Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь FAQ Написать работу КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Аннотирование геномов. Белок-кодирующие последовательности и их предсказания.Содержание книги
Поиск на нашем сайте
Аннотация генома: описание функциональных (тканеснецифичность экспрессии генов-профили экспрессии, взаимосвязи между генами) и структурных (местонахождение кодирующих участков генов, регуляторных элементов) характеристик генома. Основной метод, как всегда, ПЦР (аннотирование невозможно без картирования, а физическое и цитогенетическое картирование – без секвенирования). Часто используют библиотеки кДНК (в т.ч. для генов, кодирующих структурные белки). Сравнивают сходство и различие АК и н.п. последовательностей, если схожи н.п. и тем более АК –предполагают сходство функции белка; если возможно, проверяют, синтезируя белки по АК и изучая их свойства. АК-предпочтительнее (эволюционируют медленнее, устойчивее к мутациям - замена 3-го н. в кодоне (синонимичные замены) обычно не влияет на АК; обычно короче, чем н.п.), из н.п.- чаще мРНК (старт и стоп-кодон-хорошие индикаторы, но они встречаются и в не-белок кодирующих н.п.). О возможности правильного сплайсинга можно судить по н.п. интронов (начало - GT,конец -AG), но не всегда достоверно. Нужно помнить о вырожденности генетического кода, различной предпочтительности кодонов и отклонениях от стандартного генетического кода, в зависимости от изучаемого генома. Разные н.п. могут кодировать схожие белки, поскольку АК одни и те же (вырожденность). У ПРО частота использования кодона прямо пропорциональна концентрации типов тРНК – только та, С которой максимальна, используется для синтеза белка; содержание GC-пар в геноме схоже с содержанием GC-пар только в 3-й позиции кодона (действует только мутационное давление, зависящее от скорости прямых и обратных мутаций, их синонимичности), во второй действует элиминирующий отбор (дефектный белок-гибель организма), в первой-оба; у ЭУ, особенно позвоночных, такнеспецифичность привела к выраженной мозаичности генома – GC-богатые(60%) и GC-бедные (30%) участки хр. Примеры. Аргинин у E.coli кодируется GGU и GGC, не используются CGA,CGG,AGA,AGG, хотя тоже кодируют аргинин. В мт-геноме UGA кодирует триптофан и не является терминирующим, AGA,AGG-терминирующие, а не кодируют аргинин, AUA кодирует метионин вместо изолейцина, в мит. растений CGG редактируется в UGG, прежде чем кодировать триптофан; UAA,UAG у простейших Tetrahymena,Paramecium в ядерных генах кодируют глутамин (а не стоп-кодон); у Mycoplasma capricolum UGA кодирует триптофан. Созданы сложные математические модели для расчёта как эволюционных расстояний АК-последовательностей, так и для определения вероятности замен (схожие модели созданы для подсчёта количества нуклеотидных замен и их вероятности, однако даже эти показатели видо-и иногда ткане-специфичны). В случае изучения н.п., преимущественно используется физическое картирование (маркерами служат короткие повторы, сайты рестрикции, минисателлиты, микросателлиты, фрагменты амплификации с произвольными либо «конкретными» праймерами, snp, ретротранспозоны, экспрессирующиеся н.п.; маркеры должны обладать полиморфизмом) и цитогенетические методы (основаны на гибридизации н.п., позволяет предположить «родственные связи» и время дивергенции как организмов, так и н.п., кодирующих интересующий белок). Существует 4 подхода локализации гена. Функциональное картирование: выделение в чистом виде белкового продукта гена, далее к нему по аминокислотной последовательности подбирают вырожденные праймеры и проводят ПЦР-скрининг геномных библиотек. Однако список генов, для которых эта информация была достаточно полной к настоящему времени практически исчерпан и большинство генов, функция которых была известна, уже клонированы и локализованы. Появление в конце 80-х годов множества высокополиморфных ДНК-маркеров дало возможность пойти в обратном направлении - от хромосомной карты к функции. Место гена (функция неизвестна) на карте устанавливают по результатам анализа сцепления гена с ранее локализованными генетическими маркерами и далее детально исследуется уже область генома рядом с маркером. Главным ограничением позиционного подхода является низкая разрешающая способность генетических карт - интервал между двумя соседними маркерами, в котором локализован ген, может оказаться слишком велик и недоступен физическому картированию. Для большинства генов, которые были локализованы, характерны структурные аномалии (как правило, это гены, ответственные за наследственные заболевания человека), что существенно облегчает заключительную стадию поиска гена - выделение и локализацию гена. Сейчас используют позиционно-кандидатное картирование - поиск на выявленном участке генома подходящих кандидатных генов (предполагается, что они кодируют нужный белок; можно синтезировать белок и проверить, или использовать мультиплексную(с несколькими праймерами) либо вложенную (2 пары праймеров, 2 ПЦР – продукты первой служат матрицей для второй) ПЦР).
|
||||
Последнее изменение этой страницы: 2016-07-11; просмотров: 378; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 18.226.226.158 (0.009 с.) |