонда с 10% сыворотки жеребенка или средней Roiron. Эти культуры поддерживаются в анаэробных условиях в банке. Время культивирования составляет от 2 до 7 дней. Оптимальные условия роста являются температура 35-37 ° С, рН 5,5 - 6 и anérobiose [19]. Это очень чувствительный метод, который может обнаружить даже только несколько сотен паразитов. Методы ПЦР может обнаружить последовательности - мишени с помощью коммерчески доступных олигонуклеотидных зондов (Подтверждают система В.П., зондового Ботвелл, штат Вашингтон). Они дают ложные негативные реакции посравнению с результатами культуры. Что касается косвенной диагностики, она либо путем выявления антител или антигенов. Обнаружение антител, изготовленных различными способами: агглютинации, гемагглютинации, иммунофлюоресценции, твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA). Низкая чувствительность не обнаруживает низкие уровни антител. Их настойчивость в сыворотке не проводитсяразличие между недавней инфекции от старой инфекции. Обнаружение Т. влагалищной антигенов может быть сделано с помощью моноклональных антител,меченных пероксидазой или флуорохрома. Эти методы являются быстрыми, а также специфичным и чувствительным, чем культуры. В современной практике, диагноз основан на нахождении паразита на прямой экспертизы и является диагностическим модальность, принятой в нашем исследовании.
Это исследование позволило нам сделать наши диагностические выделение вегетативные формы паразита. Кроме того, это позволило нам изучить цитологию наслаждаясь богатства эпителиальные клетки и лейкоциты. Трихомоноз взначительной степени связано со значительным вагинального воспаления.

Трихомонады Lipophosphoglycan бреши Связывание с Galectin-1 и -3 модулировать Эпителиальный Иммунитет *

1. Райна Н. Fichorova ‡ 1,

2. Хидэми С. Ямамото ‡,

3. Титилайо Fashemi ‡,

4. Эван Фоли ‡,

5. Stanthia Райан ‡,

6. Ной Битти ‡,

7. Хасан Дауд ‡,

8. Гэри Р. Хейс §,

9. Гийом St-Pierre ¶,

10. Сатико Сато ¶ и

11. Bibhuti Н. Сингх §

+Автор Принадлежность

1. С ‡ Лаборатории генитального тракта биологии, кафедра акушерства, гинекологии и репродуктивной биологии, Бригама и Женской больницы, Гарвардской медицинской школы в Бостоне, штат Массачусетс 02115,

2. Департаменты § биохимии и молекулярной биологии и акушерства и гинекологии, Университет штата Нью - Йорк Upstate медицинский университет, Сиракузы, Нью - Йорк 13210, и

3. ¶ Лаборатория гликобиологии и биоимиджинга, научно - исследовательский центр инфекционных болезней, Медицинский факультет, Университет Лаваля, Квебек, Квебек G1V 4G2, Канада

1. ↵ 1 Кому следует адресовать корреспонденцию: Dept. акушерства, гинекологии и репродуктивной биологии, Brigham и женской больницы, Гарвардской медицинской школы, 221 Longwood Ave., RF468, Boston, MA 02115. Тел.: [phone];Факс: [phone]; Электронная почта: [e-mail].

 

Следующий раздел

Абстрактные

Трихомониаз является наиболее распространенным невирусная передающихся половым путем инфекция, вызванная вагинотропного внеклеточного простейшим паразитом Trichomonas влагалищной. Инфекция является возвратным, без прочного иммунитета, часто протекает бессимптомно, и связаны с осложнениями беременности и риском вирусной инфекции.Молекулярные механизмы иммунной уклонения от паразита плохо изучены.Показано, что галектин-1 и -3 выражаются человека шейки матки и влагалища эпителиальных клеток и действуют как рецепторы патоген-распознающих для керамиды фосфоинозитол гликановой ядра (CPI-GC) доминанты поверхности простейшими lipophosphoglycan (LPG). Мы использовали экстракорпорального в модели с миРНК галектин нокдаун эпителиальных клонов, рекомбинантный galectins, клиническая Trichomonas локализует и мутантных производных простейшими рассекать функцию галектина-1 и -3 в контексте Trichomonas инфекции. Галектин-1 подавлено хемокинов, которые способствуют набору фагоцитов, которые могут устранить внеклеточный простейшими (IL-8) или мостика врожденный к адаптивного иммунитета (MIP-3 & alpha; и RANTES (регулируемый по активации Т - клеток нормальной экспрессии и секреции)).Глушащий галектин-1 увеличилась и добавление экзогенных галектин-1 подавленных ответов хемокинов на трихомонады или CPI-GC / LPG. В противоположность этому, глушителей галектин-3 уменьшенный ответ IL-8 в СНГ. Живые трихомонады истощены внеклеточные уровни галектина-3.Клинические изоляты и мутант Trichomonas CPI-GC, который уменьшил сродством к галектина-3, но поддерживали сродство к галектина-1 подавлено экспрессию хемокинов. Таким образом, посредством связывания CPI-GC, трихомонада способна регулировать Galectin биодоступности и функции в пользу ее паразитарной выживания. Эти данные позволяют предположить,новые подходы к контролю трихомониаз и служить основанием для дальнейших исследований Galectin-связывающим разнообразия среди клинических изолятов в качестве возможного источника для симптомов неравенства в паразитарных инфекций.

· цитокин

Предыдущий разделСледующий раздел

Введение

Каждый год более 180 миллионов человек заражаются мочеполовой простейшим паразитом Trichomonas влагалищной, который устойчиво приходится более половины инфекций, передаваемых половым путем (ИППП) 2во всем мире (1) и для значительной нагрузки в области общественного здравоохранения, в том числе низкий вес при рождении и недоношенности, шейки матки и рак простаты, и риск инфицирования ВИЧ (2). В Соединенных Штатах, в отличие от других менее распространенных ИППП, таких как хламидиоз, гонорея, сифилис, трихомоноз не регистрируемое заболевание, а не профилактический ежегодный скрининг для T. влагалищной был реализован. В то же время, отсутствие симптомов, по крайней мере в половине диагностированных случаев у женщин и еще больше у мужчин, позволяетпредположить, что при отсутствии профилактического скрининга большинство инфекций может оставаться диагностируется и не лечится. Пока неясно, как простейшим паразитом уклоняется иммунной системы, чтобы часто молчаливых, долговечных и рецидивирующих инфекций. Паразит лучше всего приспособлены к внеклеточной колонизации человека шейно-слизистой оболочки влагалища, и, следовательно, понимание молекулярных механизмов эпителиальной поверхности хозяин-патоген взаимодействий в человеческом женских половых путей имеет важное значение для построения успешных будущих стратегий искоренения.

Известно, что паразитическими простейшими содержат множество сложных углеводов, на их поверхности, например, гликолипиды, гликопротеины и гликолипиды гликозилированные фосфатидилинозитол (3). Эти гликоконъюгаты, как сообщается, играют важную роль в вторжения клетки -хозяина и уклонения от принимающих иммунных реакций (4 - 6). Т. влагалищной и связанные с бычьей паразит Tritrichomonas плода экспресс lipophosphoglycans (LPG) в несколько миллионов копий на паразита на якорь на поверхности простейшими через инозитол phosphoceramide (7, 8). Мы показали, что LPG помогает T. влагалищной в присоединении к шеечно эпителия (9), а также в уклонении от врожденного иммунитета, подавляя экспрессию основного ингибитора слизистого антимикробного белка секреторной лейкоцитарной протеазы (10, 11). Керамиды фосфоинозитол Гликан ядро (CPI-GC) сжиженного нефтяного газа также сотрудничает с патогенными бактериями и вагинальных со своей собственной микрофлоры, эндобионт дсРНК Т. влагалищной вирус, чтобы изменить бактериальные образцы колонизации и местную иммунную среду в поддержку бактериального вагиноза, который, в свою очередь, способствует T.влагалищной выживания (9, 12, 13). Рецепторы принимающие ответственные за трихомонады трансдукции сигнала CPI-GC остаются недостижимой до сих пор.

Т. влагалищной СНГ, и его иммунокомпетентных CPI-GC домена содержат бета-галактозидов и обильные поли- N - ацетил-лактозамином повторы (polyLacNAc) (12), которые обеспечивают молекулярную основу для предсказуемого взаимодействия с семейством Galectin белков, которые признают Galβ1-4GlcNAc дисахарид мотив и полимеры этой структуры в виде polyLacNAc (14 - 16). Кроме того, сообщалось, что галектин-1 опосредует прилипание паразита к раку шейки эпителиальных клеток в LPG-зависимым образом; Тем не менее, влияние этого связывания на иммунитета хозяина, а также молекулярные взаимодействия сжиженного нефтяного газа и галектина-1, оставалась неизученной (17). Мы сосредоточили свои исследования на галектина-1 и -3, потому что эти два galectins показали существенное влияние на иммунные клетки, в том числе фагоцитов и антиген-представляющих клеток (18, 19), и все же их иммунные функции не были изучены в шейном и эпителиальные клетки, которые являются естественным хозяином для T. влагалищной паразиты. Насколько нам известно, это исследование является первым, чтобы определить молекулярный домен на T. влагалищной поверхность отвечает за функциональное галектина связывания,который манипулирует иммунитет хозяина.

Предыдущий разделСледующий раздел

Экспериментальные процедуры

Бислоя интерферометрии

Биотинилированных CPI-GC или сжиженный нефтяной газ был приготовлен с использованием Pierce EZ-Link сульфо-NHS-LC комплект биотинилирования в соответствии с указаниями производителя. Био-слой интерферометрии был выполнен на ForteBio Октет Red (Pall ForteBio Corp., Менло-Парк, Калифорния).Покрытые стрептавидином биосенсоры были предварительно смоченного в PBS и загружали в течение 30-60 мин в растворе 50 мкг / мл биотинилированного CPI-GC. После краткого стирке при рН 3,0, чтобы удалить слабо связанный липид, базовая линия была установлена ​​путем инкубации в течение 5 мин в PBS с последующей инкубацией с различными концентрациями лектинов или galectins в PBS в течение 1 ч. Разобщение Затем исследовали путем инкубации в течение еще одного часа в PBS. Все стадии проводили при 25 ° С и при 1000 оборотах в минуту (на стадии загрузки, которая была сделана при 0 оборотов в минуту, за исключением). Для галектина-3, связывание осуществляли в PBS, содержащий 0,005% Tween 20. Устойчивого состояния анализ был проведен с использованием программного обеспечения ForteBio анализа данных (версия 6.3). Рицин и помидор лектина были приобретены у Vector Laboratories (Burlingame, CA).

Статистика

Данные были проанализированы с помощью дисперсионного анализа (GraphPad Prism, версия 5.0; GraphPad Software). Р значения <0,05 считались значимыми.

STI

инфекций, передаваемых половым

CPI-CG

керамиды фосфоинозитол Гликан ядро

LPG

lipophosphoglycan

RANTES

Регулируемая по активации Т-клеток нормальной экспрессии и секреции

PolyLacNAc

поли N - ацетил-лактозамином

МТТ

3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2,5-дифенилтетразолийбромид

ANOVA

Дисперсионный анализ

м

мутант

Относительной влажности

рекомбинантный человеческий

LEA

Л. Esculentum агглютининов.

В заключение, данное исследование дает экспериментальное доказательство того, что T.влагалищной паразит использует его LPG / CPI-GC связывания с галектина-1 и галектина-3 ниспровергать иммунного ответа, связанные с клиренсом инфекции в шеечно среде, как схематически представлены в рис. 9. В соответствии с предложенной парадигмы заболевания, T.влагалищной через высокое сродство его связывания с СНГ галектина-1 использует для своей собственной выгоды иммунный ответ естественный хозяин, что эпителий выдвигает ограничить воспалительное повреждение через галектин-1 сигнализации. В то же время, разрушающих уровни галектина-3, Т.влагалищной уменьшает распознавание LPG через этот галектина, который опосредует нормальное разрешение инфекции через хемокинным-опосредованной нейтрофилов и макрофагов набора. В результате двойного взаимодействия с галектина-1 и -3 является подавленным слизистых оболочек окружающей среды, менее враждебны к паразиту, который в соответствии с клиническими результатами упорного и часто молчаливого / бессимптомный характер этой инфекции. Разнообразие CPI-GC связывания с галектина-3 следует дополнительно изучить в качестве предполагаемой молекулярной основы для симптоматики неравенства в T.влагалищной инфекции. Повсеместно сохраняется привязка к галектина-1 через T.влагалищной, если подтверждено для большего количества клинических изолятов, может возникнуть в качестве эволюционного инструмента протозойных паразитов, чтобы уйти от хозяина иммунитет, подавляя защитные иммунные реакции и должны быть дополнительно изучены наряду с галектина-3 в качестве цели будущих терапевтических подходов.

A трихомонады Ромбовидная протеаз и ее субстрат Модулируйте Паразит Привязанность и цитолиза клеток-хозяев

· Angelica М. Riestra,

· Шив Ганди,

· Майкл Дж Sweredoski,

· Энни Moradian,

· Sonja Гесс,

· Синиша Urban,

· Patricia J. Johnson

Материалы и методы

Рост клеток

T. Влагалищной штаммы G3 (АТСС PRA98) и RU393 (АТСС 50142) выращивали, как описано ранее [ 71 ]. Паразиты инкубировали при 37 ° С и пассируют в день в течение менее чем за две недели. Человек эктоцервикальных клеточная линия Ect1 E6 / E7 (АТСС CRL-2614) выращивали, как описано [ 72 ].

Обсуждение

Мы охарактеризовали три предполагаемых ромбовидные протеаз в организме человека паразит Т. Влагалищной и показал, что два, TvROM1 и TvROM3, являются каталитически активными и проявляют отличную специфичность к субстрату. TvROM3 расщепляет канонический ромбовидная субстрат шпиц в гетерологичной анализе клеток расщепления в то время как TvROM1 не расщепляют Spitz, но делает КОЛЕТ несколько известных Plasmodium ромбовидные субстратов [ 39, 44 ]. Иммунофлюоресценции исследования экзогенно выразил HA-меченый TvROM1 и TvROM3 показывают, что TvROM1 является плазматическая мембрана протеазы, тогда как TvROM3 локализуется в Гольджи-подобных структур. Клеточная локализация исследования эндогенных белков еще предстоит сделать для подтверждения локализации определяется для HA-меченных белков.

В качестве шага к определению функции TvROMs, мы определили девять предполагаемую T. Влагалищной поверхности подложки с использованием как количественных протеомические и биоинформатики подходы. Два из этих кандидатов субстратов было показано, TvROM1 субстраты: TVAG_166850 и TVAG_280090. Эти белки имеют высокую степень сходства и являются членами семейства генов,состоящей из более чем 150 членов [ 20 ]. Интересно, что два других предсказанные подложки (TVAG_244130 и TVAG_335250) являются паралогов из TVAG_166850 и TVAG_280090; однако их ТМ домены не расщепляется TvROM1 в анализе гетерологичных клеток расщепления. Будут ли эти предполагаемые субстраты расщепляются других протеаз, не рассмотренных в данном исследовании, еще предстоит определить. TvROM3 был не в состоянии расщепить любой из девяти предполагаемых Т. Влагалищной субстратов, выявленных, подтверждая, что TvROM1 и TvROM3, которые отображают различные субклеточных локализаций, а также по всейвидимости, обладают различной специфичностью субстрата.

Мы не смогли определить T. Влагалищной субстраты для любого TvROM2 или TvROM3.Тем не менее, учитывая, что кандидаты, идентифицированные субстраты являются членами крупных белковых семейств, непроверенных члены этих семей или других неидентифицированных белков могут служить в качестве субстратов для этих TvROMs.Это согласуется с нашим наблюдением, что Т. Влагалищной поверхности протеомов содержат подмножество белков, кодируемых больших семей нескольких генов, с различными подмножествами, выраженными различными штаммами [ 23 ].

Аминокислоты окружающие предсказанные сайты расщепления в модельных ромбовидные субстратов расщепляется TvROM1 и Т. Влагалищной подложки подобны.Существует общее присутствие небольших аминокислотных остатков, окружающих предсказанный сайт расщепления да и вообще ограничение небольшой аминокислоты в Р4 и сайты P2 'в нашем поиске паразит мотив имеет решающее значение для биоинформатики идентификации двух Т. Влагалищной субстраты расщепляются TvROM1, Тем не менее, находя, что TvROM1 расщепляет только два из пяти кандидатов субстратов определенных биоинформатики подчеркивает трудность в определении субстратов с помощью поиска мотивов. В целом, эти анализы показывают,что динамика ТМ может играть более важную роль в выборе подложки, чем наличие специфических аминокислот, окружающих сайт расщепления.

Мы обнаружили, что избыточная экспрессия TvROM1 значительно увеличивает прикрепление паразита и лизис клеток - хозяев, которые являются два свойства критических для патогенеза Т. Влагалищной. Эти данные могут быть объяснены несколькими способами. Передача сигналов, индуцированная расщеплению TvROM субстрата во время начальной фазы взаимодействия паразит-хозяин может привести к увеличению адгезивных поверхностных белков от паразита или клетки - хозяина. Это может быть опосредовано начальным низким сродством связывания, с отщепление вождения более высокое сродство связывания, что, в свою очередь, запускает клетки -хозяина лизис. Роль для TvROM1 на стыке присоединения и цитолиза согласуется с наблюдением, что когда - то порог прикрепления паразита достигается, клетка - хозяин цитолиз срабатывает [ 17 ]. Экзогенный экспрессия TVAG_166850 субстрата с ромбовидной сайтом расщепления предсказанная P1-P1 'мутируют для уменьшения TvROM1 расщепление приводит к еще большему увеличению прикрепления паразита поотношению к экзогенным экспрессии белка дикого типа, что согласуется с прямой ролью этого субстрата в присоединении и регулирование его функции путем TvROM1 расщепления. В связи с этим следует отметить, что с помощью программы Phyre2, как TVAG_166850 и TVAG_280090 имеют кадгерина-как предсказанные вторичные структуры, которые известны в качестве посредника клеток: клетки взаимодействий в эукариот [ 63].

Белки, идентифицированные в супернатантах Т. Влагалищной (S1 Таблица) вместе с белками мы ранее идентифицированных быть выпущенным в экзосомы [ 64 ], составляют, по нашим данным, наиболее полный анализ списков белков,высвобождаемых / секретируется Т. Влагалищной до настоящего времени, Существует перекрытие между этими двумя протеомов, с 70 из 188 белков, идентифицированных здесь также присутствует в Т. Влагалищной экзосом протеом (S1 Таблица). Мы определили цистеина протеаз, которые считаются введенными и секретируется факторов вирулентности Т. Влагалищной (обзор в [ 65 ]). Этот список также экспериментальные данные для высвобождения белков, ранее прогнозировались как T. Влагалищной секретируемые белки, такие как ингибиторы цистеин протеазы называют цистатины [ 66 ] и порообразующего / saposin-подобный белок гипотетического, чтобы помочь клеткам гемолитика хозяев [ 20, 21, 67 ]. Другие растворимые факторы, выявленные в этом анализе протеомики могут быть кандидатами, способствующими Т. Влагалищной вирулентность.