Классификация:семействоmycobacteriaceae,род Mycobacterium

· М.tuberculosis (человеческий тип) (палочка Коха)

· M. bovis (бычий тип),

· M. avium (птичий тип),

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД: Материал для исследования:

молоко, моча, слизь, пораженные органы и ткани (бронхиальные и средостенные лимфоузлы, плевра, отрезки кишечника и т.п.). Доставляют свежим, замороженным или после консервации 30-40% водным р-ром глицерина.

Микроскопия. прямые или слегка изогнутые палочки 1,5 до 4 мкм. Гр+, Сп-, К-, неподвижны; кислото-спирто-щелочеустойчивые, часто располаг. скоплениями.

При окраске по Цилю-Нильсону - красные на синем фоне.

Культивирование. Подготовка пат.мат. перед посевом химическим способом – обработка 6-10% раствором серной кислоты (метод Гона, метод Аликаевой и т.д.). Для жидкого материала – метод флотации с NaОН и ксилолом. Посев на специальные глицериновые яично-картофельные питательные среды с бриллиантовым зелёным: Петраньяни, Гельберга, Левенштейна-Йенсен а, пересев на МПглицериновый бульон, глицериновый картофель. Микобактерии - строгие аэробы; Первые признаки ро-ста возбудителя птичьего типа появляются на средах через 15-25 дней, человеческого типа – через 25-35 дней, бычьего типа – через 40-70 дней.

Культуральные свойства: На жидких пит.средах - рыхлая,матовая,морщинистая пленка. На плотн пит.средах колонии в R-форме –«бородавчатые», сухие, цвета слоновой кости или сплошной сухой налёт.У Mycobacterium avium – колонии гладкие, слизистые.

Возбудитель может размножаться и образовывать микроколонии на стекле при нанесении пат.материала на предметное стекло, обработки его Н₂SO₄ и погружения в кровяную среду - метод Прайса. После инкубации при 37^оС на 1-й-15-й и 30-й день мазки вынимают из пробирки, высушивают, фиксируют, окрашивают по Цилю-Ниль-сену, микроскопируют.Выявляют микроколонии в виде «жгутов» или «кос».Это явление «корд-фактора», его образуют только патогенные микобактерии.

Биохимические свойства: рост на среде с салицилатом натрия, устойчивость к 5 %-ному NaCl, пикриновой кислоте, сахаролитическая активность. А также:

Активность	M.tuberculosis	M.bovis	M.avium
Синтез уреазы	+	+	-
Редукция нитратов	+	-	-
Синтез каталазы	-	-	+/-
Аккумуляция ниацина	+	-	-
Гидролиз твина-80 (10 сут)	+/-	-	-

БИОПРОБА. Опред. вирулентности культуры проводят параллельно для морских свинок,кроликов и птиц. Лаб.животных используют и для идентиф. видов возбудит.

Возбудитель	Морские свинки	Кролики	Куры
M.tuberculosis	Генерализованная ф.	Очаговая форма	Непатогенен
M.bovis	Генерализованная ф.	Генерализованная	Непатогенен
M.avium	Непатогенен	Сепсис	Генерализованная ф.

СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА: Используют реакцию связывания комплемента (РСК);реакцию пассивной или непрямой, гемагглютинации (РПГА);реакцию кольцепреципитации; реакцию диффуз. преципитации в геле (РДП).

АЛЛЕРГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА: Для изготовления аллергенов-туберкулинов для млекопитающих используют штаммы вида Mycobacterium bovis. Применяют сухой очищенный туберкулин(протеин-пурифитед-дериват-ППД). Это сухой очищенный экстракт из туберкулёзных бактерий бычьего вида. Сухой очищенный туберкулин (ППД) для птиц готовят по той же технологии,из культурального фильтрата микобактерий туберкулеза птичьего вида и применяют для диагностики у птиц и свиней. Туберкулин инъецируют КРС, верблюдам, оленям в толщу кожи в области средней трети шеи, свиньям на наружной пов-сти основания уха, курам в толщу кожи бородки. Учитывают р-ю через 72 ч по результатам измерения толщины кожной складки с помощью кутиметра. Положит. реакция проявл. в виде разлитого отека, у КРС размером 35х45 мм и больше, без строго очерченных границ, тестообразного, повыш. теплоты и чувствительности. Кожная складка увеличивается на 3 мм и более.

Парааллергические реакции - результат сенсибилизации крупного рогатого скота атипичными микобактериями, живущими в торфяной подстилке, псевдоаллергические - результат воздействия возбудителей паразитарных болезней и других факторов. Для дифференциации животным одновременно с туберкулинизацией (с другой стороны шеи) внутрикожно вводят аллерген «КАМ» - комплексный аллерген на микобактерии. Если на КАМ реакция будет сильнее – это парааллергическая реакция.

БИОПРЕПАРАТЫ. При туберкулезе иммунитет нестерильный. Фагоцитоз имеет незавершенный характер и фагоцитированные микобактерии не погибают.

В 1924 г. французские ученые Кальметт и Герен предложили вакцину против туберкулеза. Этот штамм назван культурой BCG (Bacterium Calmett - Guerin), по русски - БЦЖ. Вакцинируют людей. Биопрепараты для специфической профилактики и терапии у животных не разработаны.

ПАРАТУБЕРКУЛЕЗ

Паратуберкулез - хроническая инфекционная болезнь, характеризующаяся сначала периодическим, затем постоянным расстройством деятельности желудочно-кишечного тракта, истощением и летальным исходом.

Восприимчивые животные. Myc. paratuberculosis поражает КРС (особенно молодняк), буйволов, верблюдов, овец, коз. Заражение происходит алиментарным путем; возбудитель проникает в ворсинки кишечника, где фагоцитируется (фагоцитоз незавершенный), вызывает деструктивные изменения, приводит к нарушениям ф-ции желез кишечника. Основные факторы вирулентности - эндотоксины.

КЛАССИФИКАЦИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ.

СемействоMycobacteriaceae Род: Mycobacterium.

• Вид: Myc. paratuberculosis (палочки Ионе)

Методы диагностики.

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД.

Материал для исследования: кал, пораженные участки слизистой тонкого кишечника, комки слизи, брыжеечные лимфатические узлы.

Микроскопия. методы окраски: по Цилю-Нильсену (красные на синем фоне) и Граму (+). Myc. paratuberculosis – мелкие кислотоустойчивые палочки длиной 0,5-1,5. Располаг.в виде скоплений,кучек,редко поодиночке или по 2-4 клетки.Сп-, Капс-, н/п.

Культивирование. На простых питательных средах не растёт! Посев на специальные пит. среды с добавлением особого стимулятора роста - экстракта бактерийной массы микобактерий тимофеевой травы (Myc. phlei). Экстракт добавляют к средам для возбудителя туберкулёза - Петраньяни, Гельберга, Левенштейна,, а также используют специальные среды:агаризированную среда Сотона и жидкие Данкина, Вишневского Дорсе и др.. Myc. paratuberculosis аэроб; опт. t.38^oС; срок культивирования от 6 нед до 7 мес.

Для дифференциации Myc. paratuberculosis от других кислотоустойчивых микобактерий материал после обработки 5 %-ным р-ром серной кислоты высевают также на элективные среды для возбудителей туберкулёза без экстракта Myc. phlei и обычные питательные среды (МПА, МПБ). Культуры атипичных сапрофитных быстрорастущих микобактерий вырастают на простых средах в течение первых 3-10 сут.Микобактерии туберкулеза растут на элективных средах типа среды Петраньяни. Микобактерии паратуберкулёза не растут на средах без добавления экстракта палочки тимофеевой травы.

Культуральные свойства:

На плотных питательных средах вначале возникают изолированные серовато-желто-белые маленькие колонии. С течением времени появляется складчатое наложение;

на жидких средах Myc. paratuberculosis образует нежную беловато-сероватую пленку, которая через 3-4 мес культивирования увеличивается в объеме и опускается на дно пробирки.

БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД.

лабораторные животные невосприимчивы.

СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД:

РСК с ионином или птичьим альттуберкулином

АЛЛЕРГИЧЕСКИЙ МЕТОД:

Для постановки аллергической пробы применяют паратуберкулин (ионин) – фильтрат убитой кипячением 2-3-х мес. культуры паратуберкулёзных микобактерий.

Паратуберкулезный скот реагирует также на альттуберкулин для птиц и стандартный сухой очищенный (ППД) туберкулин для птиц. Крупный рогатый скот исследуют двойной внутрикожной аллергической пробой. Реакцию учитывают после первого введения через 48 ч с помощью измерения величины кожной складки кутиметром. Положительной реакцией считают появление на месте введения туберкулина разлитого отека без строгой конфигурации и границ, размерами приблизительно 35х45 - 100х120 мм и больше, напряженного в центре и тестоватой консистенции по краям, горячего па ощупь и болезненного при дотрагивании. Животным, давшим сомнительную реакцию и нереагирующим, альттуберкулин вводят повторно.

Реакцию учитывают через 24 ч.

БИОПРЕПАРАТЫ для специфической профилактики и терапии: не разработаны

 

ООИ БРУЦЕЛЛЕЗ

Бруцеллез – хроническая инфекционная болезнь животных и человека. У животных протекает чаще в скрытой форме, происходят массовые аборты, задержание последа, метриты, а также поражения суставов (бурситы), поражения нервной системы (полиневриты, радикулиты). Бруцеллёз – особо опасная инфекция, профессиональное заболевание животноводов, работников мясокомбинатов, ветеринарных врачей.

Классификация возбудителя: Род: Brucella. Виды:

· Br. melitensis (овец и коз, наиболее опасен для людей),

· Br. abortus (крупного рогатого скота)

· Br. suis (свиней),

· Br. ovis (инфекционного эпидидимита баранов),

· Br.canis (собак).

Патогенез и факторы вирулентности:

Возбудитель в организм проникает алиментарным, контактным, половым путями; может проникать даже через неповреждённую кожу. Очень опасно заражение через молоко больных животных, особенно молоко коз. Бруцеллы вначале размножаются в ближайших лимфоузлах, затем проникают во внутр. органы, инфекция принимает генерализованный характер. Бруцелла является внутриклеточным паразитом. Наиболее благоприятную среду для размножения они находят в беременной матке, что приводит к эндометриту, нарушению питания плода и аборту; ф-ры вирулентности у бруцелл - эндотоксины и ферменты патогенности – гиалуронидаза, каталаза, уреаза.

Методы диагностики

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД

Материал для исследования: аборт.плод с оболочками, желудок плода, печень, почки плода, молоко, содержимое гигром. От убитых животных – лимфоузлы, матка, яичники, вымя, семенники и др.

Микроскопия: Методы окраски: по Граму(-), а мазки из патматериала - по Козловскому (красные на зелёном фоне) (Bruc. труднее окрашиваются и хуже отдают воспринятый ими цвет, чем сопутствующая м/ф.); бруцеллы - очень мелкие коккобактерии (0,3-0,6 мкм) располаг. одиночно, парами и небольшими группами);спор не образуют, имеется небольшая капсула (не имеет диагност.значения); неподвижны.

Культивирование: Бруцеллы плохо растут на простых средах; посев производят на специальные питательные среды – мясо-пептонный печеночный бульон (МППБ), мясо-пептонный печеночно-глюкозо-глицериновый агар (МППГГА), печеночно-глюкозо-глицериновый бульон и агар (МГГБ и МГГА) с 10%-ной глюкозой и 2-3% - ным глицерином, эритрит-агар. Также эффективен посев по 0,2 мл иссл. материала в желточный мешок свежих, неоплодотворённых куриных яиц. После инкубации 5 суток при 37^оС яйца вскрывают, набирают пастеровскими пипетками желток и пересевают на плотные и жидкие питат. среды. оптимальная t 37^oС; срок - от 15 до 30 дн.

Культуральные свойства:На жидких средах – равномерное помутнение, пристеноч. кольцо, незначит. осадок. На плотных средах – росинчатые. мелкие,выпуклые, прозрачные с ровным краем колонии с голубовато-серым или янтарным оттенком. S-форма, но может быть и R-ф.

Биохимические свойства: Сахаролитические свойства выражены слабо; молоко бруцеллы не свертывают, желатин не разжижают, образуют каталазу. Для дифференциации видов бруцелл по культуральным и биохим. свойствам используют тесты:

· бруцеллы Br.bovis, Br.ovis - микроаэрофилы; их выращивают в атмосфере 10-15% СО₂; остальные виды бруцелл – аэробы;

· сероводород образуют Br. suis в меньшей степени Br. abortus.

· виды бруцелл различаются по способности проявлять оксидазную активность, расти в среде, содержащей тионин и основной фуксин

При получении культуры, адаптированной к среде, проводят ее типизацию сыворотками. Однако предварительно проверяют культуру на наличие диссоциации. Ставят РА на предметном стекле: трипафлавин + смыв с 48 часовой агаровой культуры. В норме агглютинации не должно быть.

Часто при бак. диагностике выделяют вакцинные штаммы, которые надо

дифференцировать от патогенных. Вакцинный штамм №19 чувствителен к ихтиолу и пенициллину. Поэтому к средам добавляют эти препараты.

Полевые штаммы растут на этих средах, а вакцинный – нет.

СЕРОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

1. РА с позитивной моноспецифич. сывороткой для идентификации получ. культуры.

2. РА с единым бруцеллёзным антигеном, для исследования сыворотки крови животных (считается положительной, если идет на 2 ++ и > с разведением сыворотки 1:100 для крупных животных и 1: 50 для мелких животных.

3. РСК (самая чувствительная) – для стад с давней инфекцией;

4. РДСК –ещё более чувствительная, чем РСК–для диагностики эпидидимита баранов.

5. РБП – ориентировочная для всех с/х животных на фермах;

6. КР с молоком на фермах и на рынках;

7. МФА (РИФ) – экспресс-диагностика пат.материала

При постановке диагноза на Bruc. его надо дифференцировать от туляремии и иерсиниоза, так как у этих возбудителей имеются общие антигены.

БИОПРОБА: заражают подкожно морских свинок, белых мышей.

Морской свинке п/к вводят пат. материал или выделенную чистую культуру. Наблюдение 2 мес. Контроль биопробы – постановка РА, которую ставят на 15, 25 сут. с сывороткой крови зараженного животного. Если титр увеличивается до1:10 биопроба считается положительной.

АЛЛЕРГИЧЕСКИЙ МЕТОД для аллергической диагностики бруцеллёза овец, коз, свиней животным вводят бруцеллин ВИЭВ.

БИОПРЕПАРАТЫ.

Диагностические - см. серологические исследования. Иммунитет при Bruc. вначале нестерильный, формируется медленно. Роль антител – неэффективна. Для профилактики применяются:

1.живая вакцина из штамма 19 B.abortus.

2.вакцина из слабоагглютиногенного штамма 82 Bruc.abortus,против бруцеллёза КРС.

3.живая вакцина из штамма Рев-1 Bruc. melitensis.

4.инактивиров. адъювант-вакцина из штамма B.abortus КВ 17/100 для КРС

ООИТУЛЯРЕМИЯ

Природно-очаговая инфекционная болезнь, характеризуется лихорадкой, увеличением лимфатических узлов (бубоны).У с/х животных обычно проявляется в септической форме. Проявляется симптомами поражениея ЦНС, параличами, у КРС - маститами, у лошадей - абортами. Наиболее чувствительны зайцы (заячья чума), полёвки, хомяки, домовые мыши. Спорадически заболевают поросята, ягнята, лошади. КРС, пушные звери. Восприимчивы люди. Переносчики – грызуны, клещи, комары, москиты.