Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии

СПбГАВМ

Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии

Учебно-методическое пособие

К лабораторно-практическим занятиям

По ветеринарной микробиологии

Схемы лабораторной диагностики

Бактериальных болезней

ПАТОГЕННЫЕ СТАФИЛОКОККИ

Патогенные стафилококки вызывают гнойно-воспалительные процессы различной локализации: местные – фурункулы, абсцессы, экземы и др.; в отдельных органах – ангины, отиты, маститы, эндометриты, циститы, пневмонии и др.; общее поражение – пиемию и септицемию. При накоплении в пищевых продуктах - пищевые токсикозы. Восприимчивы все виды животных, а также человек.

КЛАССИФИКАЦИЯ: сем. Micrococcaceae род: Staphylococcus - 25 видов

· S.aureus - наиболее патогенный, чаще других явл. возбудителем.

· S.epidermidis – условно патогенный;

· S.saprophyticus – гнилостный mi, очень редко вызыв. болезни.

Патогенез и факторы вирулентности:

Микроорганизм проникает в организм через поврежденную кожу и слизистые оболочки; энтеротоксины – с пищевыми продуктами (мясо, молоко и др.); стафилококки образуют и выделяют экзотоксины: гематоксин, лейкоцидин, энтеротоксин, некротоксин; ферменты вирулентности: коагулазу, фибринолизин, гиалуронидазу, ДНК-азу, лецитиназу.

Методы диагностики

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД:

Материал для исследования: раневой экссудат, гной абсцессов, ран, молоко при маститах, выделения из половых органов при эндометритах, кровь при септицемии;

Микроскопия: метод окраски - простой метод и по Граму; микрокартина: шаровидные клетки располагаются беспорядочно и в виде скоплений. напоминающих «виноградные грозди»,Гр+; спор не образуют; капсулу не образуют, неподвижны.

Культивирование: посев на простые питательные среды: МПА, МПБ; на кровяной МПА. Стафилококки – факультативные анаэробы; оптимальная t 37⁰C; срок культивирования 18-20 часов. галофилы (солевыносливые), могут расти на МПА 10% NaCl. Элективные среды – желточно-солевой агар Чистовича, молочно-солевой агар Петрович с 6,5% NaCl.

Культуральные свойства: На МПА – колонии округлые,выпуклые, блестящие, диаметром 2-5 мм, с ровным краем, могут быть окрашены в золотистый, белый, лимонно-желтый цвет за счёт каротиноидного пигмента, нерастворимого в воде. На МПБ – равномерное помутнение, выпадение рыхлого хлопьевидного осадка. На кровяном агаре патогенные штаммы стафилококков как правило образуют зону бета-гемолиза.

Биохимические свойства S.aureus: протеолитическая активность (пептонизация молока, разжижение желатины). Активная ферментация углеводов, в т.ч. ферментация маннита без газа (в анаэробных условиях); каталазная активность; лецитовителлазная реакция (образование помутнения вокруг колоний) на среде желточно-солевой агар Чистовича. ДНК–зная активность; Плазмокоагуляция (свёртывание) цитратной плазмы крови кролика.

БИОПРОБА:

1. Дермонекротическая проба. Кроликам вводят 0,2 см³ 2-х млрд.взвеси смыва агаровой культуры в кожу на боку (предварительно выбрить шерсть). Через 24 часа наблюдают образование инфильтрата и некроза, окружённый зоной воспаления.

2.Летальная проба. Кролику вводят в/в фильтрат 2-3-х сут. бульонной куль

туры стаф. 0,75 см³ на кг массы тела: происходит быстрая гибель «на игле»

3.Вирулентность для мышей. Мышам вводят суточную бульонную культу

ру стафилококка; через 5-10 сут. развивается абсцесс и происходит гибель.

4. Проба на котятах. При пищевых токсикозах у людей – (выпаивание мо

лока с энтеротоксином вызывает рвоту и энтерит

ФАГОТИПИРОВАНИЕ Имеется 22 типа фагов – вирусов, паразитирующих

на стафилококках и разрушающих их. Они используются для диагностики

СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ И АЛЛЕРГИЧЕСКИЙ МЕТОДЫ: в ветеринарии не

использ., в медицине – РДП в агаровом геле с антитоксич. сыворокой, ИФА.

БИОПРЕПАРАТЫ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ:

1. Стафилококковый антивирус - фильтрат старой бульонной культры;

2. Аутовакцина –от животного выделяют возбудителя, инактивируют его нагреванием и вводят больному.

3. Стафилококковый анатоксин: токсин обезвреживают формалином и применяют как вакцину.

4. Стафилококковый и комплексный пиобактериофаг для лечения.

СИНЕГНОЙНАЯ ПАЛОЧКА

Широко распространена в природе. Очень устойчива к дезинфектантам и антибиотикам. Поражает макроорганизм при снижении иммунитета.Вызывает септическую болезнь норок – псевдомоноз. Осложняет течение ожоговой болезни, онкологич. процессов, заживление ран. Вызывает отиты, экземы, маститы, эндометриты, пневмонии, сепсис. Может быть причиной пищевых токсикоинфекций. Одна из наиболее опасных госпитальных инфекций.

КЛАССИФИКАЦИЯ: сем. Pseudomonadaceae, род Pseudomonas,

• вид Pseudomonas aeruginоsa

Методы диагностики:

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД:

Материал для исследования: гной и экссудат из очагов поражения, моча,сперма,молоко,паренхим.органы,трубчатая кость,трупы мелк.ж.

Микроскопия: Мелкая полиморфная, Гр - палочка, располагается одиночно, беспорядочно, споры -, капсула -, очень подвижная.

Культивирование. Аэроб. Растёт при температуре от 20 до 44^оС на простых пита-тельных средах. Очень неприхотлива, растёт даже при пересеве на физраствор NaCl.

Культуральные свойства. При росте выделяет водорастворим. пигменты: сине-зелёный - пиоцианин; флуоресцирующий желтый - пиовердин; красный - пиорубин; чёрно-коричневый - пиомеланин. Выделяет запах жасмина или земляничного мыла.

На МПБ интенсивное помутнение, постепенное окрашивание среды в зеленовытый цвет. На дне слизистый осадок, при встряхивании он поднимается в виде косички. На поверхности может быть пленка.

На МПА средние и крупные, серые, плоские колонии с матовой поверхностью, неровными краями. Колонии и среда прокрашиваются в зелёный цвет,иногда с радужным отблеском.

Биохимические свойства. Синегнойная палочка обладает оксидазной активностью. Имеет протеолитическую активность (вызывает порчу пищевых продуктов). Выделяет аммиак. МПЖ – разжижает воронкой. Молоко – свертывает и пептонизирует. На кровяном агаре часто гемолиз.

Сахаролитическая активность слабая– расщепляет только глюкозу и арабинозу, поэтому относится к группе «неферментирующих» микробов.

ДИФФЕРЕНЦИРУЮЩИЕ ТЕСТЫ:

• рост при 44^оС;
• тест с хлороформом (в МПБ хлороформ растворяет пиоцианин и опускается на дно в виде голубой жидкости);
• положительный тест на окисление глюкозы при отсутствии анаэробной ферментации (О/Ф тест).

БИОПРОБА: заражение белых мышей (п/к, в дозе 0,2 мл) смывом с МПА.

СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА: РА на стекле с поли- и моновалентными сыворотками и живой культурой.

БИОПРЕПАРАТЫ: Псевдомонозная формолвакцина для норок; Диагностические сыворотки. Псевдомонозный лечебный бактериофаг, пиобактериофаг.

ПРОТЕЙ

Широко распространён в природе. Типичный гнилостный mi. Вызывает гниение органических веществ, порчу пищевых продуктов. При ослаблнии защитных сил макроорганизма может вызывать гнойно-септические процессы(у новорожденных, недоношенных, у старых животных, при онкологических процессах. Выделяется при циститах, пиелонефритах, эндометритах, энтероколитах, при запущенных раневых процессах(гниение ран). При употреблении в пищу несвежих, ипорченных пищевых продуктов может быть причиной токсикоинфекций.Является санитарно- показательным микр-мом – индикатором гнилостного загрязнения воды, почвы.

КЛАССИФИКАЦИЯ: Сем. Enterobacteriaceae, Род. Proteus, виды:

• Proteus vulgaris (протей обыкновенный)
• Proteus mirabilis (протей удивительный)

Методы диагностики:

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД:

Материал для исследования: раневой экссудат, моча, истеч. из влагалища, фекалии, содержимое кишечника, паренхиматозные органы, аборт. плод. Пищевые продукты – при исследовании на свежесть. Корма. Смывы с поверхностей.

Морфология: Полиформные (разной длины) палочки, Гр.-, располагаются в мазке беспорядочно, одиночно, иногда образуют нити. Споры -, капсула -, подвижность ++ (перитрих)- протей феноменально подвижен!!

Культивирование и культуральные свойства: Хорошо растет на простых питательных средах..На МПБ –интенсивное помутнение, хлопьевидный осадок, на поверхности пленка, запах тухлого мяса. МПА – рост ползучий, вуалеобразный, в виде тонкой, блестящей бело-серой плёнки, покрывающей всю поверхность среды. Для получения чистой культуры делают посев по Щукевичу в конденсационную жидкость на дне скошенного агара – на следующий день протей «поднимается» по скосу, образуя плёнку.

Биохимические свойства. Обладает ярко выраженными протеолитическими свойствами: Выделяет Н₂S, индол, разжижает желатину; расщепляет мочевину, пептонизирует молоко. Расщепляет аминокислоту фенилаланин, что важно для диагностики. Расщепляет многие сахара на средах Гисса, но не изменяет лактозу и маннит.

Для ограничения ползучего роста протея поверхность питательных сред обрабатывают этиловым спиртом, подсушивают, а также используют элективные среды с желчью и желчными солями (среда Плоскирева).

ДИФФЕРЕНЦИРУЮЩИЕ ТЕСТЫ:

· Посев по Щукевичу в конденсационную воду скошенного агара (ползучий рост)

· Рост на трёхсахарном агаре Олькеницкого (скос малиновый, столбик чёрный)

· Расщепление фенилаланина; зелёное окрашивание при нанесении реактива хлорида железа на агар с фенилаланином.

БИОПРОБА: Б.мышам п/кож или в/брюшинно 0,5 мл бульонной культуры–гибель.

СЕРОДИАГНОСТИКА – РСК; РА со специфическими сыворотками

БИОПРЕПАРАТЫ Диагностические сыворотки. Аг-диагностикумы для РА. Потейные лечебные бактериофаги. Пиобактериофаг.

ООИ СИБИРСКАЯ ЯЗВА

СИБИРСКАЯ ЯЗВА – АНТРАКС - о страя инфекционная болезнь животных и людей. Заражение при контакте, при ранениях, укусах насекомых, алиментарно, аэрогенно. Характеризуется признаками септицемии, интоксикации. Условно различают 3 формы с.я.: кожная – образование отёков и карбункулов (нарывов с чёрным центром), кишечная и лёгочная (в этих случаях очаги воспаления образуются в кишечнике или лёгких, быстро возникает септицемия, что ведёт к гибели.) Наиболее восприимчивы к с.язве к.р.с., м.р.с., верблюды, дикие травоядные, лошади. У свиней чаще атипичная форма в виде ангины, плотоядные малочувствит.

КЛАССИФИКАЦИЯ: семейство Bacillaceae,род Bacillus,

· вид Bacillus anthracis

Факторы вирулентности: образование капсулы и экзотоксина.

Методы диагностики:

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД.

Материал для исследования: Вскрывать трупы при подозрении на сибирскую язву запрещено: опасность распространения спорообразующего возбудителя во внешней среде!!

1.При жизни у больного животного–берут капли крови из уха в виде 10-12 толстых мазков на предм.стёклах;высушить,сложить мазками внутрь между спичек,уложить в банку,укупорить,сделать надпись«Мазок нефиксирован!»

2. От трупа – ухо, отрезанное с той стороны, на которой лежит труп; пред-варительно его туго перевязывают у основания в 2-х местах, подкладывают снизу поддон, отрезают между лигатурами, место отреза прижигают; ухо заворачивают в слегка увлажнённую дезинфектантом ткань и помещают в герметичную тару. + мазки крови из надреза уха.

3. От трупов и туш свиней – участки отёчной соединительной ткани гортани, миндалин, заглоточные и подчелюстные лимфоузлы.

4. При подозрении на с.я. в ходе вскрытия трупа – вскрытие прекращают, берут для исслед. кусочки селезёнки, печени, изменённые лимфоузлы, кровь.

Посуду с материалом помещ. во влагонепрониц. тару, опечатывают, отпр. в лабораторию с нарочным с сопроводительным документом. + звонок. В лаборатории такой материал исследуют вне очереди, любой степени свежести.

Микроскопия: Окраска по Граму, на капсулу по Ребигеру и на спору. Морфология Bacillus anthracisзависит от материала, из которого деланы мазки.

1. В мазках из крови и свежего пат.материала – крупные Гр+ палочки в виде коротких цепочек, по 2-3. Концы клеток, обращенные в цепочке друг к другу как бы «обрублены», а снаружи – закруглены. Имеется КАПСУЛА, общая для всей цепочки. Неподвижные.

2. В пат.мат. от свиней или несвежем – форма клеток часто атипичная: Гр+ палочки, толстые, изогнутые, зернистые, со вздутиями, +«тени микробов».

3. В молодой к-ре с МПА или МПБ–длинные, переплетающиеся цепочки из крупных Гр+ палочек, иногда утолщен. на концах и напомин. «бамбуковую трость».

4. В старых культурах при доступе О₂ образуются округлые эндоспоры, затем вегетативные части микробных клеток отмирают, остаются споры.

Культуральные свойства: B.anthracis – факультативный анаэроб, t оптимум 35-36^оС, неприхотливый к питательн.средам, время роста 18-24 ч.

На МПБ – среда прозрачная, на дне осадок в виде «комочка ваты».

На МПА – крупные,матовые серо-белые колонии в R-форме с локонообразным, бахромчатым краем; под малым увелич. микроскопа характеризуются как «голова Медузы»,«львиная грива». На кровяном агаре гемолиза нет.

Для выявления способности образовывать капсулы – посев на специальные кровяные среды типа среды ГКИ. На них образ. гладкие колонии в S-форме + капсула.

Биохимические свойства. Арабиноза+, ксилоза+, гидролиз желатина (рост в виде «перевёрнутой ёлочки»), лецитиназа-, уреаза+;

Тест «феномен жемчужного ожерелья» (+). Для этого - посев на пенициллиновый агар. На вырезанные кусочки такого агара, помещенные на предметные стёкла в чашках Петри, делают посев 3-х часовой испытуемой бульонной культуры. Через 1-3 часа прямо на поверхность агаровой пластинки с посевом помещают покровное стекло и препарат изучают под микроскопом.Чувствит. к пенициллину клетки B.anthracis принимают форму шара (образуя сферопласты), цепочки имеют вид «ожерелья».

Фосфатазная активность (-). Тест на фосфатазную активность: посев на среду с фенолфталеин-фосфатом (ФФФ-ага р). После получения колоний на этой среде под крышку вносят каплю нашатырного cпирта. Фосфатазаположительные колонии розовеют, а колонии B.anthracis остаются белыми.

БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД (B.anthracis вирулентна, антракоиды–нет)

Одновременно с посевом материала на пит.среды суспензию исслед. материала в физ. растворе вводят 2-м белым мышам п/к в спину(0,2-0,5 мл)или морским свинкам п/к в живот(0,5-1,0 мл),гибель через 1-3 суток от септицемии. Наблюдение за живыми до10 сут. Так же проводят заражение выделенной культурой возбудителя.

Фагодиагностика: используются фаги К-ВИЭВ, Гамма МВА. При нанесении специфического фага на зону посева культуры–отсутствие роста.

СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД:

1. Прямой МФА и ИФА для исследования материала из очага поражения.

2. РДискП с полученной чистой культурой для её идентификации.

3. РП по Асколи для исследования кож.сырья и пат.материала (ухо).

Если материал несвежий, культуру возбудителя сибирской язвы бывает выделить невозможно из-за произошедшего лизиса микроорганизмов. В этом случае также применяют РП по Асколи.

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ МЕТОД: ПЦР – обнаружение генов, кодирующих синтез токсина и капсулы.

АЛЛЕРГИЧЕСКИЙ МЕТОД: Применяется только у людей: аллерген – антраксин п/к в предплечье (как реакция Манту). У больных, переболевших и привитых – зона воспаления > 15 мм.

БИОПРЕПАРАТЫ:

1. Живая вакцина из бескапсульного эталонного штамма СТИ.

2. Живая вакцина из штамма 55.

3. Вакцина ГНКИ.

4. Ассоциированная живая жидкая вакцина против сибирской язвы и эмкара КРС.

Гипериммунная лечебно-профилактическая сыворотка и гамма-глобулин.

Диагностические биопрепараты: преципитирующая сыворотка и стандартный Аг для РП, люминесцирующие сыворотки для МФА, диагностические бактериофаги.

 

ПАСТЕРЕЛЛЁЗ

ПАСТЕРЕЛЛЕЗ (геморрагическая септицемия молодняка) – инфекционная болезнь, характер. септицемией, отёками и воспалительно-геморрагич. про-цессами (кровоизлияниями) во внутренних органах, на серозных и слизис-тых оболочках, затем омертвление тканей, гибель. Восприимч. животные: многие виды с/х и диких животных (ягнята,к.р.с,поросята,жеребята), в т.ч. птицы (холера птиц). Проявляется в 3-х формах: Отечная –воспалительные отеки п/к клетчатки, в области головы, шеи, сильно опухает язык, иногда конечности. Грудная – острая фибринозная плевропневмония, с появлением некротизированных очагов. Кишечная –диарея, животные худеют, интоксикация,гибель. Заражение:аэрогенно,алиментарно, ч/з повреждённую кожу.

КЛАССИФИКАЦИЯ

Сем:Pasteurellaceae,Род:Pasteurella,

• Вид: Pasteurella multocida (изредка–P.haemolitica)

Методы диагностики:

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД:

материал для исследований: паренхиматозные органы, кровь, головной мозг, трубчатая кость.

Микроскопия: методы окраски: по Граму и на биполярность (по Романовскому–Гимзе или Михину). Микрокартина: короткие палочки - овоиды до 1,5 мкм, расположенные одиночно; в пат. материале окраши-ваются биполярно (интенсивно по полюсам), в мазках культур – кокковид-ные палочки, расположенные одиночно или попарно;Гр-;спор не образуют; образуют капсулу ( она не имеет диагностич.значения ); неподвижны.

Культивирование: Широко применяют биологический метод получения чистой культуры (заражение надосадочной жидкостью суспензии пораженных тканей белых мышей – гибель через 18-24 ч. Посев из крови мышки на питательные среды: сывороточный и кровяной МПА и МПБ; пастереллы – факульт. анаэробы; оптим. t +37^oС; срок культив. 18-20 часов.

Культуральные свойства: колонии на плотных средах мелкие, прозрачные, «росинчатые», с ровным краем. Диссоциация: S-, R- M-формы, S-ф–радужные в косопроходящем свете.На жидких средах – лёгкое равномерное помутнение, затем просветление, на дне слизистый осадок в виде «косички»

Биохимические свойства: Пастереллы обладают умеренной сахаролитической активностью (ферментация глюкозы, сахарозы, сорбита, маннита при отсутствии ферментации лактозы); не разжижают желатин; образуют индол; гемолиз не вызывают; обладают каталазной активностью.

БИОПРОБА: заражают подкожно белых мышей и кроликов, при исследовании на пастереллёз птиц – голубей или 90-120-суточных цыплят внутримышечно Наблюдается очень быстрая гибель – в течение 18-24 ч.

БИОПРЕПАРАТЫ: Формолвакцина эмульгированная против пастереллёза КРС, полужидкая AlOH формолвакцина против пастереллёза крс и буйволов, преципитированная вакцина против пастереллёза овец и свиней, сухие живые вакцины против пастереллёза птиц из штаммов АВ и К.

ВОЗБУДИТЕЛЬ РОЖИ СВИНЕЙ

РОЖА СВИНЕЙ – инфекционная болезнь, которой болеют все виды животных, птицы, рыбы, но чаще свиньи в возрасте от 3 до 12 мес, болеет и человек. Источник возбудителя - больные животные, грызуны, загрязненные корма и вода. Течение: молниеносная, острая, подострая и хроническая формы. Молниеносная – «белая рожа»: у животных наблюдается удушье, ослабление сердечной деятельности отек легких. Гибель через сутки. Острая – возб. проникает в кровь, размножается, выделяет токсины, увеличивается порозность сосудов и развиваются эритемные пятна, часто правильной геометрической формы – при надавливании на них кожа бледнеет, (при чуме свиней – кровоизлияния, кожа не бледнеет). Поражаются легкие, бронхи и паренхим. органы. Подострая (крапивница) – легкое течение, после появления пятен самочувствие животного улучшается. Хроническая – возбудитель локализуется в суставах и на клапанах сердца.

КЛАССИФИКАЦИЯ: род Erysipelothrix

• вид Erysipelothrix rhusiopathiaе

Методы диагностики:

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД.

Материал для исследования: Кусочки паренхимат. органов, трубчатая кость, сердце, сыворотка крови.

Морфология: Тонкая, «стройная», прямая или слегка изогнутая, неподвиж-ная, Гр.+ палочка, Сп«–», К«–». В мазках из пат. материала располагается одиночно, а при хроническом течении болезни – в виде длинных переплетающихся нитей.

Культивирование: Микроаэрофил (любит присутствие 5-10 % СО₂). Хорошо растет на простых средах, но лучше с добавлением сыворотки крови. Элективная среда - агар Сент-Иваньи (0,1 % кристаллвиолета и 1 % азиданатрия).

Культурально-биохимические свойства: МПБ – слабое помутнение, на дне пылевидный осадок «муаровые волны». МПА – мелкие росинчатые прозрачные колонии S-формы, иногда с сероватым оттенком, не мутнеющие с течением времени. МПЖ – в виде тонких горизонтальных отростков (ёршик). МОЛОКО – слабо свертывает через 5 дней. Не ферментирует сахарозу, маннит и салицин, многие сахара ферментирует до кислоты, без газа. Выделяет Н₂S +. Каталаза «–». Индол «–».

БИОПРОБА. Заражают белых мышей и голубей в/мышечно по 0,1-0,2 мл. СЕРОДИАГНОСТИКА. С живой агаровой культурой ставят РА на стекле с противорожистой лечебной сывороткой (1:50) и МФА. Также используют МФА для выявления возбудителя в мазках из патматериала.

БИОПРЕПАРАТЫ: 1.Противорожистая лечебная гипериммунная сыворотка.

2. Живая вакцина из шт. (не образующего Н₂S) ВР-2.

3.Концентрированная ГОА формолвакцина (убитая)

4. Ассоциированная вакцина против рожи и чумы свиней.

5.Противорожистая люминесцирующая сыворотка для МФА.

ВОЗБУДИТЕЛЬ ЛИСТЕРИОЗА

ЛИСТЕРИОЗ - зооантропоноз. У людей - моноцитарная(увеличение кол-ва моноцитов) ангина,конъюнктивиты, может быть поражение ЦНС, сепсис; внутриутроб. заражение и гибель новорожденных детей.У овец и коз аборты, пораж. ЦНС, слепота,«вертячка»;у коров –единичные аборты и маститы.

КЛАССИФИКАЦИЯ: род Listeria

• Вид Listeria monocytogenes, (изредка Listeria iwanovii)

Методы диагностики:

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД.

Материал для исследования:

Паренх. органы, голова, трупы мелких животных, абортир. плод. Готовят суспензию на физ. р-ре 1:5 высевают на питат.среды. Остальной мозг хранят при 4^оС 10 суток, затем, при необходимости, повторяют посев).

Морфология: Короткая, толстая палочка, в мазках из пат.материала часто в виде «палисада» \\\\ или римской цифры \/, в мазках из культур – кучками. Гр+, Сп «–», К«–». Подвижны в молодой культуре при 20^оС, неподвижны при 37^оС.

Культивирование. Психрофил,рост при t от 4^о С до 38^оС,хорошо растёт на печёночных средах с глюкозой,глицерином. Элективная среда-МПА с 0,05% теллурита калия и 2-3% глицерина

Культурально-биохимические свойства.МПБ –слабое помутнение,осадок-косичка. Н₂S–. МПА–мелкие росинчатые, голубоватые колонии,со временем серо-белого цвета.На кровяных средах – зона β гемолиза. МПЖ«–»,Молоко–, каталаза +, салицин +

БИОПРОБА. 1. Конъюнктивальная проба на м. свинках: при введении капли культуры под нижнее веко-развивается кератоконъюнктивит.2. Дерматонекротическая проба:Кроликам или м.свинкам в/к в ухо вводят бульонную к-ру – возникает очаговый некроз. 3. Проба на мышатах-сосунках – при введении п/к культуры – гибель.

СЕРОДИАГНОСТИКА. Иссл.сыворотку больных животных в РСК и РА с Аг первой и второй серогрупп. Идентификацию агаровой культуры проводят в РА на стекле с диагностич. агглютинир.сыворотками.Экспресс- МФА.

БИОПРЕПАРАТЫ. 1.Листериозные диагностические агглютинирующие сыворотки.2. Бактериофаги для лечения и диагностики L-2a, L-4a.3.Сухая живая вакцина из шт АУФ (авирулентная ослабленная УФ).4.Антибиотики.

САЛЬМОНЕЛЛЁЗ

Сальмонеллёзы – группа инфекционных болезней преимущественно молодняка с.х. животных, мелких домашних, промысловых животных, грызунов, птиц, характеризующихся при остром течении лихорадкой и профузным поносом, при хроническом – воспалением легких, плевритами, артритами. Восприимчив человек. У взрослых животных и птиц болезнь может протекать бессимптомно (сальмонеллоносительство), у беременных самок возможны аборты. У людей при употреблении продуктов, содержащих сальмонеллы, могут возникать пищевые инфекции. При оценке пищевых продуктов, в кот. обнаружены сальмонеллы, важно знать, что эти микроорганизмы довольно устойчивы к нагреванию, при 60^оС погибают в течение часа, при 80^оС – за 5-10 мин (то есть могут сохраняться, например, при изготовлении варёной колбасы)

КЛАССИФИКАЦИЯ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ: Сем. Enterobacteriaceae, Род: Salmonella; вид Salmonella enterica, включает более 2 500 серовариантов:

· S. enteritidis, S.dublin – у телят (+ возбудитель пищев. инфекции у людей)

· S. choleraesuis, S. typhisuis - у свиней.

· S. typhimurium – у водоплавающ. птицы (+ возб. пищ.инфекции у людей)

· S. abortus equi– у лошадей (аборт у кобыл).

· S. abortus ovis – у овец (аборт у овец).

· S.pullorum, S. gallinarum – пуллороз-тиф у птиц.

ПАТОГЕНЕЗ И ФАКТОРЫ ВИРУЛЕНТНОСТИ: основные пути заражения – алиментарный, аэрогенный, возможно внутриутробное и трансовариальное. Возбудители размножаются в тонком кишечнике и гематогенным и лимфогенными путями разносятся в паренхиматозные органы, где вновь размножаются. При распаде их высвобождаются эндотоксины, которые вызывают патологические процессы. Сальмонеллы образуют два вида токсинов: экзо- и эндотоксины.

Методы диагностики:

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД:

Материал для исследования: при жизни – кал, сыворотка крови; посмертно – трупы мелких животных и птиц, паренхиматозные органы, мезентериальные лимфатические узлы, отрезок кишечника, аборт. плод.

Микроскопия: мелкие короткие палочки с закругленными концами, располагаются одиночно или попарно, беспорядочно; Гр ^-, спор не образуют; капсулу не образуют; подвижны (за исключением S.pullorum).

Культивирование: сальмонеллы - факультативные анаэробы; оптимальная температура 37^oС; срок культивирования 18-20 часов. Культивирование проводят в 3 этапа: 1-й этап - посев исследуемого материала в накопительные среды (Килиана, Мюллера, селенитовый бульон); 2-й этап - Пересев на элективные, дифференциально-диагностические среды (Эндо, Левина, Плоскирева, Висмут-сульфит агар и др.);

3-й этап – пересев на дифференциально-диагностические среды «пестрого ряда» для биохимического тестирования.

Культуральные свойства: Все энтеробактерии, в т.ч.сальмонеллы имеют сходные культуральные признаки: на МПБ – интенсивное помутнение, образование легко разбивающегося осадка, на МПА – сочные, круглые с ровными краями серо-белого цвета колонии.

· на среде Эндо (среда розового цвета с лактозой и фуксином) – мелкие и средние, нежные. прозрачные бледно-розовые колонии,

· на среде Левина (среда красновато-фиолетового цвета, цвета «гнилой вишни» с лактозой, эозином и метилен.синим) – бесцветные колонии;

· на среде Плоскирева (высокоселектив. среде коньячного цвета с лактозой нейтральным красным и бриллиант. зелёным) – серо-желтые колонии;

· на среде висмут-сульфит-агар (высокоселективная среда молочно-зеленоватого цвета) – блестящие антрацитово-чёрные колонии.

· на 3-х сахарном агаре Олькеницкого – скос красный, столбик желтый, черные пятна, разрывы среды («3-х сахарный агар становится трехцветным»)

Биохимические свойства: Сальмонеллы обладают пониженной сахаролитической активностью: ферментируют глюкозу и маннит с образованием кислоты и газа, Важным дифференцирующим биохимическим свойством сальмонелл является отсутствие способности ферментировать лактозу. Не разжижают желатин, Н₂S+, индол -; реакция с метиловым красным +: (среда окрашивается в розово-красный цвет), реакция Фогеса-Проскауэра отрицательная – (желтое окрашивание среды). Растет на среде Симмонса с цитратом, изменяя её цвет с зелёного на синий.

Биопроба: в необходим. случаях заражают п/кожно белых мышей (гибель).

СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД:

1. Экспресс-метод диагностики – постановка РИФ (МФА) с флюоресцирующей диагностической сывороткой.

2. РА с исследуемой сывороткой крови (или кровекапельная) при диагностике паратифозного аборта кобыл, пуллороза у кур (т.е. ищут Ат в исследуемой сыворотке крови животных с помощью антигена-диагностикума).

3. РА с исследуемой живой культурой с агаровой среды с целью определения вида и сероварианта Salm (т.е. определяют Аг полученной культуры бактерий с помощью диагност. сывороток).

Антигенное строение сальмонелл очень сложно. На основе общего для нескольких серовариантов сальмонелл антигена они подразделяются на серологич. группы по схеме Кауфмана-Уайта, обозначаемые заглавными буквами латинского алфавита (серогруппы A, B, C, D и т.д.). Кроме того, разные сероварианты сальмонелл различаются по набору соматических О-антигенов и жгутиковых Н-антигенов Поэтому идентификацию исследуемых культур проводят в 3 этапа. Сначала культуру проверяют с групповыми (поливалентными) сальмонеллезными агглютинирующими сыворотками в РА на стекле для подтверждения принадлежности к роду Salmonella. При положительном результате с групповой сывороткой проводят испытания той же куль-туры с отдельными монорецепторными сыворотками, входящими в смесь поливален-тной сыворотки и определяют серологич. группу по Кауфману. Затем эти же культуры испытывают с монорецепторными сыворотками, 1-й и 2-й фазы, обозначенными цифрами и малыми буквами и устанавливают серовариант, то есть идентифицируют mi.

ФАГОДИАГНОСТИКА – с набором сальмонеллёзных бактериофагов

Биопрепараты:

Диагностические – наборы агглютинирующих сывороток для постановки РА; флюоресцирующая сыворотка для РИФ; бактериофаги.

лечебные – сыворотки и гамма-глобулины.

Разнообразные вакцины, такие как:

· Концентрированная формолвакцина для стельных коров;

· Живая или инактивированная в-на для телят от вакцинированных коров;

· Формолвакцина против паратифа поросят – для супоросных свиноматок за 1,5 мес. до опороса.

· Сухая живая вакцина против паратифа свиней из аттенуированного штамма S. cholerae suis ТС-177 – для поросят с 2-х недельного возраста

· Поливалентная формолтиомерсаловая вакцина против сальмонеллёза овец.

· Ассоциированная вакцина против паратифа, пастереллёза и диплококковой септицемии поросят – в неблагополучных хозяйствах.

 

Дифференциация E.coli и Salmonella на средах:

Эндо Левина Плоскирева ВСА

ТУБЕРКУЛЕЗ

Туберкулез - инфекционная, хронически протекающая болезнь человека и животных Патологоанатомически характеризуется образованием туберкул (бугорков) в органах и тканях и творожисто-перерожденных туберкулезных очагов. Болеют практически все виды животных и птиц, в т.ч. пресмыкающиеся. (к.р.с., м.р.с., свиньи, лошади, кошки, собаки, олени, маралы, куры, индейки, цесарки, фазаны, павлины, голуби, утки и др. При аэрогенном заражении первичный инфекц. очаг развивается в легких, а при алиментарном - в мезентериальных лимф. узлах, из первичных фокусов микобактерии могут попасть в кровь, что приводит к генерализации процесса;факторы вирулентности-эндотоксины-туберкулины. Жирные кислоты способствуют распаду тканей. Корд-фактор нарушает дыхание и фосфорилирование клеток. L-формы(без клеточной стенки)обладают способностью к реверсии в типичные микобактерии. Истощение, слабость, кашель (или понос), субфебрильная t, гибель.

Микобактерии туберкулеза обладают значительной устойчивостью к хим.и физ.воздействиям. В высушенной мокроте, кусочках пораженной ткани, пыли микобактерии жизнестойки от 2 до 7 мес и более. В воде - 5 мес, в почве - 7 мес, при гниении материала – 76-167 дней и дольше.

ПАРАТУБЕРКУЛЕЗ

Паратуберкулез - хроническая инфекционная болезнь, характеризующаяся сначала периодическим, затем постоянным расстройством деятельности желудочно-кишечного тракта, истощением и летальным исходом.

Восприимчивые животные. Myc. paratuberculosis поражает КРС (особенно молодняк), буйволов, верблюдов, овец, коз. Заражение происходит алиментарным путем; возбудитель проникает в ворсинки кишечника, где фагоцитируется (фагоцитоз незавершенный), вызывает деструктивные изменения, приводит к нарушениям ф-ции желез кишечника. Основные факторы вирулентности - эндотоксины.

КЛАССИФИКАЦИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ.

СемействоMycobacteriaceae Род: Mycobacterium.

• Вид: Myc. paratuberculosis (палочки Ионе)

Методы диагностики.

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД.

Материал для исследования: кал, пораженные участки слизистой тонкого кишечника, комки слизи, брыжеечные лимфатические узлы.

Микроскопия. методы окраски: по Цилю-Нильсену (красные на синем фоне) и Граму (+). Myc. paratuberculosis – мелкие кислотоустойчивые палочки длиной 0,5-1,5. Располаг.в виде скоплений,кучек,редко поодиночке или по 2-4 клетки.Сп-, Капс-, н/п.

Культивирование. На простых питательных средах не растёт! Посев на специальные пит. среды с добавлением ос