Вирусы гепатитов. Лабораторная диагностика вирусных гепатитов.

Вирусы гепатитов. Лабораторная диагностика вирусных гепатитов.

Ретровирусы. Лабораторная диагностика, лечение, профилактика СПИДа.

Онкогенные вирусы.

 

ВИРУСЫ ГЕПАТИТОВ

Возбудитель гепатита A (HAV — Hepatitis A virus) относится к семейству пикорнавирусов, роду энтеровирусов. Вызывает наиболее распространенный вирусный гепатит, который имеет несколько исторических названий (инфекционный, эпидемический гепатит, болезнь Боткина и др.) В нашей стране около 70 % случаев вирусного гепатита вызывается вирусом гепатита А. Вирус гепатита А (ВГА, Hepatitis A virus) — возбудитель гепатита А человека, впервые идентифицирован С. Фейстоном и соавт. в 1973 г. В экскретах экспериментально зараженного добровольца.

 

 

Структура и химический состав. По морфологии и структуре вирус гепатита А близок ко всем энтеровирусам. В РНК вируса гепатита А обнаружены нуклеотидные последовательности, общие с другими энтеровирусами.

Таксономия. По современной классификации относится к роду Hepatovirus в составе семейства Picornaviridae, однако имеет ряд особенностей в структуре генома и биологических свойствах, которые отличают его от остальных членов этого семейства. К настоящему времени детально изучено почти 30 разных штаммов (изолятов) ВГА и более 100 изолятов обследовано на предмет генетического родства между ними. Как оказалось, основная генетическая детерминанта, контролирующая выработку вируснейтрализующих антител, присутствует в неизменном виде во всех обследованных изолятах. В то же время наибольшие генные различия в пределах 15 % от общей нуклеотидной последовательности регулярно обнаруживаются, главным образом, среди штаммов, имеющих различное географическое происхождение. Нa настоящий момент известно существование семи таких генных подтипов ВГА; штаммы, выделенные в России, принадлежат к подтипу IA.

Морфология

Морфологически ВГА представляет собой сферические частицы диаметром 27-30 нм, построенные по типу икосаэдрической симметрии и лишенные оболочки. Вирусный геном представлен линейной одноцепочечной РНК, состоящей из приблизительно 7500 нуклеотидных оснований, с общей молекулярной массой порядка 2,2 МДа. В нем определяются: (1) 5' — нетранслируемая область; (2) единичная рамка считывания, кодирующая структурные и неструктурные белки и (3) короткая 3' — нетранслируемая область, заканчивающаяся поли-А трактом. Геном ВГА имеет положительную полярность, то есть вирусная РНК непосредственно выполняет матричные функции; стратегия трансляции, очевидно, такая же, как и у других пикорнавирусов. Белковая оболочка (капсид) ВГА построена из множественных копий четырех (по некоторым данным, трех) структурных белков, обозначаемых как VP1, VP2, VP3 и VP4; их молекулярные массы, вычисленные по предсказанной аминокислотной последовательности, составляют соответственно 33,2; 24,8; 27,8 и около 2,5 кДа. Предполагают также наличие еще одного белка VP с мол. массой 2,4 кДа, который связан с 5' — концом РНК и принимает участие в инициации трансляции.

Зрелые, то есть содержащие полноразмерную РНК, вирионы ВГА имеют плавучую плотность в хлориде цезия, равную 1,32— 1,34 г/см3 и коэффициент седиментации в нейтральных растворах сахарозы порядка 156—160S. Кроме того в фекалиях больных и в препаратах из зараженных тканевых культур могут встречаться в небольших концентрациях частицы с иными значениями плавучей плотности (от 1,27 до 1,48 г/см3) и иными коэффициентами седиментации (50 и 90S). Они соответствуют т. н. дефектным вирионам, отличающимся от зрелых вирионов тем, что не содержат РНК или содержат только ее фрагменты, или же имеют повышенную проницаемость белковой оболочки.

ВГА считается одним из наиболее устойчивых вирусов человека к факторам внешнего воздействия. При 60° С он полностью сохраняется в течение часа, и лишь частично инактивируется за 10—12 часов, однако кипячение приводит к разрушению вируса за несколько минут. ВГА остается инфекционным в течение по крайней мере одного месяца после высушивания на твердой поверхности в условиях обычного помещения (25° С и 42 % влажности). На выживаемости ВГА не сказывается реакция среды в пределах рН 3,0-10,0. Он устойчив к жирорастворителям, таким как эфир, хлороформ, фреон, генетрон и др. Эффективным методом стерилизации материалов, содержащих ВГА, является автоклавирование (12ГС 20 мин). Дезинфицирующие средства также достаточно эффективны: хлорамин в концентрации 2,0-2,5 мг/л полностью устраняет инфекционность ВГА за 15 мин перманганат калия (30 мг/л) — за 5 мин, 3 % формалин — за 5 мин (при 25 °C) йодистые соединения (3 мг/л) — за 5 мин; на поверхностях дезинфицирующий эффект может быть достигнут ультрафиолетовым облучением (197 microW/см2 в течение 4 мин). Следует учесть, что приведенные данные были получены в экспериментах с использованием очищенных взвесей вируса в солевых растворах; в материалах, содержащих органические вещества и плотные примеси, устойчивость ВГА значительно выше.

Изоляты ВГА удается адаптировать к росту в клеточных культурах, хотя адаптация происходит на протяжении нескольких пассажей, каждый из которых может длиться до 6-8 недель. В основе этого процесса, очевидно, лежит отбор вариантов вируса, способных размножаться в данной культуре. Даже после хорошей адаптации ВГА удовлетворительная продукция вируса отмечается на 10—14 день, обычно она составляет ТКИД50 в 1 мл клеточного лизата. Как правило, размножение ВГА в культивируемых клетках не сопровождается цитолитическими или каким-либо другим повреждающим клетки действием. Известно очень немного вариантов ВГА, способных вызывать незначительный цитопатогенный эффект. При размножении существенная часть вирусного потомства остается в прочной связи с внутриклеточными мембранами. Синтез отдельных компонентов ВГА в инфицированных клетках и сборка вирионов изучены недостаточно, однако, есть основания полагать, что они в общих чертах подчинены тем же закономерностям, которые свойственны другим пикорнавирусам, например, полиовирусам. Размножение ВГА в клетках не подавляется такими известными ингибиторами пикорнавирусного роста, как гуанидин и НВВ (2-а-гидроксибензил-бензимидазол). По предварительным данным, на размножение ВГА могут угнетающе воздействовать рибавирин, амантадин, пиразофурин, соли цинка и некоторые другие химические соединения.

Для обнаружения и количественного определения ВГА в разное время были предложены иммуноэлектронная микроскопия (с. 181) твердофазные радиоиммунный и иммуноферментный анализы; инфекционная активность ВГА может определяться титрованием на восприимчивых обезьянах, а для вариантов, адаптированных к культуре ткани, титрованием в соответствующей культуре по методу конечных разведении или методом бляшек. В последнее время для идентификации ВГА стали применяться ДНК-гибридизации и амплификации РНК в полимеразной цепной реакции.

В экспериментальных условиях ВГА способен размножаться в организме приматов, воспроизводя те или иные черты гепатита. Наиболее адекватной лабораторной моделью инфекции, вызываемой ВГА, считается шимпанзе. Кроме того, к этой инфекции оказались восприимчивыми некоторые виды обезьян Нового Света: усатые, рыжеголовые и краснобрюхие тамарины, обыкновенные игрунки, а также совиные, или панамские ночные, обезьяны. Окончательно не решен вопрос о возможности заражения в эксперименте человеческим ВГА мартышкообразных обезьян Старого Света, хотя известно, что в естественных условиях эти обезьяны переносят гепатит, вызываемый вирусом, родственным ВГА.

Критериями экспериментальной гепатитной А инфекции у обезьян служат:

1. патологическое повышение уровней сывороточных ферментов АлАТ, АсАТ и ИЦД;

2. наличие характерных для острого гепатита изменений печеночной ткани;

3. экскреция ВГА с фекалиями, иногда присутствие вируса в печени, желчи и сыворотке;

4. появление антител к ВГА, в том числе в виде иммуноглобулинов класса М.

 

Вирус гепатита А имеет один вирусспецифический антиген белковой природы. HAV отличается от энтеровирусов более высокой устойчивостью к действию физических и химических факторов. Он частично инактивируется при нагревании до 60°С в течение 1 ч, при 100 °С разрушается в течение 5 мин, чувствителен к действию формалина и УФ-излучению.

 

 

Вирус гепатита А

Культивирование и репродукция. Вирус гепатита обладает пониженной способностью к репродукции в культурах клеток. Однако его удалось адаптировать к перевиваемым линиям клеток человека и обезьян. Репродукция вируса в культуре клеток не сопровождается ЦПД. HAV почти не выявляется в культуральной жидкости, поскольку ассоциирован с клетками, в цитоплазме которых он репродуцируется.

 

Вирус гепатита А отличает рекордная устойчивость к внешним воздействиям:

• Кипячение - инактивация вируса происходит только через 5 мин.
• Хлор - 30 мин.
• Формалин - 72 часа
• 20% этиловый спирт - не инактивируется
• кислая среда (рН 3.0) - не инактивируется
• блюда из мяса и моллюсков (температура 80^оС) - 20 мин.
• выживание в воде (температура 20^оС) - 3 дня

Патогенез заболеваний человека и иммунитет. HAV так же, как и другие энтеровирусы, с пищей попадает в желудочно-кишечный тракт, где репродуцируется в эпителиальных клетках слизистой оболочки тонкой кишки и регионарных лимфатических узлах. Затем возбудитель проникает в кровь, в которой он обнаруживается в конце инкубационного периода и в первые дни заболевания.

 

 

Желтушность склер и кожи

В отличие от других энтеровирусов основной мишенью поражающего действия HAV являются клетки печени, в цитоплазме которых происходит его репродукция. Не исключена возможность поражения гепатоцитов NK-клетками (натуральными киллерами), которые в активированном состоянии могут взаимодействовать с ними, вызывая их разрушение. Активация NK-клеток происходит и в результате их взаимодействия с интерфероном, индуцированным вирусом. Поражение гепатоцитов сопровождается развитием желтухи и повышением уровня трансаминаз в сыворотке крови. Далее возбудитель с желчью попадает в просвет кишечника и выделяется с фекалиями, в которых отмечается высокая концентрация вируса в конце инкубационного периода и в первые дни заболевания (до развития желтухи). Гепатит А обычно заканчивается полным выздоровлением, летальные исходы редки.

После перенесения клинически выраженной или бессимптомной инфекции формируется пожизненный гуморальный иммунитет, связанный с синтезом противовирусных антител. Иммуноглобулины класса IgM исчезают из сыворотки через 3—4 мес после начала заболевания, в то время как IgG сохраняются в течение многих лет. Установлен также синтез секреторных иммуноглобулинов S lgA.

Эпидемиология. Источником инфекции являются больные люди, в том числе и с распространенной бессимптомной формой инфекции. Вирус гепатита А широко циркулирует среди населения. На Европейском континенте сывороточные антитела против HAV содержатся у 80 % взрослого населения, достигшего 40-летнего возраста. В странах с низким социально-экономическим уровнем инфицирование происходит уже в первые годы жизни. Гепатитом А часто болеют дети.

Больной наиболее опасен для окружающих в конце инкубационного периода и в первые дни разгара болезни (до появления желтухи) в связи с максимальным выделением вируса с фекалиями. Основной механизм передачи — фекальнооральный — через пищу, воду, предметы обихода, детские игрушки.

Вирусный гепатит А - вирусная инфекция, проявляющаяся желтухой, которая вызвана аутоиммунным поражением клеток печени вследствие их поражением вирусом. Инфекция передается фекально-оральным путем, с загрязненной водой и продуктами. Источниками вируса являются заболевшие люди.

Эпидемическая желтуха была описана впервые еще в античную эпоху, однако гипотеза об инфекционной природе была впервые сформулирована Боткиным только в 1888 году. Дальнейшие исследования привели к разделению в 1960-х годах вирусного гепатита с фекально-оральным путем передачи (А) и сывороточного гепатита (В). Позднее были выявлены и другие вирусные гепатиты - C, D, E и др.

Впервые вспышки гепатита А были описаны в XVII-XVIII веках. Неэпидемические, отдельные случаи вирусного гепатита А были описаны как катаральная желтуха - то есть желтуха, сопровождающаяся симптомами простуды. Спустя век было доказано, что эпидемическая и неэпидемическая формы желтухи являются проявлением одной и той же инфекции, вызванной одним вирусом.

Фекально-оральный механизм распространения вируса был выявлен только во время Второй Мировой войны. В 1941-42 гг. желтуха стала проблемой для английских войск в ходе военных действий на Среднем Востоке, когда вирус вывел из строя около 10% личного состава. С этого момента, в 1943 г. в Великобритании и США были начаты углубленные исследования проблемы. Факт пожизненного иммунитета к инфекции у однажды переболевших ею натолкнул исследователей на мысль о том, что сыворотка переболевших гепатитом А может быть использоваться для профилактики. Эффективность использования человеческого иммуноглобулина (считается, сыворотка всех взрослых содержит антитела к вирусу гепатита А) была продемонстрирована уже в 1945 г., когда результатом иммунизации 2,7 тыс. американских солдат стало 86%-е снижение заболеваемости.

Чаще всего вирус попадает в организм фекально-оральным путем, то есть при употреблении в пищу контаминированных воды и продуктов. Чаще всего, это продукты, не подлежащие термической обработке - зелень и фрукты, либо уже контаминированные вирусом, либо вымытые водой сомнительного происхождения.
Менее актуальным является передача вируса с зараженной кровью и ее продуктами, что встречается у наркоманов, пользующихся общими шприцами, у тех, кто получает препараты крови или контактирует с ней (включая сотрудников органов правопорядка). Этот путь передачи редко принимается в расчет, хотя чисто умозрительное сравнение с вирусным гепатитом В может дать представление о возможной недооценки распространенности гепатита А.

Источником инфекции является больной человек в последнюю неделю инкубационного периода (который длится от 14 до 28 дней) и в первую неделю заболевания. Таким образом внешне здоровый человек может служить источником опасности для своего окружения. Длительность нетрудоспособности в среднем составляет 35 дней.

Большинство случаев заболевания начинается с симптомов, напоминающих простудное заболевание - потеря аппетита, общая слабость, тошнота, рвота, повышение температуры. Впрочем, эти симптомы обычно не останавливают больных, они продолжают работать и не обращаются к врачам.

Первым симптомом, настораживающим пациентов, является потемнение мочи, что является одним из признаков желтухи. Цвет мочи меняется с обычного, соломенно-желтого до цвета темного пива. Другим признаком желтухи, который первыми замечают уже близкие больного, является пожелтение склер (белков глаз). Третьим классическим признаком желтухи является обесцвечивание кала.

Однако вирусный гепатит А может протекать и без желтухи, когда единственными признаками протекающей инфекции могут быть тошнота, потеря аппетита и, возможно, боли в животе. Частота желтушных форм увеличивается с возрастом, желтуха редко встречается у детей до 5 лет и является практически обязательным спутником гепатита А у взрослых.

Наиболее тяжелыми клиническими формами вирусного гепатита А являются холестатическая (дословно "застой желчи") и фульминантная (молниеносная). При первой доминирующими симптомами становятся выраженная желтуха, значительное увеличение печени и сильный кожный зуд, причиной которого является раздражение нервных рецепторов кожи компонентами желчи. Застой желчи при такой форме вирусного гепатита А вызван значительным воспалением стенок желчных протоков и печени в целом. Несмотря на более тяжелое течение, прогноз при холестатической форме гепатита А остается благоприятным. Этого нельзя сказать о фульминатной, молниеносной форме гепатита А, к счастью довольно редкой среди детей и молодых взрослых (частота составляет доли процента), но нередкой у пожилых пациентов (несколько процентов случаев). Смерть наступает в течение нескольких дней, вследствие острой печеночной недостаточности.

Летальность от гепатита А колеблется в пределах от 1% до 30%, при этом обнаруживается явное нарастание летальности с возрастом, что связано с увеличением вероятности наслоения инфекции на хроническое заболевание печени. Значительная часть летальных исходов регистрируется у пациентов, являющихся хроническими носителями вируса гепатита В.

Страны с умеренной эндемичностью характеризуются особым типом распределения заболеваемости. В сельской местности встреча с вирусом гепатита А происходит в детстве, иммунитет приобретается в более молодом возрасте. В городах, где легче соблдать гигиенические требования, человек дольше остается восприимчивым, что, как ни парадоксально, приводит к большей частоте желтушных, а иногда и тяжелых форм гепатита А у горожан. Таким образом, жители городов, выезжающие в сельскую местность также являются группой риска.

Другими группами риска являются:

§ лица выезжающие в командировки и на отдых в неблагополучные по гепатиту А регионы, в том числе военные

§ работники канализационных служб и водоснабжения,

§ работники предприятий торговли и питания,

§ группы риска по осложнениям и смертности вследствие гепатита А: носители вируса гепатитов В и С, пациенты с хроническими заболеваниями печени.

Маркеры гепатита А

 

ВИРУС ГЕПАТИТА В (HBV)

Впервые частицы вируса гепатита В были обнаружены Д. Дейном в 1970 г. и впоследствии названы частицами Дейна.

 

Структура и химический состав. Вирионы, или частицы Дейна, имеют сферическую форму диаметром 42 нм. Сердцевина вириона — нуклеокапсид в форме икосаэдра — состоит из 180 капсомеров. Снаружи он окружен липосодержащей внешней оболочкой. В состав вириона входят ДНК, белки, ферменты, липиды и углеводы.

 

 

Строение вируса гепатита В

 

 

Репродуктивный цикл HBV

Патогенез заболевания человека и иммунитет. Поскольку входными воротами инфекции при гепатите В являются кровеносные сосуды, вирус сразу же попадает в кровь, с которой разносится по всему организму, фиксируясь прежде всего на гепатоцитах. Однако репродукция вируса не сопровождается цитолизом данных клеток. Это свидетельствует о том, что вирус гепатита В не обладает прямым цитопатическим действием, а патологический процесс в печени возникает не с момента внедрения возбудителя в гепатоциты, а только после распознавания иммуноцитами его антигенов на наружной мембране этих клеток. Таким образом, поражение клеток печени при гепатите В является иммунообусловленным.

Многообразие патогенетических форм данного заболевания (острые, подострые, хронические или персистирующие) определяется антигенами возбудителя и характером его взаимодействия с гепатоцитами, в результате которого развивается продуктивная или интегративная инфекция, с одной стороны, формой иммунного ответа и выраженностью иммунопатологических процессов — с другой.

При острых формах гепатита В подавляется активность Т-хелперов, при хронических — в процесс вовлекаются Т-супрессоры. При стабильном подавлении клонов Т-супрессоров формируются условия для развития аутоиммунных реакций, направленных против собственных клеточных антигенов и прежде всего печеночного липопротеина. При ингибировании Т-хелперов нарушается распознавание вирусных антигенов, что в конечном итоге приводит к подавлению антителообразования.

В то же время HBV наряду с гепатоцитами может взаимодействовать с макрофагами и даже встраивать свою ДНК в их клеточный геном. При -нормальном развитии иммунного ответа представленные на мембране макрофагов вирусные антигены индуцируют гуморальный ответ, который заканчивается синтезом HBs-, HBc- НВе-антител. Это приводит к формированию напряженного гуморального иммунитета, вследствие чего повторные заболевания встречаются редко.

При поражении HBV макрофагов так же, как и Т-хелперов, возникают дефекты в системе распознавания антигенов, что сопровождается развитием иммунодефицитных состояний, являющихся основной причиной персистирующих форм гепатита В.

 

Интеграция вирусной ДНК в геном гепатоцитов происходит как при острой, так и хронической формах гепатита. При этом она носит случайный характер, так как в каждом случае в хромосому гепатоцитов встраивается неопределенный участок вирусной ДНК- При этом интегрированная вирусная ДНК может оказаться дефектной, что делает невозможным экспрессию ее генов, в том числе и тех, которые контролируют образование антигенов. При интеграции полноценной вирусной ДНК синтезируются вирусные антигены, из которых HBs поступают в кровь. При этом реакции иммунного цитолиза не происходит вследствие отсутствия «мишени» на мембране гепатоцитов для Т-киллеров и NK-клеток. Упомянутые клетки атакуют лишь гепатоциты, несущие НВс-антиген: чем больше данного антигена представлено на их мембране, тем интенсивнее они разрушаются в результате иммунного цитолиза. При этом происходит массовый выход вирусов из разрушенных клеток и генерализация инфекции.

 

 

Лабораторная диагностика.

Вирус гепатита В (HBV) ранее относился к неклас­сифицированным вирусам. Однако недавно были выде­лены три сходных с ним вируса, поражающие животных, и все четыре вируса были отнесены к новому семейст­ву Hepadnaviridae, вирус гепатита В выделен как тип 1.

Вирус содержит три антигена — поверхностный HBsAg и два внутренних: HB_cAg (сердцевинный) и HB_eAg, обладающий свойствами ДНК-полимеразы. В организме больных к каждому из антигенов в раз­личные стадии болезни образуются антитела анти-HBs, анти-НВс и анти-НВе.

Экспресс-диагностика. При остром вирусном гепати­те HBsAg обычно появляется в сыворотке крови боль­ного в инкубационном периоде, за 2—8 недель до био­химических изменений и повышения активности ами-нотрансфераз. Следует отметить, что HB_sAg удается определить лишь у 50—80 % больных, поэтому отрица­тельный результат не исключает возможности вирусного гепатита В.

Существуют различные методы выявления HB_sAg в сыворотке крови. Наиболее простым, обладающим высокой специфичностью, но и менее чувствительным, чем другие методы (РЭМА, РИА и РОНГА), является РПГ. Применяют также встречный иммуноэлектрофорез (ВИЭФ). Для повышения чувствительности этих реак­ций рекомендуется концентрировать сыворотки с по­мощью высушивания в термостате при температуре 37 °С и последующего разведения в меньшем объеме дистил­лированной воды.

Из высокочувствительных методов широкое распро­странение для экспресс-диагностики гепатита В полу­чили РИМ и РОНГА.

Серологическое исследование. Для выявления анти­тел к антигенам HBV применяются РПГ, встречный им­муноэлектрофорез. Наиболее чувствительными и специ­фичными являются РИА, РЭМА, а также РИГА с использованием эритроцитов, нагруженных HBsAg.

Определение антигенов HBV и антител к ним имеет важное значение не только для диагностики вирусного гепатита В, но и для прогнозирования его исходов, так как в разных стадиях болезни обнаруживаются различ­ные маркеры HBV. Для инкубационного периода харак­терно наличие в крови HB_sAg, который сохраняется в течение 2—5 месяцев, а при хроническом течении — значительно дольше. В остром периоде болезни появ­ляются HB_cAg и HB_eAg, последний циркулирует в сы­воротке крови в течение 1—7 недель, причем наличие его в течение 3 недель от начала болезни прогностиче­ски неблагоприятно. Стадия ранней реконвалесценции характеризуется исчезновением из сыворотки крови HBcAg и HB_eAg и появлением в ней анти-НВ_с (в возра­стающих титрах), могут появиться анти-НВ_е. В стадии поздней реконвалесценции в сыворотке крови обнару­живаются антитела ко всем трем антигенам HBV.

Хронический агрессивный гепатит В характеризу­ется циркуляцией в крови HB_sAg и HB_eAg, высокими титрами анти-НВ_с IgM (это свидетельствует о продол­жающейся репликации вируса).

При носительстве HB_sAg помимо этого антигена в сыворотке выявляются антитела (анти-НВ_с, анти-НВ_е IgM и анти-НВ_с IgG в низких титрах, редко — анти-HBs).

При данной форме гепатита нередко выявляется, по­мимо частиц Дейна, еще один вид вирусных частиц — дельта-частицы (или дельта-антиген). Характерной осо­бенностью дельта-частиц является зависимость их репро­дукции от репродукции частиц Дейна. Это мелкие РНК-содержащие вирусы, поверхностный (капсидный) белок которых представлен HB_sAg.

Серологическая диагностика основана на выявлении вирусных антигенов и антител к ним иммуноферментным или радиоиммунным методом. Основное диагностическое значение имеет определение в сыворотке больных HBs-антигена, который появляется в инкубационном периоде и исчезает при благоприятном течении острого гепатита через 6—8 мес после начала заболевания. Однако при переходе заболевания в хроническую форму и при вирусоносительстве данный антиген циркулирует в крови длительное время. Показателем острой инфекции является одновременное обнаружение в крови HBs- и НВс-антигенов.

Динамика синтеза антител против различных антигенов неодинакова: в продромальный период появляются НВс-антитела, затем — НВе-антитела и лишь в последнюю очередь после исчезновения HBs-антигенов из крови — HBs-антитела. По наличию антител к тем или иным антигенам вируса можно судить о периоде заболевания. Для постановки диагноза острого гепатита В важное значение имеет обнаружение антител класса IgM против НВс-антигенов.

 

 

Маркеры гепатита В

Вирус гепатита Д

Дельта-вирус — возбудитель гепатита, впервые был обнаружен в 1977 г. в ядрах гепатоцитов у больных хроническим гепатитом В. Частица вируса имеет сферическую форму диаметром около 36 нм. Ее сердцевина содержит РНК и внутренний белок (D-антиген), представляющий собой единственный вирус-специфический продукт генома дельта-вируса. Внешняя оболочка последнего содержит HBs-антиген.

 

 

Вирус гепатита Д

Геном дельта-вируса представлен однонитевой молекулой РНК с молекулярной массой 5- 105 мД. Необычайно малым геномом этого вируса можно объяснить его дефектность, проявляющуюся в неспособности к самостоятельной репликации в гепатоцитах хозяина. Для репродукции данного вируса необходимо участие вируса-«помощника», роль которого играет вирус гепатита В (HBV). Облигатная связь обоих вирусов определяет возможность возникновения инфекции, которая проявляется либо при одновременном заражении этими вирусами, либо при суперинфицировании дельта-вирусом больного гепатитом В.

Механизм повреждающего действия дельта-вируса на гепатоциты не изучен. По-видимому, он обладает прямым цитопатическим действием в отличие от HBV. При этом сочетанное действие обоих вирусов приводит к развитию более тяжелых форм патологического процесса.

Эпидемиология гепатита, вызываемого дельта-вирусом, практически не отличается от эпидемиологии гепатита В. Дельта-вирус так же, как HBV передается парентеральным путем.

Серологическая диагностика дельта-инфекции основывается на выявлении антител к антигену вируса в сыворотке крови иммуноферментным или радиоиммунным методами.

Специфическая профилактика не разработана.

 

 

Вирус гепатита С

Возбудитель гепатита С по ряду биохимических свойств имеет некоторое сходство с флавивирусами. Размер вирусной частицы менее 80 нм. Генетический материал представлен РНК- Вирус гепатита С так же, как и HBV, передается парентеральным путем. Серодиагностика основывается на выявлении антител в сыворотке крови. О распространенности вирусного гепатита С свидетельствует обнаружение специфических антител в крови здоровых доноров в 6,5—1 % случаев.

 

 

Вирус гепатита С

(Lipid envelope –липидный суперкапсид; Capsid protein – белок капсида; Nucleic acid –нуклеиновая кислота;

Envelope Glycoprotein E1 – Е1 гликопротеин суперкапсида; Envelope Glycoprotein E2 – Е2 гликопротеин суперкапсида;

Вирус гепатита С (HCV) относится к семейству Flaviviridae, роду Hepacivirus; имеет суперкапсид, форма сферическая, диаметр 55—65 нм. Геном представлен однонитевой нефрагментированной РНК позитивной полярности длиной 9500—10 000 нук-леотидов. Образующийся при репликации вируса полипротеиновый предшествен­ник разрезается клеточной и вирусной протеазами на белки: С (нуклеопротеин), 2 белка оболочки и 6 неструктурных белков, необходимых для регуляции репродук­ции вируса. Вирус отличается высокой изменчивостью всех генов. Известно до 14 геновариантов и более 50 их подтипов. Геновариант вируса определяет течение инфек­ции, переход ее в хроническую форму и в последующем — развитие цирроза и кар­циномы печени. Наиболее опасны геноварианты 1Ь и 4а. В России циркулируютгенотипы lb, 2а, 2b и За. Вирус гепатита С распространен повсеместно. По данным ВОЗ, около 1 % населения планеты инфицировано HCV.

Источником инфекции является только человек. Вирус у больных и носителей обнаруживается в 100 % случаев в крови (2/3 всех посттрансфузионных гепатитоввызывает HCV), в 50 % - в слюне, в 25 % - в сперме, в 5 % - в моче. Это опреде­ляет пути заражения.

Клиническое течение гепатита С легче, чем гепатита В. Вирус С называют «мяг­ким убийцей». Желтуха наблюдается в 25 % случаев; до 70 % случаев заболеванияпротекают в скрытой форме. Независимо от тяжести течения в 50—80 % случаев ге­патит С принимает хроническую форму, а у таких больных в 20 % случаев впослед­ствии развиваются цирроз, карцинома. В опытах на мышах установлено, что вирус гепатита С помимо гепатоцитов может поражать и нервные клетки, вызывая тяже­лейшие последствия.

Вирус в культуре клеток размножается плохо, поэтому диагностика его затрудне­на. Это один из немногих вирусов, для которых определение РНК — единственныйспособ идентификации. Возможно определение РНК вируса с помощью ЦПР в вари­анте с обратной транскрипцией, методом ИФА антител к вирусу с использованиемрекомбинантных белков и синтетических пептидов.

Интерферон, продукция которого при хронических гепатитах нарушена, и индуктор его эндогенного синтеза амиксин — основные патогенетические средствалечения всех вирусных гепатитов.

ВИРУС ГЕПАТИТА Е

Вирус гепатита Е (HEV) имеет сферическую форму, диаметр 27—34 нм, тип симметрии нуклеокапсида икосаэдрический, наружной оболочки нет. Геном пред­ставлен одноцепочечной нефрагментированной позитивной РНК из 7500 основа­ний, содержит три открытые рамки считывания, кодирующие вирусспецифичес-кие белки. На поверхности вириона имеются вдавления, напоминающие чаши (греч. calyx), поэтому первоначально вирус был включен в семейство Caliciviridae (род Hepavirus). Более подробное изучение генома HEV показало, что нуклеотидная последовательность его РНК уникальна и имеет лишь некоторое сходство с вирусом краснухи. HEV имеет и ряд других существенных отличий от калицивирусов. Поэтому в 1998 г. было решено исключить его из семейства Caliciviridae и отнести его к неклассифицированным вирусам. Возможно, что это самостоятель­ный вид отдельного семейства.

Источник инфекции — только человек, возбудитель выделяется с испражнения­ми. Механизм заражения — фекально-оральный. Основной путь заражения — череззагрязненную испражнениями воду. Заражающая доза по сравнению с вирусом гепа­тита А существенно выше. Восприимчивость к вирусу HEV всеобщая. Эпидемии мо­гут охватить десятки тысяч людей при нарушении питьевого режима, особенно во время сезонных работ летом и осенью. Доведено, что он может передаваться во время бытового общения людей.

Клинически болезнь протекает легче, чем гепатит А, перехода в хроническую форму не отмечено. У 85—90 % больных гепатит Е протекает в легкой или средней тяжести форме, часто бессимптомно. Однако у беременных женщин гепатит Е про­текает тяжело — с летальностью до 20 %.

Для диагностики используют метод иммунной электронной микроскопии; предложена тест-система для обнаружения антител к антигенам HEV. Постинфек­ционный иммунитет прочный, пожизненный, обусловлен вируснейтрализующими антителами и клетками иммунной памяти. Для специфической профилактикипредложена цельновирионная вакцина и разрабатываются живые и рекомбинантные вакцины.

 

 

Вирус гепатита Е

u Эпидемиологическая особенность этого вируса заключается в том, что он будет поражать по большей части людей молодого и среднего возраста, тогда как HАV - детей до 14 лет. Эпидемический гепатит Е наблюдается в тех регионах земного шара, где большинство жителей инфицируется ВГА еще в первые годы жизни. Клиническая особенность ГЕ - тяжелое течение болезни с высокой летальностью (20-40 %) среди беременных женщин, особенно в последнем триместре беременности. Характерным признаком болезни в отличие от других гепатитов является холестаз.

u HEV распространяется от человека к человеку при контакте с меньшей достоверностью, чем гепатит А. Для предупреждения вспышек гепатита Е, как правило, достаточно проводить соответствующую обработку нечистот и воды.

 

Вирус гепатита G – HGV

• Семейство Flaviviridae род Hepacivirus

• Форма сферическая,

• диаметр – 40-50 нм, + РНК

• Тип симметрии - икосаэдрический

• Суперкапсид, покрытый шипиками.

• Вирус не культивируется на культурах клеток, в организме лабораторных животных. Шимпанзе не восприимчивы к HGV

 

Вирус гепатита G (HGV) открыт в 1995 г., относится к семейству Flaviviridae (род Hepacivirus). Геном вируса G — одноцепочечная нефрагментированная позитивнаяРНК длиной -9500 оснований. Структурная организация генома вируса G подобна таковой HVC. Геном содержит одну большую рамку считывания, которая кодируетполипротеин-предшественник, содержащий около 2800 аминокислотных остатков. Он разрезается клеточной и вирусной протеазами с образованием двух структурных и не менее пяти неструктурных белков. Гены, кодирующие структурные белки (cor и env), прилегают к 5'-концу вирусной РНК, а гены неструктурных белков (хеликазы,протеазы, полимеразы) — к 3 -концу. Установлено, что неструктурные гены HGV сходны с генами вируса гепатита С, а также вирусов GBV-A и GBV-B. Все эти вирусы выделены в один род Hepacivirus семейства Flaviviridae. По строению структурных ге­нов HGV не имеют ничего общего с GBV-A и HCV и лишь отдаленно напоминаютGBV-B. Вирус гепатита G оказался идентичным вирусу GBV-C, выделенному также при изучении субпопуляции вирусов GBV от обезьян тамаринов, через которых пас­сировали РНК-вирус от больного острым гепатитом неустановленной этиологии, имевшего инициалы GB; в честь него все эти вирусы и получили название вирусовгепатита GBV-A, GBV-B, GBV-C. Вирус HGV (GB-C) имеет дефектный сог-белок и обладает менее выраженной изменчивостью, чем HCV. Выделено 3 типа и 5 субти­пов генома HGV. Доминирует генотип 2а, в том числе и на территории России, Ка­захстана и Киргизии. Маркеры вируса G обнаружены у 2 % населения этих стран. Вирус Gобнаруживается в разных странах мира у 1—2 % доноров крови, т. е. ча­ще, чем вирус гепатита С. Подобно гепатоцитным вирусам HBV/HCV этот вирус способен к персистенции, но реже ведет к хронической патологии, и протекает эта персистенция, вероятно, по типу здорового носительства. Острые клинические проявления гепатита G также менее тяжелы, чем при гепатитах В и С. Для диагно­стики гепатита G используют ЦПР и ИФМ.