Серологический метод диагностики инфекционных заболеваний

это обнаружение антител к определенному антигену в сыворотке

больного и определение их титра. Используются серологические

реакции: реакция агглютинации (РА), реакция непрямой

гемагглютинации (РНГА), реакция связывания комплемента (РСК), и др.

Существует два способа подтверждения диагноза заболевания

серологическим методом: 1 – определения наличия антител в

диагностическом титре; 2 – определение природы антител. По природе

антитела могут быть: инфекционные, прививочные,

анамнестические. Природу антител определяют при исследовании

парных сывороток. Парные сыворотки – это две сыворотки, взятые у

больного с интервалом в 5-10 дней. Титр инфекционных антител в

парных сыворотках возрастает в 4 раза и более, что подтверждает

клинический диагноз заболевания. Титр анамнестических и

прививочных антител в парных сыворотках не меняется или меняется

незначительно. Для обнаружения антител необходимы известные

антигены. Диагностические препараты, содержащие антитела и

используемые для серологической диагностики, называются

диагностикумы. Диагностикумы могут содержать взвесь убитых

микробов, отдельные антигены микробов, эритроциты с нагруженным на их поверхность антигеном (эритроцитарные диагностикумы).

Собственно иммунный метод диагностики. Цель метода – индикация и

идентификация антигенов возбудителя в исследуемом материале.

Используются РП, РИФ, ИФА, РСК. Собственно иммунный метод – это

экспресс-диагностика, результат исследования получается в течение

нескольких часов или одних суток.

ВОПРОС 23

Агглютинация — это склеивание и выпадение в осадок микроорганизмов или других клеток (корпускулярных антигенов) под действием специфических антител в присутствии электролитов.

РА применяется для серологической диагностики инфекционных заболеваний (реакция Видаля — при брюшном тифе и паратифах, р. Вейгеля — при эпидемическом сыпном тифе, р. Райта — при бруцеллезе и др.) и для серологической идентификации микробов.
В РА участвуют 3 ингредиента:
1) корпускулярный АГ (агглютиноген);
2) антитело (агглютинин);
3) изотопический раствор хлорида натрия (электролит).

Антигены — взвесь живых и убитых микроорганизмов.
Идентификацию вида (серотила) микроба, выделенного от больного или внешней среды, определяют по известному антителу (диагностической иммунной сыворотки). Положительный результат реакции укажет на то, что неизвестный микроб идентичен тому, который был взят в качестве антигена для приготовления иммунной диагностической сыворотки.

Агглютинирующая диагностическая иммунная сыворотка готовится в производственных условиях путем иммунизации кроликов (реже лошадей) соответствующими антигенами (взвесью живых или убитых микроорганизмов, эритроцитов и т.д.).

Полученную иммунную сыворотку, определив его титр, разливают по ампулам с добавлением консерванта. Иногда употребляют высушенную сыворотку.

 

Существует два основных метода постановки РА:
1) ориентировочная РА на предметном стекле, наступающая в течение нескольких минут. Применяется только с целью идентификации вида (серотипа) выделенной из организма больного чистой культуры по его специфичности как АГ к серотипу АТ;
2) развернутая РА в пробирках, которая учитывается через 2 часа выдерживания при 37 «С и на следующий день стояния при комнатной температуре. Применяется с целью идентификации микроба и обнаружения АТ в сыворотке крови.

РА входит в группу методов, в которых реакция протекает в две фазы:
1) соединение АГ с АТ (специфическая фаза)
2) выпадение образовавшегося комплекса АГ-АТ (агглю-тината) в растворе солей (электролите) в осадок (неспецифическая фаза).

Достоинства РА: простота постановки и экспрессность.
Недостатки: уступает по специфичности и чувствительности.

ВОПРОС 25

Таким образом, реакцией лизиса называется серологический тест, основанный на

растворении цельноклеточного АГ, соединенного с АТ, в присутствии комплемента.

б а к т е р и о л и з а — растворения бактерий и гемолиза.

Бактериолиз. Реакция бактериолиза состоит в том, что при соединении иммунной

сыворотки с соответствующими живыми бактериями в присутствии комплемента происходит

лизис микробов.

Реакция бактериолиза наблюдается как в организме иммунного животного, так и в

пробирке. Под воздействием антител — бактериолизинов микробы теряют подвижность,

меняют форму (набухают), затем распадаются как бы на отдельные зернышки и, наконец,

совсем растворяются.

Комплемент проявляет литическое действие только в присутствии иммунного

комплекса «клетка + лизин». Большинство микроорганизмов

малочувствительны к литическому действию комплемента. Поэтому

реакция лизиса не нашла широкого применения в лабораторной практике.

В практике реакцией бактериолиза пользуются для: 1) определения вида неизвестного

микроба при помощи специфической бактериолитической сыворотки; 2) определения в

исследуемой сыворотке наличия бактериолизинов к заранее известному микробу. Реакция

бактериолиза воспроизводится в пробирке (in vitro) и в организме животного (in vivo).

Реакция гемолиза является разновидностью реакции лизиса. В качестве антигена в этой

реакции применяют эритроциты, которые лизируются гемолизинами в присутствии комплемента.

Гемолизины появляются в организме при искусственной иммунизации чужеродными

эритроцитами. Иммунная сыворотка, содержащая гемолизины, носит название гемолитической

сыворотки. Реакция гемолиза состоит в том, что при воздействии гемолитической сыворотки

на соответствующие эритроциты в присутствии комплемента происходит их растворение

(гемолиз), причем мутная взвесь эритроцитов превращается в ярко-красную прозрачную

жидкость — так называемую лаковую кровь. Действие иммунной гемолитической сыворотки

строго специфично — она вызывает гемолиз только тех эритроцитов, которые были взяты для

иммунизации. Реакция гемолиза благодаря своей демонстративности получила широкое

применение в лабораторной практике: ею пользуются в качестве показателя адсорбции

комплемента при диагностических реакциях,

Обычно для реакции гемолиза принято пользоваться в качестве антигена бараньими

эритроцитами и, следовательно, гемолитической сывороткой, полученной при иммунизации

животного (кролика) теми же эритроцитами.

П о с т а н о в к а р е а к ц и и.

Для постановки реакции гемолиза необходимо иметь:

1) антиген: отмытые эритроциты барана в

2) иммунную гемолитическую сыворотку, содержащую гемолизины к бараньим

эритроцитам;

3) комплемент — свежую сыворотку морской свинки в разведении 1:10;

4) физиологический раствор (ИХН)

Титром гемолитической сыворотки называют ее максимальное разведение, которое в

присутствии комплемента при температуре 37° С вызывает полный гемолиз эритроцитов барана на протяжении 1 ч.

ВОПРОС 26