Фармацевтическая ценность дождевых червей

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ ДОЖДЕВЫХ ЧЕРВЕЙ

 

В Китае, Корее, Вьетнаме и большинстве стран Юго-восточной Азии дождевые черви или люмбрикус используются тысячи лет для лечения различных заболеваний человека в свежем или высушенном виде (как правило, под названием “Земляной дракон”).

В Корее существует давняя традиция перед сном принять чашечку “супа из дождевых червей”. Это улучшает общее здоровье и предотвращает широкий ряд заболеваний. В некоторых ресторанах в Корее можно заказать чашечку супа из дождевых червей. Во Вьетнаме сухая или порошкообразная формы дождевых червей (которые получаются с помощью специальных методов, гарантирующих их чистоту) являются обязательными (принципиальными) ингредиентами вьетнамских лекарственных средств, известных как “волшебная медицина, которая может спасти жизнь за 60 минут”. Эта “волшебная медицина” часто используется при множественных нарушениях нормальной деятельности органов, которые происходят в результате бактериальных и вирусных инфекций. Эти препараты также используются при лечении болезней крови, геморрагических лихорадках, тяжелых ожогах и травмах. Это название поистине оправдывается, так как медицинский эффект наблюдается в течение 1 часа.

Дождевые черви обладают высоко эффективной иммунной системой, так как рак не может быть индуцирован у них в экспериментальных условиях, а также у них не бывает рака в природных популяциях.

Существует гипотеза, что иммунные компоненты дождевого червя Eisenia fetida могут убивать раковые клетки. Цитолитический белок дождевого червя эйсенияпор (молекулярная масса 38 Кд) из целомической жидкости требует присутствия сфингомиелина для того, чтобы лизировать эритроциты животных и фосфолипидные везикулы. У дождевых червей имеются два класса лейкоцитов, различающиеся по своей структуре: малые лейкоциты,размером 8-11 мкм, электронноплотные, позитивные для адгезивных молекул клеток человека (CD11a, CD45RA, CD45RO, CDw49b, CD54, для b2-микроглобулина и для Thy-1 и большие лейкоциты,размером 12-15 мкм, электроннопрозрачные, но отрицательные для этих тех же самых маркеров. Оба типа клеток являются отрицательными для других CD и MHC маркеров класса 1 и класса 11. Эти клетки кооперируются с литическими компонентами, участвуя в узнавании, связываются с ними, убивая и удаляя раковые клетки: (K562=NK-зависимые и NK-независимые=U937, BSM, CEM). Интересно, что литическая эффективность является существенно выше таковой с использованием лейкоцитов периферийной крови человека, что позволяет предположить высоко развитую эффективную эффекторную систему(ы), видимо, уникальную для дождевых червей. Понимание взаимодействий сфингомиелина с TNF-aльфа фактором или аналогом TNF-aльфа фактора дождевого червя при лизисе раковых клеток-мишеней может выявить предполагаемые мутации, которые привели к эволюции апоптоза. Важное значение имеет эффективность иммунитета у дождевых червей, вследствие которого у них не развивается рак.

 

Сфингомиелин зависимые компоненты:

Lysenin (лизенин):(41-kDбелок, вызывающий сокращение,и 42-kD белок, вызывающий слабое сокращение гладких мыщц кровеносных сосудов крысы, продуцируемые целомоцитами.Новый специфически связывающий сфингомиелин белок (мол. масса 41-kD) из целомической жидкости Eisenia fetida. Eiseniapore (эйзенияпор):38 kD литический компонент целомической жидкости Eisenia fetida связывает и разрушает липидный бислой только в присутствии сфингомиелина, поэтому он похож на лизенин.

Сфингомиелин независимые компоненты:

Фактор CCF-1 (42-kD белок из Eisenia fetida) лизирует различные линии раковых клеток животных; он не является фактором некроза опухоли (TNF), опосредующего лизис.Фетидины: 40-kD и 45-kD гемолитический и антибактериальный гликопротеины, присутствующие в целомической жидкости компостных червей (Eisenia fetida andrei); нет тестов против раковых клеток.Люмбрицин 1 -новый богатый пролином антимикробный пептид дождевых червей Lumbricus rubellus, который убивает широкий спектр микроорганизмов без гемолизиса эритроцитов человека.Предполагают наличие компонента иммунной системы дождевых червей, которая защищает их от развития опухолей, и, может быть, поэтому у них раковые процессы или никогда наблюдаются, или не индуцируются. Дождевые черви обладают большей продолжительностью жизни, чем большинство насекомых. У дождевых червей никогда не наблюдался рак в естественных условиях, а все попытки вызвать у них рак в экспериментальных условиях были безуспешны.

Д-р Do Tat Loi, широко известный ученый и автор книги “Вьетнамская природная медицина” (Ханой, Вьетнам, 1999), является в течение долгого времени директором Ханойского национального института фармацевтики во Вьетнаме. Он описывает благотворное влияние препаратов из дождевых червей на здоровье человека. Так, согласно д-ру Ба Х. Хоанг (д.м.н. и д.ф.н), который воспитал три поколения врачей, владеющих приемами западной и китайской медицины, описывает результаты многочисленных клинических испытаний во Вьетнаме, которые демонстрируют безопасность и эффективность препаратов из дождевых червей для состояния здоровья при травмах, гипертонии, артериосклерозах, припадках и эпилепсии, проблемах мочеполовой системы, малярии, лихорадках, инфекциях кроветворной системы, прыщах и кашле. Многочисленные испытания показали, что лекарственные препараты из дождевых червей обладают большей эффективностью, чем препараты традиционной аллопатической медицины. К сказанному выше, следует добавить, что д-р Ба использовал дождевых червей для лечения воспалительных заболеваний кишечника и клеточного кислородного голодания.

Дождевые черви - это почвенные животные, и они обладают повышенным обменом кислорода и антиокислительными свойствами. Поэтому они успешно используются для дополнительного улучшения состояния здоровья при таких заболеваниях, как боли в суставах, мигрени и бессоница. Но согласно д-ру Ба наибольший эффект препаратов из дождевых червей наблюдается, как следствие их успокаивающего воздействия на печень. Д-р Ба считает, что печень играет ключевую роль в состоянии здоровья и течении заболеваний у человека: “Мы сочетаем дождевого червя, который является холодным по своей природе, с травами, которые имеют очень близкие свойства, но теплые по природе, что приводит к получению уравновешенных природных препаратов, которые способны не только поддерживать печень в нормальном состоянии, но и освобождать печень от скоплений (шлаков), возвращать функциональную гипоксию (потеря клеточного кислорода) и усиливать антиоксидантную функцию и детоксикацию печени, что, в конечном счете, помогает бороться и предотвращать большинство проблем, связанных с печенью, которые являются следствием индустриализации жизни общества”.

ПРЕПАРАТ “БОЛУОКЕ” (ЛЮМБРОКИНАЗА)

 

Торговая марка препарата Люмброкиназы. Получают фермент люмброкиназу из ткани дождевых червей с помощью солевой экстракции с последующей лиофильной сушкой.

Преимущества:

- переваривает фибриноген и подавляет адгезию тромбоцитов;

- существенно снижает содержание фибриногена;

- ингибирует истинные пути коагуляции и активирует фибринолизис через увеличение t-РА-активности. Усиливает приток крови и кислорода в клетки.

лабораторных опытах было показано, что 40мг тромб мог быть полностью растворен люмброкиназой при концентрации 1250 мкг/мл в течение 30 минут.

Во всем мире около 12 млн. человек умирает ежегодно от заболеваний сердца и цереброваскулярной болезни. Китайские ученые применяют люмброкиназу и активатор плазминогена, чтобы решить эту проблему. Этот фермент может превращать плазминоген в плазмин, завершая фибринолизис. Таким образом, фибрин растворяется в тромбах.

Данный препарат - это новый продукт на рынке Северной Америки. Это революционный продукт, с помощью которого растворяются тромбы без риска геморрагий. Клинические исследования показали, что пациенты, принимающие препарат БОЛУОКЕ в течение одного месяца полностью выздоравливали. Применение препарата было высоэффективным при его использовании.

Он представляет собой сухой порошок из дождевого червя Lumbricus rubellus, в котором содержатся фибринолитические ферменты.

Клинические испытания препарата БОЛУОКЕ показали, что он обладает существенными эффектами при предотвращении тромбозов и лечения эмболической болезни, а также он исключительно действует при лечении ишемического цереброваскулярного заболевания. Препарат может широко применяться для лечения инфаркта миокарда, васкулярной неожиданной глухоты, ретинальной артериальной и венозной закупорки сосудов, вызываемой слепотой, и легочного инфаркта.

 

ЛЮМБРОКИНАЗА (F-III ПРОТЕАЗА или ФИБРИНОЛИТИЧЕСКАЯ ЭНДОПЕТИДАЗА)

 

Дождевые черви (олигохеты) являются одними из первых организмов на Земле, которые при своей эволюции стали обладать иммунологическим узнаванием и иммунологической памятью. В их тканевой жидкости, так называемой целомической жидкости содержатся агглютинины, опсонины, лизины, митогены и факторы, ингибирующие макрофаги. Эволюционное положение дождевых червей показывает, что генетические основы макромолекул, которые обладают этими свойствами, совершенно не изменились.

В работе Marino с соавт. (1998) показано, что медь и кадмий, но не цинк связываются с металлотионеиновыми гомологами у навозного червя E. foetida, выдерживаемого в почвах, обогащенных тяжелыми металлами. Выдвинуто предположение, что медь не индуцирует эффективного синтеза тионеинов в ткани навозного червя, но может связываться с кадмий связывающим тионеином с помощью замещения кадмия в молекуле, так как медь-тионеин является более стабильным комплексом.

ЛЮМБРИЦИН

 

Cho с соавт. (1998) выделил в чистом виде и исследовал новый антимикробный пептид из дождевых червей Lumbricus rubellus, названный Люмбрицином 1. Этот пептид был получен в гомогенном состоянии с помощью аффинной хроматографии. Пептид состоял из 62 аминокислотных остатков, причем пролин составлял 15%, с молекулярной массой 7231 D. Показано, что данный пептид обладал антимикробной активностью in vitro против широкого спектра микроорганизмов при отсутствии гемолитической активности.

 

ЛИЗЕНИН

 

Лизенин (также называется эйсенияпор) является белком с мол. массой 33 Кд, состоящий из 297 остатков аминокислот. Он был очищен из целомической жидкости навозного червя E. foetida (Naoshi Ochta c соавт., 2000). Этот фермент специфически связывает сфингомиелин. Показано, что лизенин продуцируется в свободных хлорагоцитах в просветах тифлозоля. Также сообщалось, что лизенин обладает антибактериальной активностью.

Обзор Kobayshi с сотр. (1997) “Лизенин - новый биоактивный белок, выделенный из целомической жидкости дождевого червя E. foetida; структура, секреция и биологическая активность”.

Yamaji с сотр. (1998) выделили в чистом виде из целомической жидкости компостного червя белок, названный лизенин с молекулярной массой 41 Кд, индуцирующий лизис эритроцитов. Этот белок связывает сфингомиелин на мембранах эритроцитов. Это может быть полезным инструментом как зонд для исследований молекулярного действия и функций сфингомиелина на биологических мембранах.

Grdisa с сотр. (1998) изучали фибринолитические и антикоагуаляционные активности у компостного червя. Ими был выделен белок, подобный гамма-фактору некроза опухоли (TNF-альфа). Обнаружено, что этот белок обладал 100%-ной эффективностью против трипаносомы Т. brucei, убивая их в течение 1 часа.

В обзоре Goldova и Breza (1999) “Дождевые черви (Люмбрициды) при взгляде ветеринарного паразитолога” (словацкий журнал Folia Veterinaria) описано, что, например, Protozoa из рода Monocystis являются специфическими паразитами, находящимися в семенных железах дождевых червей. Они, по-видимому, являются естественными регуляторами численности популяций дождевых червей в природе. Дождевые черви также могут быть промежуточными хозяевами паразитов, которые играют важную роль для домашних и диких животных и птиц.

Hernandes с сотр. (1999) изучал популяцию красных дождевых червей. Характеристики популяции были следующими: цвет - темнокрасный; размер - 11+/-0,92 см; диаметр 5+/-0,44 мм; жизненный цикл - 58+/-9,90 дней.

Из компостного червя E. foetida Jang и Jang (1997) выделили в очищенном виде кальмодулин связывающие белки с помощью ионообменной хроматографии. Имелось три типа этих белков с молекулярной массой 30, 49 и 62 Кд.

Krachmar с сотр. (1997) изучали аминокислотный состав двух видов дождевых червей L. rubellus и E. foetida foetida californica. У обоих видов определяли содержание 17 аминокислот. У обоих видов аминокислоты лейцин и гистидин являлись преобладающими незаменимыми аминокислотами, но наименьшее количество во всех случаях было обнаружено метионина. Из заменимых аминокислот преобладали глютаминовая и аспарагиновая аминокислоты. Количественные различия по содержанию аминокислот у дождевых червей различных популяций соответствовало их окружающей среде, в которой они обитали.

Ukena c сотр. (1995) впервые выделили из компостных червей вида E. foetida окситоцин родственный пептид, названный ими аннетоцин (от Аннелида). Показано, что аннетоцин стимулирует спонтанное сокращение пищеварительного канала дождевого червя. Аннетоцин по сравнению с окситоцином и вазотоцином был в 10 раз более эффективным. Показано, что аминокислотный остаток в третьей позиции в пептиде играет важную роль в усилении возбуждающего действия на гладкие мышцы.

Fujino c сотр. (1999) исследовали роль пептида аннетоцина и физиологические функции в репродукции и осморегуляции.

Niida с сотр. (1997) выделили из компостного червя E. foetida мышечноактивный белок - пептид.

Еще в 1937 году N.V.Philips запатентовал в Великобритании средство против рахита, получаемое из дождевых червей (патент GB471994). Этот препарат представлял собой жирорастворимую фракцию, содержащую в своем составе провитамин D.

Zhong с сотр. в 2002 году (патент WO02053590) расшифровали нуклеотидную последовательность гена, кодирующего фибринолитический фермент Z. Описана технология рекомбинантных молекул, позволяющая получать этот фермент генноинженерным способом для лечения различных заболеваний (тромбозы, эмболии). Представлены прописи медицинских препаратов, содержащих фибринолитический фермент Z. Ген содержит 720 нуклеотидных остатков, кодирующих белок из 240 аминокислотных остатков. Сконструирована плазмидная рекомбинантная ДНК рЕТ28а.

Японские исследователи Moffa Makaajii с сотр. (2002) запатентовали способ получения белка из целомической жидкости индийского вида дождевого червя Pheretima postuma, который обладает свойством обездвиживать сперматозоиды, что может быть использовано для создания контрацептивных средств. Показано, что данный белок совершенно не токсичен (патент JP2002308897).

Японские исследователи Kobayachi Toshihide с сотр. (2002) запатентовали в США способ получения молекулярного зонда на сфингомиелин, обладающий строгой специфичностью для сфингомиелина и имеющий низкую степень цитотоксичности (US2002168725). Зонд - это молекула белка лизелина, из дождевых червей. Показано, что фрагмент молекулы лизелина I с 1 по 48 аминокислотный остаток и фрагмент с 51 по 300 аминокислотный остаток молекулы лизелина 3 были наиболее специфичны для сфингомиелина.

В состав китайских таблеток против ревматизма входит как один из компонентов дождевой червь (патент CN1050681, 1991 г., Zuokun Shao et al.).

В патенте Ю.Кореи (KR8301122, 1983 г.. You Jae Seouk) описывается рецепт приготовления из дождевых червей съедобного продукта. Для удаления специфического запаха дождевых червей дезодорируют с помощью погружения их на 20-60 минут в раствор солей кальция (1-3% Са(ОН)₂+СаРО₃ при рН 8-12. Затем червей обжаривают в растительном масле (кукурузное, из земляного ореха или кунжутное) при 110-180^О С в течение 1-3 мин, жир удалялся и из червей приготовляют муку, таким образом, получая съедобный порошок из дождевых червей.

В обзоре М. Salzet “Нейроэндокринная система аннелид” (Can.J.Zool., 2001) рассматриваются некоторые пептиды, специфичные для рода Аннелид, структура, биологические функции, в особенности осморегуляция, репродукция и нейроиммунная защита. Рассмотрены факторы осморегуляции, диуретические пептиды, антидиуретические пептиды, пептиды, влияющие на репродукцию. Считается, что большинство молекулярных и клеточных стратегий появились у организмов, по крайней мере, 500 млн лет тому назад или даже раньше. По всей вероятности, эти нейроиммунные системы имеют происхождение от “простых” животных (пиявки, черви, моллюски и т.п.).

В обзоре Insel и Larry (2000) «Нейропептиды и эволюция социального поведения» сделан анализ сравнительных исследований за последние годы о роли нейропептидов в эволюции социального поведения. Аннетоцин дождевых червей экспрессируется в субэзофагальных ганглиях и участвует в регуляции откладки яиц и репродуктивности (Satake H., Taruwa H., Matsushima O.: Evedence for conservation of the vasopressin/oxytocin superfamily in Annelida. J. Biol. Chem., 1999,274,5989-5998). Эти результаты показали, что от нематоды до млекопитающих нейропептиды играют важную роль в социальном поведении.

Обзор Lefebvre и Salzet «Нейроиммунная система у Аннелид» (Current Pharmaceutical Design, 2003,8, 99-110). Нейропептиды, обнаруживаемые в нервной системе или иммунной системе у Аннелид, находятся в свободном состоянии и являются сигнальными молекулами и они служат гормонами. У Аннелид нервные ткани не содержат анатомических корреляций с гипоталамусом или гипофизом. Среди 30 нейропептидов, существующих в нервноэндокринной системе Аннелид, большинство имеет родственные последовательности таковым, выделенным у позвоночных. Нейроэндокринные процессы подобные у млекопитающих обнаруживаются у беспозвоночных. Вероятно, что эти ситему произошли от «простых» животных. Можно даже сказать, что нейроэндокринные системы млекопитающих подобны таковым класса Аннелида (Класс Кольчатые черви).

Донецкий с сотр. (1996) в патенте RU2063979 «Пептид, показывающий последовательность окситоцина».

У E. foetida приведены структуры 4-х нейропептидов, а также представлены первичные последовательности пептидов семейства окситоцин/вазопрессин. У беспозвоночных ген пептида, родственного окситоцину, был обнаружен у дождевых червей (Oumi et al., 1994).

Cтруктура аннетоцина: H-Cys-Phe-Val-Arg-Asn-Cys-Pro-The-Gly-NH_2.

Структура окситоцина: H-Сys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH₂.

Matsushima Osami запатентовал способ химического синтеза пептида аннетоцина в 1995 году (патент JP7138288). Так как этот пептид имеет дисульфидный мостик между первым и шестым остатками цистина, то данный пептид возможно химически синтезировать на приборах автоматического синтеза пептидов.

В 1996 году Oumi с сотр. доказал существование окситоцин родственного пептида у олигохет, пептид был выделен, очищен и была определена его структура. Он имел семь из девяти аминокислотных остатков, которые были общими для лизинконопрессина пиявок. Оба эти пептида могут принимать участие в осморегуляции через пульсирующее сжатие и движения, встряхивающие нефридиальные пузырьки. Более того, аннетоцин индуцирует откладывание коконов у дождевых червей, что сопровождается секрецией слизи из клителлума (Fujino et al., 1999).

Показано, что у E. foetida аннетоцин участвует не только в осморегуляции через нефридиальные функции, но и этот пептид стимулирует откладывание яиц (Oumi et al., 1994, 1996). Аннетоцин индуцирует ряд изменений в поведении дождевого червя. Эти стереотипные черты поведения выражаются в характерных вращающихся движениях тела червяка, характерных изменениях формы участков тела и секреции слизи из клителлума. Каждое из этих поведений хорошо известно и связано с образованием кокона, в котором располагаются яйца. Так, например, при введении дождевому червю аннетоцина (5 нмол) происходило откладывание яиц. Эти результаты показывают, что аннетоцин играет ключевую роль в запуске стереотипного поведения откладывания яиц у аннелид, имеющих клителлум.

Японские исследователи запатентовали в 1988 году в Японии JP19880094541, а в 1991 году в США патент US5024844 “Процесс получения сухого порошка из дождевых червей и антигиперлипемического, антидиабетического, антигипертонического и антигипотонического препаратов, содержащих сухой порошок дождевых червей в качестве активного ингредиента”. Для этого живых дождевых червей промывали в свежей воде, слегка подкисленной для промывания алиментарного канала от почвы, измельчали, замораживали и высушивали в вакууме при 10 мм Pb от 10 до 100 часов и температуре от -60 до +80^O С. Получаемый таким способом порошок мог быть комбинирован с подходящими фармацевтическими носителями для составления фармакологических прописей, которые являются полезными при лечении или предохранении ожирения, диабета, гипертонии и гипотонии (регуляция давления крови).

Изобретение относится к процессу получения сухого порошка из дождевых червей с целью производства фармацевтических препаратов для лечения ожирения, диабета и гипертонии или гипотонии (регуляция кровяного давления). Препарат сухого порошка из дождевых червей обладает высокой степенью безопасности и может быть комбинирован с фармакологически подходящими носителями для создания фармакопейных композиций.

Синтетические органические соединения, используемые для борьбы с ожирением, такие как никомол и клофибрат вызывают побочные эффекты (кровоподтеки на лице и кишечные расстройства), а последний препарат вызывает гепатому у животных. Дальше описываются недостатки известных препаратов для лечения диабета и гипертонии и гипотонии.

В восточных странах дождевые черви, называемые “дилонг”, используются как лечебное средство с древних времен. Известны литературные данные о фармакологических свойствах дождевых червей.

Shinryu Ofuchi в статье “Дождевые черви и человеческая жизнь” (1947) и Nikiji Hatai в статье “Дождевые черви” (1989) сообщали, что дождевые черви обладают рядом фармакологических свойств. Так, например, препараты из дождевых червей эффективно уменьшали размер камней в мочевом пузыре и способствовали удалению их из тела, эффективны при лечении желтухи, вызывают и облегчают роды, усиливают рост волос, а также являются укрепляющими, тонизирующими и противовоспалительными средствами. С другой стороны, они сообщали о некоторых токсических воздействиях дождевых червей. Например, происходило поражение нервной системы и происходил гемолиз эритроцитов.

В “Фармакологическом словаре Китайской Нарадной Республики” описываются два типа дождевых червей (дилонг). Один из них L. kwangtungesis получают разрезанием, промыванием от содержимого кишечника и высушивают на солнце или в тени или при низкой температуре. Другой вид L. nativus получают убиванием с помощью золы от растений, освобождением от золы и высушиванием на солнце в тени или при низкой температуре. Ежедневная доза составляет от 4,5 до 9,0 г при лечении астмы, гипертонии, воспалений, конвульсий, паралича половины тела, а также для обезболивания суставов, для улучшения циркуляции крови и как диуретическое средство.

Matsuura Yakugyo описывает, что настойка из дождевых червей (экстракция этиловым спиртом) является средством против гипотонии.

Как сообщал Takuo Okuda в “Энциклопедии природной медицины” в 1986 году дилонг (дождевые черви) используются как противоспалительное, обезболивающее, диуретическое и антидотовое (противоядие) средство.

Mamotu Tanaka (1949) описывал результаты экспериментов с дождевыми червями. Небольшие кусочки ткани дождевого червя освобождались от почвы и экстрагировались на кипящей водяной бане. Затем экстракт концентрировали, добавляли этиловый спирт, преципитированный материал (люмброфебрин) растворяли в растворе Рингера. Такой раствор вводили внутривенно анестезированному коту, что вызывало падение кровяного давления. Кроме того, происходило ускорение коагуляции крови.

Kenjiro Ikawa (1960) сообщал, что полученный препарат из дождевых червей (экстракция физиологическим солевым раствором, затем этиловым спиртом или ацетоном, выпаривание экстракта и растворение в солевом растворе) при внутривенном введении кроликам вызывал падение давления крови.

В “Энциклопедии китайской медицины” (1980) описываются опыты на собаках и кошках по введению внутривенно препаратов из дождевых червей, что вызывало падение давления крови. Однако, при оральном введении препарата такого эффекта не наблюдалось. Однако, на другой странице сообщается, что оральное введение 10 мл 40%-ной настойки (40 г червей в 100 мл 60%-ного спирта) три раза в день в течение 30-60 дней эффективно снижало давление крови. Если вводить по 2 мл настойки три раза в день дождевых червей (полученной с помощью удаления гипоксантина двухлорной ртутью и последующим выделением гипотензивных компонентов с помощью ионообменной хроматографии), то можно эффективно контролировать давление крови.

Для получения сухого порошка из тканей дождевых червей применяют несколько способов:

1) Дождевых червей разрезают вдоль, освобождают их от содержимого кишечника, сушат на солнце или в тени при 50^О С.

2) Дождевых червей убивают добавлением золы от растений или древесным углем, очищают от почвы и сушат, как описано выше.

3) Дождевых червей освобождают от почвы, находящейся в их кишечнике, а затем сушат с применением золы от растений или углем.

Все вышеописанные методы сушки червей просты, экономичны и выполнимы даже в домашних условиях. Однако если сухой порошок дождевых червей получен вышеописанными методами, то хранить его надо в закрытом состоянии в холодильнике при 0-5^О С или в комнате при 5-45^О С, но не более 6 месяцев. В хорошо укупоренном состоянии их можно хранить до 1 года.

Лечебное средство из дождевых червей можно использовать в любом виде: сухой порошок, настойки или таблетки.

В 1984 году Yoichi Ishii запатентовал в Японии способ получения белков и липидов из дождевого червя в качестве пищевой лечебной добавки (патент JP216572). Однако метод получения сухого порошка из дождевого червя является не эффективным. При этом ферменты, играющие важнейшую роль в проявлении фармакологического эффекта могут разрушаться или инактивироваться (сушка в вакууме при 80^O С в течение 20 часов).

Показано, что фибринолитические вещества, полученные из дождевого червя, имеют оптимум при значениях рН среды от 8 до 10, а стабильны они при рН от 5 до 10. Способы получения фибринолитических веществ запатентованы в ряде стран как патенты: Япония, 1983, 148824; США, 1983, 470394; 1991, 5024844; Великобритания, 1983, 8305359; Италия, 1983, 47795А; Франция, 1983, 03165; Германия, 1983, 3306944.1; Канада, 1983, 422034.

Эти авторы также имеют Европатент WO0383533 1990 года на эффективное терапевтическое средство от тромбозов и способ его получения. Очистка живых дождевых червей в слабокислой воде при рН от 3,0 до 6,5. Лиофильная сушка. В качестве субстрата для получения сухого порошка из дождевых червей служить могут различные виды из семейства Люмбрицид. Приведен список 15 видов червей: Lumbricus rubellus, L. terrestris, E. foetida, Allobophora caliginosa, Dendrobaena octaedra, Allobophora japonica Michaelsen, Drawida hattamimuzu Hatai, Pheretima divergens Michaelsen, Pheretima communissima, Pheretima agrestis, Pheretima Sieboldi Horst, Pheretima hilgendorfi, Pontodrilus matushimensis Jisuka, Tubifex hattai Nomyra, Limnodrilus gotoi и другие.

Доза принятия внутрь препарата зависит от возраста, веса, типа и стадии заболевания и т.п. Она может составлять от 1 мг до 15 г/день. Наиболее предпочтительны дозы от 2 мг до 9 г/день.

Сухой порошок имел влажность 10-11%, содержание золы 4-5%, сырого белка 56-59%, липидов 10-12%, сырого волокна 0,05-0,5%, и 14-18% растворимых безазотистых веществ.

Ниже приводятся данные химического анализа и аминокислотного состава препарата из дождевых червей.

 

Кальций от 0,53 до 0,58 г

Магний от 0,26 до 0,29 г

Калий от 0,88 до 0,96 г

Натрий от 0,54 до 0,58 г

Фосфор от 0,71 до 0,76 г

Железо от 0,08 до 0,09 г

Медь от 2,3 до 2,5 мг

Цинк от 7,5 до 8,1 мг

Марганец от 2,1 до 2,3 мг

 

 

Аспарагин от 6,5 до 7,5%

Треонин от 3,0 до 3,3%

Серин от 3,0 до 3,5 %

Глютамин от 8,3 до 9,2%

Пролин от 1,2 до 1,4%

Глицин от 3,3 до 3,6%

Аланин от 3,5 до 4,1%

Цистеин от 0,5 до 0,7%

Валин от 3,3 до 3,6%

Метионин от 1,0 до 1,2%

Изолейцин от 3,0 до 3,2%

Лейцин от 5,0 до 5,5%

Тирозин от 2,3 до 2,7%

Фенилаланин от 2,7 до3,0%

Триптофан от 0,3 до 0,4%

Лизин от 4,8 до 5,3%

Гистидин от 1,6 до 1,8%

Аргинин от 4,2 до 4,6%

 

Далее авторы описывают 19 примеров получения сухого препарата из дождевых червей различных видов, прописи составов и применение препарата для лечения пациентов от различных заболеваний.

Кроме того, в 1984 году Hisashi Mihara с сотр., описал 6 новых протеаз в дождевом черве (патент JP63184) и разработал получение препаратов, содержащих эти протеазы в качестве тромболитических средств (патент JP184131). Эти авторы запатентовали этот способ и в других странах (Ю.Корея, Австрия, Канада, Испания и др.).

В данном патенте авторы утверждают, что в литературных источниках не сообщалось о том, что сухой порошок из дождевых червей можно применять в качестве активного ингредиента лекарственных средств для борьбы с ожирением, для лечения диабета (гипогликемический эффект), и, более того, для регуляции (нормализации) давления крови при лечении пациентов как с гипертонией, так и гипотонией.

Запатентованный способ 1 получения сухого порошка из дождевых червей состоит в следующем: живых червей помещают в свежую воду, содержащую от 0,1 до 0,3% какой-либо органической кислоты (уксусная, лимонная, янтарная и т.п.) или неорганической кислоты (фосфорной, серной или соляной) или их солей калия или натрия. Значение рН таких растворов от 3 до 6,5. Температура от 1 до 25^О С, предпочтительно от 2 до 15. Время от 0,5 до 72 часов, предпочтительно от 1 до 40 часов. Затем черви промывают водой для удаления загрязнений. Червей замораживают при -5 или ниже, предпочтительно от -10 до -60^О С. Вакуумная сушка ступенчато от -60 до +90^О С. Вакуум 100 мм Hg или ниже предпочтительно 30 мм или ниже. Время от 5 до 100 часов, предпочтительно от 10 до 60 часов. Таким образом, получают стерильный порошок из дождевых червей.

Способ 2 отличается от способа 1 в том, что приготовленных очищенных дождевых червей, как описано в способе 1, гомогенизируют при температуре от 1 до 25, предпочтительно от 2 до 15^О С. В таблице представлены данные химического анализа порошка из дождевых червей.

 

Препарат 2 4 5

Влажность 10,4% 10,6% 9,5%

Сырые белки 53,8% 60,0% 48,8%

Сырые липиды 12,2% 9,3% 14,2%

Растворимые

безазотистые вещества 18,2% 14,4% 22,9%

Зола 5,3% 5,6% 4,5%

Сырые волокна 0,1% 0,1% 0,1%

Кальций 0,384 г% 0,389 г% 0,318 г%

Магний 0,194 г% 0,202 г% 0,166 г%

Калий 0,613 г% 0,624 г% 0,508 г%

Натрий 0,382 г% 0,388 г% 0,307 г%

Фосфор 0,504 г% 0,512 г% 0,417 г%

Железо 0,061 г% 0,064 г% 0,055 г%

Медь 1,72 мг% 1,78 мг% 1,40 мг%

Цинк 5,63 мг% 5,78 мг% 4,84 мг%

Марганец 1,54 мг% 1,66 мг% 1,39 мг%

 

В таблице приводятся данные по содержанию аминокислот (г/100 г) в препарате сухого дождевых червей.

 

препарат 2 4 5 Рыбная Мука

мука соевая

 

Аспарагин 6,68 7,52 6,06 - -

Треонин 2,97 3,34 2,68 2,56 1,95

Серин 3,06 3,42 2,77 - -

Глютамин 8,27 9,31 7,67 - -

Пролин 1,23 1,37 1,09 - -

Глицин 3,26 3,66 2,94 6,31 2,92

Аланин 3,69 4,14 3,41 - -

Цистеин 0,59 0,65 0,55 0,59 0,90

Валин 3,26 3,63 2,99 2,83 2,44

Метионин 1,03 1,12 0,95 1,84 0,72

Изолейцин 3,02 3,38 2,83 2,43 2,25

Лейцин 4,89 5,49 4,49 4,27 3,42

Тирозин 2,47 2,77 2,21 1,91 1,71

Фенилаланин 2,73 3,02 2,55 2,37 2,14

Триптофан 0,32 0,38 0,29 - -

Лизин 4,74 5,28 4,49 1,25 1,06

Гистидин 1,65 1,83 1,55 4,53 3,07

Аргинин 4,18 4,47 3,81 4,20 3,53

 

Из данных таблиц можно видеть, что препараты сухого порошка из дождевых червей, получаемых по методу 1 и 2, обогащены белками, липидами и металлами и содержится больше незаменимых аминокислот.

Примеры. 1 кг живых червей L. rubellus промывали в воде, помещали в 4 л кислого раствора (рН 6,2), оставляли при 8^О С на три часа. После лиофильной сушки получали 265 г сухого препарата ДЧ. В желатиновые капсулы помещали по 150-250 мг сухого порошка. Эти же авторы запатентовали во Франции в 1989 году патент FR2630008.

В 1983 году японские исследователи Sumi Hiroyuki и Mihara Hisaahi запатентовали в Великобритании (GB2116565), а в 1986 году в США способ получения тромболитического вещества (US4568545). В качестве фибринолитических и тромболитических ингредиентов, экстрагируемых и очищенных из ткани дождевых червей, предложен препарат, содержащий шесть протеолитических ферментов. Описаны методы получения этих протеаз, свойства и характеристики. Представлены различные медикаментозные формы препаратов и описаны результаты применения в клинических испытаниях при оральном введении новых протеаз.

В состав для наружного применения при лечении ревматизма и полиартритов (патент Германии, 1986, DE3519736) Westhoeffer рекомендует в автолизат дождевых червей в комбинации с водным экстрактом коры бука и камфорным спиртом.

Известен китайский патент CN1102098 (1995, Tianye Yang) на способ получения жидкого лекарственного средства для лечения ожогов. Делают смесь из 20-49 г сахара, 50-80 г живых дождевых червей. Образующуюся жидкость собирают, фильтруют и добавляют 0,5-1,0 г борного спирта. Этот препарат используют для лечения различного рода ожогов (огонь, кипяток, электрический). При этом не требуется пересадки ткани, перевязок и дезинфекции поверхности раны.

В китайском патенте CN1114202 (Xinguan Du, 1996) запатентовано как противораковое средство препарат, полученный из дождевых червей. Лиофильно высушенный порошок экстракта из тканей дождевых червей либо помещали в капсулы, либо смешивали с медом. Препарат обладает высокими питательными свойствами, низкой стоимостью и фармакологическими свойствами.

В патенте США китайские исследователи Li Yu-Ten и Li Su-Chen (1991, US5047337) описывают способ получения фермента церамидглюконазы, который расщепляет олигосахариды от гликофосфолипидов и алкилгликолипидов. Фермент не гидролизует моносахариды. Фермент выделен из мышечной ткани дождевых червей и пиявок. Фермент очищен с помощью экстракции, фракционирования сульфатом аммония, гель-хроматографией и гидрофобной хроматографией с целью освобождения его от экзогликозидазной активности. Описываются методы получения олигосахаридов с помощью гидролиза гликолипидов, алкилгликолипидов, гликосфинголипидов с помощью данного фермента. Источником церамидглюканазы являются пиявки и Люмбрициды. У них этот фермент имеется в относительно высоких концентрациях, хотя и присутствует экзогликозидазы, которую необходимо удалять при очистке препарата.

Ишии Йечи с сотр. в 1993 году запантетовали в США способ терапевтического лечения тромбозов (US186944) с помощью препаратов, полученных из дождевых червей. Рассмотрены недостатки лечения тромбозов с помощью урокиназы и стрептококкокиназы. Сообщается о преимуществах применения препаратов из дождевых червей. Бельгийский ученый De Baetselier запатентовал способ получения пептидов и нуклеиновых кислот из компостного червя и препараты на их основе для лечения рака, трипаносомных инфекций, микробных инфекций, а также заболеваний иммунной системы и воспалений. Представлена первичная структура полипептида и гена, его кодирующего (WO99/31229).

Альфа-фактор некроза опухоли (TNF-альфа) является многофункциональным цитокином, продуцируемым позвоночными животными, главным образом с помощью активированных макрофагов. In vitro он обладает несколькими биологическими эффектами, вызывая гибель трансформированных клеток и паразитов. Кроме того, у него имеется лектинподобные свойства, что проявляется в трипанолитической активности против трипаносом таких, как Tripanosoma brucei.

Система активизации профенолоксидазы является важным защитным механизмом у большинства беспозвоночных животных. Эта система основана на узнавании бактериальных антигенов таких, как липополисахариды или пептидогликан и бета-1,3-гликан, которые являются главными компонентами клеточных стенок дрожжей и грибов. Активизируемый фермент профенолоксидаза катализирует о-гидроокисление монофенолов, также хорошо как и дифенолы до хинонов, которые последовательно полимеризуются неферментативно, образуя меланин. Меланин и его предшественники, вовлеченные в систему активизации профенооксидызы, имеют цитотоксические и антимикробные свойства, и принимают участие в широком ряде других биологических процессов (фагоцитоз, опсонизация, инкапсулирование, образование включений, дегрануляция и заживление ран.