MACT (множественный аллергосорбентный тест)

Метод определения аллергенспецифических IgE, аналогичный по принципу РАСТ, где аллерген сорбирован на целлюлозных нитях, а в качестве индикатора реакции используются фотореагенты, свечение которых регистрируется на люминометре, на фотометре Метод позволяет быстрее получить результаты исследования,дает возможность определять необходимые параметры даже у одного больного, не ожидая накопления проб для использования целого набора. ·

Интерпретация анализа

n В результате оценивается к какому классу относится тот или иной аллерген. При выявлении 3 и 4 классов и соответствующим данным клинической картины, можно говорить о данном аллергене как причиннозначимом.

n При выявлении 1 и 2 классов необходимо сопоставлять с данными клинической картины, периодом заболевания, учитывать наличие возможной перекрестной реактивации.

n При оценке результатов определения сывороточного IgE и сопоставлении с результатами кожных проб необходимо учитывать, что скорость полувыведения из сыворотки крови IgE 2-3 дня, а на тучных клетках в коже сохраняются до нескольких месяцев.

n Совпадение положительных результатов при проведении MAST и кожных проб наблюдается по интенсивности реакции и перечню аллергенов.

3.2.4.Хемилюминесцентный (MAST CLA).

n Аллергоскрининг IgE: количественное определение s IgE к 36 аллергенам

гриб Aspergillus, гриб Kladosporium, ольха черная, береза белая, пыльца лещины, овсяница, ежа, рожь, тимофеевка, лебеда - смесь, одуванчик, полынь - смесь, перья - смесь, лошадь, собака, кошка, таракан - смесь, домашняя пыль — смесь, клещ D.Pterony, клещ D.Farinae, яблоко, говядина, морковь, злаки - смесь (кукуруза, овес, рис), курятина, треска, яйцо цельное, орех фундук, молоко коровье, горох, свинина, картофель, соя, клубника, томат, пшеница).

n Пищевая панель IgE: количественное определение sIgE к 36 пищевым аллергенам (общий IgE, миндаль, банан, фасоль белая, говядина, морковь, капуста, смесь (белокачанная, брокколи, цветная), сельдерей, курятина, шоколад, треска, кукуруза, яйцо (белок), яйцо (желток), чеснок, молоко, грибы пищевые, лук - смесь (белый, желтый), апельсин, горох, арахис, свинина, картофель, изюм, рис, рожь, морепродукты - смесь (моллюск, краб, креветка), соя, тыква - смесь, сахар - смесь, томат, тунец, индейка, орех грецкий, пшеница, дрожжи).

n Аллергоскрининг IgE (20): количественное определение s IgE к 20 аллергенам (береза белая, амброзия (смесь), тимофеевка, полынь обыкновенная, латекс, соевые бобы, рис, треска, пшеница, арахис, белок яйца, молоко, гриб Aspergillus, гриб Kladospohum, гриб Alternaha, собака, кошка, таракан, клещ D.Pterony, клещ D.Farinae).

Нормальные пределы уровня иммуноглобулина Е (IgE)

CLA классы	LU	IU\ml, МЕ/мл	Количество аллергенспецифических IgE
	0-11,0	0-0,22	Не определяется
	12,0-26,0	0,22-0,7	Очень низкая концентрация
	27,0-65,0	0,7-2,5	Низкая концентрация
	66,0-142,0	2,5-5	Умеренная концентрация
	143,0-242,0	5,0-10,0	Высокая концентрация
	> 242,0	> 10,0	Очень высокая концентрация

Данные классы (CLA) соответствуют классам кожных проб

Классический иммуноблот

n применяют в случае наличия четких указаний на причинный аллерген (данные анамнеза, элиминационного теста и др.)

n и отрицательных результатов тестирования на специфический IgE с охарактеризованными компонентами этого аллергена.

В таких случаях из грубого экстракта аллергена получают блоты и проводят анализ сыворотки больного на наличие IgE, специфичных к минорным (не охарактеризованным) компонентам аллергена.

Пример:Иммуноблот для диагностики аллергенспецифических IgE-антител на основе панелей с индивидуальными аллергенами

Респираторная панель

Пищевая панель

1. Береза (пыльца) 2. Ольха (пыльца) 3. Фундук (пыльца) 4. Дуб (пыльца) 5. Тимофеевка (пыльца) 6. Рожь (пыльца) 7. Полынь (пыльца) 8. Подорожник (пыльца) 9. Клещ птерони 10. Клещ фарина 11. Собака (эпидермис) 12. Кошка (эпидермис) 13. Лошадь (эпидермис) 14. Морская свинка (эпидермис) 15. Хомяк (эпидермис) 16. Кролик (эпидермис) 17. Гриб аспергилл 18. Гриб кладоспориум 19. Гриб пеницилл 20. Гриб альтернария

1. Фундук 2. Арахис 3. Грецкий орех 4. Миндаль 5. Молоко 6. Белок куриного яйца 7. Желток куриного яйца 8. Казеин 9. Картофель 10. Сельдерей 11. Морковь 12. Помидор 13. Треска 14. Креветки 15. Персик 16. Яблоко 17. Соя 18. Пшеница 19. Кунжут 20. Рожь

Педиатрическая панель (скрининговая)	Респираторная панель (дека-формат)
1. Арахис 2. Молоко 3. Белок куриного яйца 4. Желток куриного яйца 5. Картофель 6. Морковь 7. Треска 8. Яблоко 9. Соя 10. Пшеница 11. Береза (пыльца) 12. Тимофеевка (пыльца) 13. Полынь (пыльца) 14. Клещ фарина 15. Клещ птерони 16. Собака (эпидермис) 17. Кошка (эпидермис) 18. Лошадь (эпидермис) 19. Гриб аспергилл 20. Гриб кладоспориум	1. Береза (пыльца) 2. Ольха (пыльца) 3. Фундук (пыльца) 4. Дуб (пыльца) 5. Олива (пыльца) 6. Тимофеевка (пыльца) 7. Рожь (пыльца) 8. Амброзия (пыльца) 9. Полынь (пыльца) 10. Подорожник (пыльца)

Микроэррей (microarrey)

n является сравнительно новым и весьма перспективным направлением в прикладной молекулярной биологии.

n наибольшее распространение получила технология микроэррея, основанная на ДНК-олигонуклеотидах, однако развивается и микроэррей с применением моноклональных антител и рекомбинантных антигенов.

Исследование проводится в несколько этапов:

1.Приготовление микрочипа:

n рекомбинантные аллергены раскапываются на поверхность активированного предметного стекла (объем капли — нанолитры, количество АГ — десятки пикограмм).

n 1 стекло содержит 12 ячеек.,каждая ячейка содержит десятки (сотни) различных аллергенов и калибровочную кривую (возрастающие количества IgE) в триплетах., можно одновременно обследовать до 12 пациентов.

2–3. Ход теста: а) раскапывание сывороток пациентов (15 мкл); б) инкубация (IgE пациента соединяются с аллергенами); в) добавление моноклональных антител против IgE, меченных флуорохромом; г) сканирование микрочипа; n первые три ряда = калибровочная кривая (интенсивность свечения пропорциональна количеству фиксированных IgE); n далее — профиль сенсибилизации пациента (специфичность и количество IgE в сыворотке пациента).

n