К практическому занятию № 18

(для студентов)

 

Факультеты: лечебно-профилактический, медико-профилактический, педиатрический

Курс: 2

1. Тема занятия: Механизмы переваривания и всасывания белков.

2. Учебная цель занятия: Изучить биохимические механизмы переваривания и всасывания белков.

3. Задачи занятия:

1. Изучить роль белка в питании, показатели качества пищевого белка и принципы его нормирования в рационе, азотистый баланс.
2. Изучить механизм действия пищеварительных ферментов, механизмы всасывания аминокислот, процесс «гниения» белков в кишечнике.
3. Ознакомиться с биохимическими причинами, метаболическими и клиническими последствиями белковой недостаточности и методами ее профилактики.

Дополнительный вопрос для педфака: возрастные особенности переваривания и всасывания белков.

4. Продолжительность занятия: 3 акад. часа.

5. Задание студентам:

1. Определить рН трех образцов желудочного сока.

2. Определить присутствие лактата в трех образцах желудочного сока.

3. Определить кислотность (свободную и связанную соляную кислоту и общую кислотность) в трех образцах желудочного сока.

6. Методические указания к выполнению самостоятельной работы на занятии.

Работа № 1. Определение рН желудочного сока.

Принцип метода: Индикатор Конго в нейтральной и слабо кислой среде имеет красную окраску, а при рН меньше 3-4 меняет ее на синюю. Это происходит только в присутствии сильной соляной кислоты (органические кислоты не снижают рН ниже 4,0).

Ход работы: Одну каплю желудочного сока наносят стеклянной палочкой на красную бумагу Конго. Изменение цвета на синий свидетельствует о присутствии в желудочном соке свободной соляной кислоты. Записать результаты и выводы в таблицу.

Работа № 2. Определение лактата в желудочном соке.

Принцип метода: Качественная реакция на молочную кислоту основана на ее способности образовывать с ионами Fe³⁺ комплекс желто-зеленого цвета. Эта окраска наиболее четко определяется при проведении реакции с фенолятом железа.

Ход работы:

В пробирку наливают 2-3 мл 1% раствора фенола и добавляют 1-2 капли 3% раствора FeCl₃. Образуется сине-фиолетовый фенолят железа. Затем добавляют несколько капель желудочного сока. При наличии в нем лактата окраска становиться желто-зеленой. Записать результаты и выводы в таблицу.

Работа № 3. Определение кислотности желудочного сока.

Принцип метода: Определение кислотности желудочного сока основано на титровании кислореагирующих веществ 0,1 Н раствором NaOH. Титрование в присутствии двух индикаторов позволяет в одной пробе определить свободную HCl, связанную HCl и общую кислотность. Кислотность определяется количеством мл 0,1 Н раствора NaOH, пошедшего на титрование 100 мл желудочного сока (титрационные единицы, Т.Е.). В норме общая кислотность у взрослых составляет 40-60 Т.Е.

Ход работы:

В колбу вносят 5 мл желудочного сока и по 1-2 капли индикаторов: диметилазобензола и фенолфталеина. Титруют 0,1 Н NaOH до оранжевого окрашивания, отмечают количество израсходованного NaOH – это I пункт титрования, он соответствует количеству свободной HCl, которое определяется по формуле:

Свободная HCl = А • 100/5 = 20 • А Т.Е.,

где А – количество мл 0,1 Н NaOH, израсходованного до I пункта.

Далее эту же пробу продолжают титровать до лимонно-желтого окрашивания, отмечают израсходованное количество NaOH от начального пункта – это II пункт титрования. Затем эту же пробу титруют до появления розовой окраски – III – пункт, отмечают израсходованное количество NaOH от начального пункта. Количество NaOH, необходимое для связывания общей HCl равно средне арифметическому количеств NaOH, пошедших на титрование до II и до III пунктов. Поэтому общая HCl рассчитывается по формуле:

Общая HCl = (Б+В)/2 • 100/5 = 10 • (Б+В) Т.Е.,

где Б и В – количества 0,1 Н NaOH, пошедшие на титрования до II и до III пунктов соответственно.

Связанная HCl = Общая HCl – Свободная HCl

Общая кислотность = В • 100/5 = 20 • В Т.Е.

Рекомендации по оформлению результатов работы и написанию выводов

Оформить результаты работы в виде таблицы:

Анализ желудочного сока

	№ пробы
1. Свободная HCl 2. Общая HCl 3. Связанная HCl 4. Общая кислотность 5. Лактат 6. рН
Вывод

Клинико-диагностическое значение работы.

Исследование желудочного сока проводят для выяснения функционального состояния желудка. При острых воспалительных процессах (острая язва, острый гастрит) наблюдается повышение содержания соляной кислоты (гиперхлоргидрия), а при переходе их в хроническую форму гиперхлоргидрия сменяется гипохлоргидрией. Атрофия, возникающая при злокачественном перерождении тканей, сопровождается ахлоргидрией (отсутствием соляной кислоты) и даже ахилией (полное отсутствие секреции). Наблюдая изменение секреции соляной кислоты можно уточнять диагноз и давать прогноз течения болезни. Лактат появляется в желудочном соке в результате молочнокислого брожения, которое возникает при снижении кислотности (развитие микрофлоры).

7. Контрольные вопросы по теме занятия (см. задание к занятию).

8. Литература для подготовки (см. задание к занятию).

9. Обсуждено на заседании кафедры 18. 04. 2010 г.

10. Учебное задание подготовлено асс. Голомолзиным Б.В.

ГОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия

Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

кафедра биохимии

 

Утверждаю

Зав. каф. проф., д.м.н.

Мещанинов В.Н.

_____‘’_____________2010 г

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

К ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗАНЯТИЮ № 19

(для студентов)

 

Факультеты: лечебно-профилактический, медико-профилактический, педиатрический

Курс: 2

1. Тема занятия: Общие пути обмена аминокислот. Биосинтез мочевины.

2. Учебная цель занятия: Изучить общие пути превращения и распада аминокислот в тканях, пути образования, использования и обезвреживания аммиака, причины токсичности аммиака.

3. Задачи занятия:

1. Ознакомиться с биохимическими механизмами взаимопревращений аминокислот и кетокислот, превращений аминокислот в биогенные амины, роль витамина В₆ в этих реакциях.
2. Изучить пути использования безазотистого остатка аминокислот: глюконеогенез, кетогенез, включение в ЦТК.
3. Ознакомиться с путями образования, использования и обезвреживания аммиака. Изучить биохимические причины, метаболические последствия гипераммониемии.
4. В лабораторной работе определить содержание мочевины в трех пробах сыворотки крови. Оценить диагностическое значение результатов.

4. Продолжительность занятия: 3 акад. часа.

5. Задание студентам:

1. В трех пробах сыворотки крови определить содержание мочевины. Объяснить полученные результаты.

6. Методические указания к выполнению самостоятельной работы на занятии.

Работа № 1. Определение мочевины в сыворотки крови.

Принцип метода: Мочевина образует с диацетилмонооксином в кислой среде в присутствии тиосемикарбазида и солей железа окрашенные вещества, интенсивность окраски которых пропорциональна содержанию мочевины в растворе.

Ход работы: В четырех пробирках готовят 4 раствора:

	Сыворотка №1	Сыворотка №2	Сыворотка №3	Стандартный раствор мочевины	Рабочий раствор
Проба №1 Проба №2 Проба №3 Стандарт	0,1 мл - - -	- 0,1 мл - -	- - 0,1 мл -	- - - 0,1 мл	4 мл 4 мл 4 мл 4 мл

Примечание: стандартный и рабочий раствор готовят лаборанты.

Содержимое пробирок перемешивают, закрывают пробирки фольгой и выдерживают на кипящей водяной бане 10 мин. При этом развивается розовая окраска. Затем пробирки охлаждают и замеряют оптическую плотность растворов на ФЭКе (зеленый светофильтр, измерение относительно воды).

Расчет: Сх = 16,67 • Дх/Дст мМоль/л,

Где Сх – концентрация мочевины в пробе,

16,67 мМоль/л – концентрация стандартного раствора мочевины,

Дх и Дст – оптические плотности соответственно пробы и стандарта.

Рекомендации по оформлению результатов работы и написанию выводов

Результаты работы оформить в виде таблицы:

Определение мочевины в сыворотке крови

Образец	Концентрация мочевины, мМоль/л	Выводы
Норма Сыворотка № 1 Сыворотка № 2 Сыворотка № 3	3,3-6,6	-