Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Бактериологическое исследование различных объектов.
Универсальным инструментом для производства посевов является бактериальная петля. Кроме неё, для посева уколом применяют специальную бактериальную иглу, а для посева на чашках Петри — металлические или стеклянные шпатели. Для посевов жидких материалов наряду с петлей используют пастеровские и градуированные пипетки. Выращивание м/о-мов на питательных средах называется культивироаванием(лат. cultivire — выращивание); развившиеся м/о - культурой. При развитии в жидкой среде культуры образуют суспензии, осадок или пленку; при развитии а плотной среде - колонии. Культуры могут быть чистыми (содержат потомство клеток одноговида м/о). Внесение клеток микроорганизмов или какого-либо исследуемого материала (образца почвы, пробы воды) в стерильную питательную среду для получения чистой или накопительной культуры называется посевом. Перенесение уже выращенных клеток из одной среды в другую (стерильную) называется пересевом,или пассированием. Обычно микроорганизмы выращивают при определенной температуре в термостатах или термостатных комнатах. Культивирование при заданной температуре называется инкубацией, или инкубирование (лат. incubabion -выращивание при искусственно созданной температуре).Приготовление почненной суспензии для посева и техника посева Перед проведением микробиологического анализа влажную или сухую хорошо перемешанную почву высыпают на стерильное стекло; стекло стерилизуют спиртом и обжигают над пламенем горелки. Почву тщательно перемешивают шпателем, раскладывают ровным слоем, удаляют корешки и другие посторонние включения и тщательно отбирают средний образец, для чего почву берут шпателем из разных мест. Берут две навески почвы по 10г (для микробиологического анализа и для определения влажности). Навеску почвы, предназначенную для микробиологического анализа, переносят в ступку (стерильную), увлажняют её предварительно простерилизованным физиологическим раствором а растирают пестиком 5 мин. Затем количественно переносят навеску в чистую стерильную колбу вместе с физиологическим раствором. Все операции выполняют в боксе, вблизи от пламени спиртовки. Затем пробку обжигают в пламени спиртовки и закрывают колбу. Колбу с суспензией круговыми движениями взбалтывают в течение 10 мин, рукой или на качалке, которая дает более стандартное встряхивание. Необходимо следить, чтобы при взбалтывании не намокла ватная пробка.
После этого дают суспензии отстояться в течение 30 секунд, чтобы осели крупные минеральные частицы, которые в дальнейшем будут затруднять поступлении есуспензии в пипетки, и приготовляют разведение почвенной суспензии для осуществления посева питательный агар. Разведения делают по такой схеме: посев проводится из разведений 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000, 1:100000 и т.д. в зависимости от группы учитываемых м/о-в, от типа почвы, сезона, влажности почвы. Наиболее точный подсчет получается, если на чашке развивается 50—200колоний бактерий и актиномицетов и 30—50 колоний грибов. При слишком густом или слишком разреженном посеве подсчет количества микроорганизмов будет не точным.При анализах почвы следует брать не менее 3—5 повторных образцов, и каждый из них высевается на 3—5повторных чашках для каждой из сред. Из III-го, IV-го, V-го разведения последовательно набираем стерильными пипетками суспензии. Пипетку держим в правой руке, а левой рукой осторожно приоткрываем крышку чашки Петри с застывшей средой и вносим одну каплю суспензии. Затем проводят шпатель через пламя горелки, остужают его внутреннюю сторону крышки и растирают посевной материал по всей поверхности среды. Такой способ посева называются посев газоном. После инкубации посева появляется равномерный сплошной ростм/о. «Засеянные» чашки Петри ставим в термостат при температуре 28 0С. При пересеве бактериальной культуры берут пробирку в левую руку, а правой, обхватив ватную пробку мизинцем и частью ладони, вынимают её, пронося над пламенем горелки. Удерживая другими пальцами той же руки прокаленную петлю набирают ею посевной материал, после чего закрывают пробирку пробкой, обжигая в пламени спиртовки. Затем в пробирку со скошенным агаром вносят петлю с посевным материалом, опуская её до конденсата в нижней части среды и зигзагообразным или прямым движением распределяют материал по скошенной поверхности агара. Вынув петлю, обжигают край пробирки и закрывают её пробкой. Петлю стерилизуют в пламени спиртовки в ставят в штатив. Такой метод посева называется посевом штрихом. Посев в столбик питательной среды делают бактериальной иглой, вводя
центральную толщину, — посев уколом. Посев микрофлоры воздуха проводят след.образом: чашку Петри с застывшей средой открывают и оставляют так на протяжении 30 мин. После этого маркируют и помещают в термостат при температуре 28-300С.Изучениемикрофлоры воды: пипеткой на 1 мл отбирают пробу воды, и 1 каплю вносят на застывший агар в чашке Петри, затем распределяют шпателем по всей поверхности. Для изучения нефиксированных бактерий пользуются двумя методами: раздавленной (между предметным и покровным стеклами) капли и висячей капли. Следует помнить, что препараты нефиксированных бактерий заразны. Для бактериоскопии фиксированных препаратов используют мазки. Для их приготовления каплю исследуемой жидкости распределяют по поверхности предметного стекла, а затем высушивают. Наиболее распространенным методом фиксации препарата является пронесение его через пламя газовой горелки. При посеве в жидкую среду надо следить, чтобы жидкость не выливалась и не смачивала края пробирок и пробки. Посевы и пересевы следует проводить вблизи пламени газовой горелки, пробирки не должны долго оставаться открытыми, петля или пастеровская пипетка с культурой не должна ни к чему прикасаться; перед тем как закрывать пробирку, края ее следует прожечь. Засеянные пробирки необходимо тотчас же надписать. Важнейшим этапом бактериологического исследования является идентификация — определение видовой или типовой принадлежности бактерий, полученных в виде чистой культуры. При идентификации бактерий производится изучение их физиологических и биохимических свойств, токсинообразования.
|
||||||
Последнее изменение этой страницы: 2017-01-19; просмотров: 164; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 3.15.202.4 (0.005 с.) |