Элюотропные ряды органических растворителей

Растворитель	ε^о (Al2O3)	n D^20	Граница пропускания УФ-света, нм	Температура кипения, °С
н -Пентан	0,00	1,358		36,0
н -Гептан	0,01	1,388		98,4
Циклогексан	0,04	1,427		81,0
Четыреххлористый углерод	0,18	1,466		76,7
Толуол	0,29	1,496		110,6
Бензол	0,32	1,501		80,1
Диэтиловый эфир	0,38	1,353		34,6
Хлороформ	0,40	1,443		61,2
Хлористый метилен	0,42	1,424		41,0
Тетрагидрофуран	0,45	1,408		65,0
Метилэтилкетон	0,51	1,381		79,6
Ацетон	0,56	1,359		56,2
Диоксан	0,56	1,422		104,0
Этилацетат	0,58	1,370		77,1
Диметилсульфоксид	0,62	1,478		190,0
Ацетонитрил	0,65	1,344		80,1
Изопропиловый спирт	0,82	1,380		82,4
Этиловый спирт	0,88	1,361		78,5
Метиловый спирт	0,95	1,329		65,0
Этиленгликоль	1,11	1,427		198,0
Уксусная кислота	Большая	1,372		118,5

 

На слой адсорбента вблизи основания пластинки тонким капилляром наносят капли образцов (2−10 мкл) в виде 0,1−1,0%-ных растворов анализируемых веществ в летучих растворителях. Линию старта отмечают на пластинке тонкозаточенным карандашом, не повреждая слой адсорбента, на расстоянии 1,5−2,0 см от основания пластинки. Расстояние между точками нанесения должно быть не менее 1−2 см. Диаметр пятна не должен превышать 3 мм. Растворы наносят в виде круглых пятен или коротких узких полосок, осторожно прикасаясь капилляром к поверхности пластинки, и дают раствору впитаться в слой адсорбента.

Пластинку основанием вниз помещают в наклонном положении в герметически закрывающуюся стеклянную камеру, на дне которой находится элюент высотой 5−7 мм. Линия старта с нанесенными образцами должна находиться несколько выше уровня элюента в камере. Камеру закрывают стеклянной крышкой для лучшего насыщения ее парами элюента.

Элюент под действием капиллярных сил передвигается по слою адсорбента снизу вверх, увлекая за собой компоненты анализируемой смеси. В результате многократного повторения актов адсорбции и десорбции компоненты смеси в соответствии со своими коэффициентами распределения передвигаются с различной скоростью по мере подъема элюента и распределяются по дискретным зонам, образуя пятна. Как только растворитель дойдет до линии фронта, отстоящей от верхнего края пластинки на ~5 мм, пластинку вынимают из камеры, отмечают карандашом линию фронта и высушивают на воздухе до полного испарения подвижной фазы.

Затем проводят проявление хроматограмм с использованием методов, позволяющих сделать бесцветные пятна разделенных веществ видимыми. Дискретные зоны веществ обнаруживают при рассмотрении хроматограммы в УФ-свете с длиной волны 254 нм (при использовании для элюирования адсорбента с флюорогеном – неорганическим флуоресцентным индикатором), а также после обработки хроматограммы парами йода или после ее опрыскивания растворами реагентов, дающих цветное окрашивание с компонентами смеси. При полном разделении каждое пятно на пластинке соответствует индивидуальному веществу.

Положение пятна разделенного вещества определяют посредством измерения величины его подвижности R_f (rate – скорость; fraction – фракция):

, (5.1)

где R_f – подвижность вещества; А – расстояние, пройденное веществом от линии старта до середины пятна, см; В – расстояние, пройденное подвижной фазой от линии старта до линии фронта, см.

Величина А не может быть больше величины В, поэтому значения R_f лежат в пределах от 0 до 1. Величина R_f для каждого индивидуального вещества в данных условиях хроматографирования (подвижная и неподвижная фазы, температура) – величина постоянная. Качественный анализ компонентов смеси проводят на основании сравнения значений подвижности R_f анализируемых веществ с табличными данными или со значениями R_f, полученными для стандартных веществ («свидетелей») при хроматографировании их вместе с исследуемыми образцами. Стандартные вещества наносят на линию старта пластинки отдельными пятнами по обе стороны от ряда пятен исследуемых веществ. Последний метод является единственным надежным методом качественного анализа соединений, позволяющим избежать влияния различных факторов на значения R_f.

ТСХ - анализ липидов. Используют готовые хроматографические пластинки Silufol. Для изучения влияния полярности элюента на R_f индивидуальных липидов в качестве подвижной фазы применяют смеси изопропилового спирта и гексана в различных соотношениях. Проявление хроматограмм осуществляют, обрабатывая их парами йода.

 

Лабораторная работа