Культурально-морфологические свойства анаэробов

Вид	Морфология	по Граму	Спора	Капсула	Подвиж ность	Культуральные свойства Анаэробов на МППБ (среде Китта-Тароцци) и сахарном кровяном МПА
C. tetani	Тонкие, стройные пало-чки до 6 мкм, спора округлая на конце микро-бной клетки	+	+	-	+	На МППБ (среде Китта-Тароцци) помутнение с незначительным газо-образованием. На сахарном кровяном МПА – нежный налет или колонии с приподнятым центром и периферическими отростками - «паучки»; вокруг колоний гемолиз
C. botulinum	Крупные палочки с закругленными концами, споры расположены терминально	+	+	-	+	Строгий анаэроб,срок культив. 48-72 ч. На МППБ – помутнение среды с газо-образованием, характерный запах прогорклого масла. На кровяном МПА – колонии крупные с корневидными отростками и зоной гемолиза или нежный вуалеобразный налёт с микроскопически изрезанными краями
C. chauvoei	Полиморфные, толстые палочки до 8 мкм	+	+	-	+	На МППБ – помутнение, осадок, незначит. газообразование. На сахарном кровяном МПА – колонии в виде “перламутровой” пуговицы, узкая зона гемолиза
C. perfrin gens	Толстые, короткие палочки, располагаются одиночно, попарно иногда палисадом /////	+	+	+	-	Очень быстрый рост! На МППБ – обильное помутнение и бурное газообразование! На сахарном кровяном МПА –мелкие колонии, кот. на свету зеленеют. Вокруг колоний гемолиз
C. septicum	Палочки с закругленными концами.В мазках-отпечатках нити	+	+	-	+	На МППБ – интенсивное помутнение На сахарном кровяном МПА – сплошная нежная пленка, зона гемолиза.
C. novyi	Крупные палочки, располагаются одиночно	+	+	-	+	На МППБ - обильное помутнение с газообразованием. На сахарном кровяном МПА – колонии в виде спутанного клубка, гемолиза нет
C.sordellii	Крупные полиморфные палочки, располагаются цепочками по 2-4 клетки	+	+	-	+	На МППБ - обильное помутнение в нижней части среды, газообразование умеренное. На сахарном кровяном МПА – корневидные, неправильной формы колонии с сероватой шероховатой поверхностью, гемолиз сильный, но может отсутствовать
C. histolyti cum	Тонкие, стройные, с закругленными концами, расположенные одиночно, попарно	+	+	-	+	На МППБ – рост в виде умеренного помутненияНа сахарном кровяном МПА – колонии в виде росинок, без гемолиза
Fusobacterium necropho rum	Полиморфный mi: кокки, палочки до 3 мкм и нити с зернистой цитоплазмой. Рекомендуемая окраска – по Романовскому-Гимза	-	-	-	-	На МППБ – интенсивное помутнение, слабое газообразованиеНа сахарном кровяном МПА – мелкие росинчатые колонии
Bacteroides nodosus	Полиморфный микроорганизм: крупные до 8 мкм прямые или слегка изогнутые палочки, мелкие палочки с утолщениями. Рекомендуемая окраска – по Романовскому-Гимза	-	-	-	-	На МППБ – осадок на дне в виде тяжейНа сахарном кровяном МПА – плоские блестящие шероховатые колонии

Биохимические свойства. Дифференцируют анаэробы друг от друга по характеру роста на молоке с кусочками печени и мозговой среде, а также на среде ПЖА с углеводами и индикатором ВР

Название возбудителя	Молоко + печень	Мозговая среда
Cl. chauvoei, Cl.perfringens, Cl.oedematiens, Cl.septicum	Свертывают	Не изменяют
Cl.botulinum Cl.tetani, Cl. Sordellii, Cl.histolyticum Cl.sporogenes	Пептонизирует	Чернеет

БИОПРОБА

Ботулизм: Экстракты из исследуемого материала фильтруют и делят на две части, одну из них прогревают 20-30 мин на водяной бане при 100^oС. Заражают фильтратом внутривенно или внутрибрюшинно двух белых мышей, морским свинкам вводят экстракт фильтрата подкожно. При наличии токсина ботулизма животные, зараженные некипяченым экстрактом фильтрата, погибают на 2-5 день с характерными клиническими признаками – западение брюшных мышц «осиная талия». Животные, которым введён прогретый фильтрат. Остаются живы и здоровы.

Столбняк: Биопробу ставят с целью обнаружения токсина в патматериале (Исследуемый материал растирают в ступке с кварцевым песком + двойной объем физ. р-ра. Смесь выдерживают при 20^оС в течение 1 часа, фильтруют и вводят белым мышам в/м). Если исследуют выделенную ЧК, то для накопления токсина ее выдерживают в термостате 6-10 суток, фильтруют и вводят белым мышам или морским свинкам подкожно в подушечку задней лапки. Наблюдение до 5 сут. При наличии токсина через 2-4 сут у животных наблюдают ригидность хвоста (хвост вытянут «трубой» вверх) спастический паралич задней лапки, тетанические судороги и гибель.

Эмфизематозный карбункул: Центрифугатом суспензии патматериала и выделенной ЧК заражают морских свинок в/м, предварительно травмировав бедренную мышцу с внутренней стороны Наблюдают появление крепитирующих, пропитанных газами отёков в месте введения. интоксикацию и гибель.

Злокачественный отек: Морские свинки, которых заражают суспензией пат.материала или выделенной чистой культурой в мышцу бедра. Анаэробы – возбудители злокачественного отёка обладают выраженной протеолитической активностью. Например, при введении морским свинкам культуры Cl.hystoliticum наблюдается расплавление мышечной ткани, мягкие ткани мышц бедра отделяются от костей. Интоксикация приводит к гибели лаб. животных..

Брадзот: Морские свинки, кролики, белые мыши – внутримышечно-гибель

Инфекционная анаэробная энтеротоксемия: Кролики, белые мыши – в/венно или в/брюшинно экстрактом из патологического материала - гибель

Некробактериоз: Кролики – подкожно в заднюю треть наружной поверхности уха (возникает некроз); белые мыши – п/кожно, в области корня хвоста (припухлость и нагноение, абсцесс. На 8-10-е сутки – отпадение хвоста)

Копытная гниль Ягнята – аппликация материала в межкопытную щель

СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА:

При росте на средах анаэробы выделяют токсины, которые дифференцируют в РН (реакции нейтрализации токсина). Сыворотки на каждый тип токсина получают на биофабриках. При постановке РН токсина животные (мыши) опытной группы остаются живы и не заболевают.

Ботулизм. Чтобы узнать тип токсина, ставят РН токсина на белых мышах. Для этого экстракт пат.материала соединяют с равным объемом антитоксических сывороток (АТС) (контакт 2 часа) и заражают по 2 белые мыши. Если тип токсина совпадает с типом антитоксической сыворотки (АТС) мыши выживают, если нет – гибнут.

Также ставят РН с выделенной чистой культурой. При установлении типа токсина в РН диагноз считается установленным, дальнейшую работу по выделению культуры возбудителя не проводят.

Столбняк. РН токсина на белых мышах.. В диагностич. лаборатории при обнаружении и идентификации столбнячного токсина диагноз считается установленным.

Эмфизематозный карбункул РН н е применяется

злокачественный отек РН токсина для идентификации выделенных культур

Брадзот РН токсина не применяется

Инфекционная анаэробная энтеротоксемия. РН токсина со специфическими сыворотками ставят при обнаружении в исследуемом материале токсина

Некробактериоз РН токсина не применяется

копытная гниль РСК, МФА (РИФ)

БИОПРЕПАРАТЫ ПРИ АНАЭРОБНЫХ ИНФЕКЦИЯХ

1. Поливалентная концентрированная вакцина против брадзота, инфекционной энтеротоксемии, злокачественного отёка овец и анаэробной дизентерии ягнят.

2. Поливалентный анатоксин против клостридиозов овец.

ЭМКАР

1.Гидроокись алюминиевая формолвакцина(ГОАФВ) против ЭМКАРА КРС и овец

2. Ассоциированная вакцина против ЭМКАРА и лептоспитроза.

3. Ассоциированная вакцина против ЭМКАРА и сибирской язвы

СТОЛБНЯК

1.Антитоксическая сыворотка.

2.Столбнячный анатоксин – для профилактики(токсин + формалин + квасцы + фенол).

БОТУЛИЗМ

1. Фармолквасцовая вакцина против ботулизма норок.

2. Гидроокисьалюминиевый анатоксин.

3. Антитоксическая сыворотка для людей

4. Ассоциированная вакцина против ботулизма и пастереллеза

АНАЭРОБНАЯ ДИЗЕНТЕРИЯ ЯГНЯТ

1. Концентрированная ГОА вакцина

2. Сыворотка против дизентерии ягнят.

3. Сыворотка антитоксическая против дизентерии и энтеротоксимии

ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЙ ОТЕК

1. Поливалентная анатоксическая сыворотка.

2. Концентрированная поливалентная вакцина против дизентерии, брадзота и энтеротоксимии

ЛЕПТОСПИРОЗ

Лептоспироз – инфекционная, природно-очаговая болезнь животных и человека, характ. кратковременной лихорадкой, анемией, желтухой, гемоглобинурией, геморрагическим диатезом, некрозом слизистых оболочек и кожи, атонией органов пищеварения, абортами. Под действием эндотоксинов л. повышается проницаемость сосудов, лизируются эритроциты, происходят кровоизлияния, развиваются гематурия и желтуха, поражается нервная система. Токсикоз может привести к гибели животного Однако часто л. может протекать бессимптомно.

Основные носители лептоспир в природе - грызуны. Основной фактор передачи болезни – вода (в воде открытых водоемов патогенные лептоспиры сохраняются от 7 до 30 дней и более; во влажной почве выживают до 280 дней) Входные ворота инфекции - поврежденные кожа и слизистые оболочки. Наиболее восприимчивы: к.р.с., свиньи, лисицы, песцы, менее - лошади, козы, овцы, буйволы, верблюды, олени, ослы, собаки, кошки, куры, утки. После переболевания у животных форм. иммунитет, характ. серовариантной специфичностью, поэтому возможны реинфекции. Характерно длительное носительство. При вакцинации беременных животных - у молодняка колостральный иммунитет

КЛАССИФИКАЦИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ.

Род: Leptospira, Вид: Leptospira interrogans.

Наибольшее значение имеют серогруппы:

• Pomona,
• Tarassovi,
• Hebdomadis,
• Grippotyphosa,
• Icterohaemorrhagiae,
• Canicola.

Методы диагностики

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД

Материал для исследования: кровь, моча, кусочки паренх. органов, почка, транссудат из грудной и брюшной полостей, мочевой пузырь с мочой, аборт. плод. Пат. материал отбирают не позже 2 ч после гибели животных. Мочу исследуют микроскопически в течение 3 ч.

Микроскопия. Лептоспиры плохо окрашиваются по Граму, по Романовскому-Гимзе – розовые, также их можно обнаружить в срезах из органов после импрегнации серебром по методу Левадити. Микроскопию живых л. проводят в раздавленной капле с конденсором «темного поля». Лептоспиры - спиралевидные бактерии длиной 6-30 мкм, имеют около 20 мелких, первичных завитков и 1-2 вторичных, придающих клетке форму букв «г, s, с». В темном поле - вид тонких, серебристых нитей с утолщенными и загнутыми в виде крючков концами. Гр-, Сп-, Капс-, подвижны.

Культивирование и культуральные свойства:

Посев на водно-сывороточные питательные среды: Уленгута, Терских, Ферворта-Вольфа, Любашенко и др.; факульт. анаэробы; опт. t 28-30^oС; от 7 дней до 1-2 мес. При культивировании среда не изменяется, и наличие роста определяют микроскопией в темном поле. На плотных средах (Кокса, ВГНКИ) образуют колонии S-, О- и R-форм. S-форма - типичная для вирулентных лептоспир: колонии прозрачные,в виде диска с ровным краем.

Биохимические свойства:

Ферментация углеводов не доказана;обнаружены каталаза,оксидаза,липаза.

БИОПРОБА. Заражают золотистых хомячков 20-30-дн. возраста и крольчат-сосунов в возрасте 10-20 дней. На каждую пробу берут 2 животных; на 4-5-й день убивают первого, на 14-16-й день - второго. Из сердца, печени и почек убитых или павших животных проводят посевы.

СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА.

1. Реакция микроагглютинации (РМА). Пробы крови берут на 5-7-й день болезни и при исследовании отдельных животных повторно через 7-10 дней (парные сыворотки). РМА ставят в лунках агглютинационных планшет.Компоненты: Ат - исследуемая сыворотка в разведении 1:100, 1:500, 1:2500 (при необходимости - в разведениях 1:100, 1:200 и т. д. до титра) в объеме 0,1 мл; антиген - живые5-15-суточные культуры лептоспир 13-16 серогрупп в объеме 0,1 мл; контроль - антиген с физ. р-ром по 0,1 мл. Смесь выдерживают при t 30 ^oС 1 ч. PMA проявляется в склеивании лептоспир и образовании «паучков», состоящих от 3-5 до нескольких десятков и более бактерий. Оценивается реакция в плюсах по 4-балльной системе под микроскопом в препарате «раздавленная капля». Положительная – РМА не менее ++.

РМА + в титре 1:50….1:100 и выше свидетельствуют об инфицированности данной особи лептоспирами и о возможном лептоспироносительстве.

2. РА ставят на стеклянной пластинке. Компоненты реакции: Ат -исследуемая сыворотка в разведении 1:100; Аг – лептоспирозн. антигены 6 серогрупп.

3. МФА - для выявления лептоспир в крови, моче, паренхиматозных органах, в тканях абортированного плода, в воде и почве

Биопрепараты:

Для специф. профилактики:

1. Депонированная поливалентная вакцина ВГНКИ против лептоспироза животных из штаммов Pomona, Tarassovi, Icterohemorragiaе, Canikola, Grippotyphosa, Hebdomadis. Иммунитет после вакцинации наступает через 14-20 дней и длится у молодняка до 6 мес, у взрослых животных - до 1 года.

2. Для собак – инактивированные вакцины фирмы «Nobivaс Биокан, Нобивак, Дурамун Макс, Вангард»

Для специф. терапии: иммунная сыворотка против лептоспироза с/х и промысловых животных (из крови волов-продуцентов). Иммунитет сохраняется 10-14 дн

Прививку для собак против лептоспироза желательно проводить чаще, чем раз в год, например, раз в 8 – 9 месяцев, поскольку уже в это время иммунитет становится менее напряжённым. Прививка для собак против лептоспироза не является обязательной, но она одна из самых важных. Вакцинацию собак от этого заболевания делают внутримышечно через иглу, диаметром не менее 1,0 мм. Прививку для собак не делают беременным животным в первую неделю после родов, а также в течение 7 дней после дегельминтизации и 14 дней после обработки хлор-фосфорсодержащими препаратами, этих животных вакцинируют по истечении указанных сроков. Прививки для собак против лептоспироза делают животным, начиная с 1 месяца.

КАМПИЛОБАКТЕРИОЗ (ВИБРИОЗ)

1. Генитальный кампилобактериоз (энзоотический аборт). Болезнь поражает репродуктивную систему животных. Часто встречается у КРС реже у МРС, иногда у мелких животных – собак. У самцов кампилобактер длительное время сохраняется в организме и выделяется со спермой. Передаётся половым путём и при искусств. Осеменении. Во влагалище у самок быстро размножается, попадает в матку, вызывая вагиниты и эндо-метриты, гибель эмбрионов в 2-4-недельном возрасте, аборты, бесплодие.

Возбудители генитального кампилобактериоза - 8 видов р ода Campylobacter, в т.ч:

Вид Campylobacter fetus подвид venerealis,

Вид Campylobacter fetus подвид fetus.

2. Кишечный кампилобактериоз. Болезнь молодняка животных (щенков, котят, телят, ягнят, поросят, жеребят) и людей, проявл. энтеритами. Передается фекально-оральным путём. У людей кампилобактериоз – острая кишечная инфекция, встречается очень часто, связана с потреблением воды и пищи (мяса, молока, птицепродуктов, овощей), обсеменен. возбудителем.

Возбудители кишечного кампилобактериоза

Вид Саmpylobacter jejuni

Вид Саmpylobacter coli ( коли-вибрион)

очень редко - Campylobacter fetus

Методы диагностики.

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД:

Материал для исследования: при абортах - абортированный плод (желудок плода, печень, легкое), плод. оболочки, часть плаценты. При бесплодии КРС у коров берут влагалищную слизь с помощью специальных приспособлений (полистироловых пипеток, соединённых со шприцом, или стерильным марлевым тампоном при помощи инструментов Жабоедова или (Павловского). От быков, баранов. кобелей – сперму, препуциальные смывы. Транспортировка смывов – в транспортных средах (тиогликолатном бульоне, среде Cary-Blair, щелочной пептонной воде). При подозрении на кишечный кампилобактериоз – фекалии, ректальные мазки.

Морфология. Кампилобактеры имеют форму вибрионов или спирилл. Это Грам-, полиморфные, тонкие, извитые микроорганизмы (спирально изогнутые палочки), имеют 1-2 крупных завитка, «~~»; «S». Активно подвижные, Сп-, Капс-. В мазке располагаются одиночно, беспорядочно или короткими цепочками: «крылья летящей чайки». Для ускоренной ориентировочной диагностики тонкий, фиксир. над пламенем мазок из пат. материала окрашивают водным раствором основного фуксина(1:5) 10-20с. Большая часть находящейся в мазке сопутствующей микрофлоры прокраситься за такой короткий срок не успевает.

Культивирование: Микроаэрофилы. Любят 10% концентрацию СО₂ (СО₂ – инкубаторы, газогенерирующие пакеты или колпак с горящей свечой). На простых пит. средах не растут. Используют ПЖА на печеночной и сердечной воде, эритрит-агар с 5% гемолизированной крови барана, среду Скирроу, специальные среды с селективными добавками. Посев обильный, уколом.

На ПЖА рост кампилобактеров проявляется в виде серо-голубоватого диска или кольца на 0,1-0,4 см ниже поверхности среды. Со временем диск поднимается вверх, образуя на поверхности пленку. Сама среда остается прозрачной. На плотных специальных средах мелкие - (1мм) округлые, прозрачные, бесцветные влажные колонии.

Чистую культуру получить очень трудно. Для ограничения роста посторонней микрофлоры применяют специальные методики:

1. Используют элективные среды различных фирм с селективными добавками-ингибиторами (рифампицин, фузидин и др.), СЖН - сафранино-железо-новобиомициновую среду. Если культура камп. чистая – СЖН розового цвета, если нет - желтого.

2. Используют способность кампилобактеров проходить через мембранные фильтры с диаметром пор 0,5-0,6 мкм. Стерильные мембранные фильтры помещают на поверхность плотной питательной среды и наносят на них несколько капель 10%-й суспензии иссл. Материала. Через 30 мин фильтры убирают, чашки инкубируют.

3. «Метод пастеровских пипеток»: стерильной пастеровской пипеткой набирают в капилляр ПЖА и немного смешанной культуры. Нижнюю часть пипетки запаивают. Инкубируют. Через 3-4 суток кампилобактеры растут в пипетке под поверхностью среды в виде кольца. Затем полученную ЧК, берут другой пипеткой и пересевают на МППА.

4.М-д Шаталова. В пробирку помещают стекл. трубку и заливают ПЖА. В трубку вносят смешанную культуру кампилобактеров. Вследствие подвижности кампилобактеры проникают из трубки в среду и растут в ПЖА в виде кольца, остальные микробы останутся в трубке

БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД. Выделенной ЧК заражают м. свинок, хомячков, кроликов (у беременных самок – аборт).Для освежения, выделенной ЧК заражают куриные эмбрионы, после чего к/б восстанав-ливает свои свой-ства.

СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД

1. Серологическая идентификация культур – в пластинчатой, а затем в – в пробирочной РА со стандартными моноспецифическими сыворотками.

2. Для обнаружения кампилобактеров в пат.материале и культуре – МФА

3. Для обследования коров - РАВС (РА с влагалищной слизью). Влагалищную слизь берут тампоном и помещают в пробирку с формалинизированным 3% р-ром NaCl. Тампон отжимают, а жидкость центрифугируют. С полученным экстрактом ставят РА (в слизи ищут Ат), используя биофабричные антигены-диагностикумы. (у овец так же ставят реакцию с сывороткой крови).

4. У людей при кишечной форме кампилобактериоза применяют РСК, РДСК.

БИОПРЕПАРАТЫ.

Диагностические сыворотки и антигены.

Для профилактики:

1.Эмульсининактивированная вакцина против кампилобактериоза к.р.с. и овец.

2.Ассоциированные вакцины против кампилобактериоза, лептоспироза и сальмонеллёза.