Работа № 3. Бактерицидная функция кожи

Цель: зарегистрировать результаты опыта по изучению бактерицидных свойств кожи (см. теоретическую справку)

Методика.

Для определения бактерицидной активности кожи суточную бульонную культуру кишечной палочки (1:50000) наносят на внутреннюю поверхность предплечья и распределяют равномерно шпателем. Делают отпечаток на предметное стекло со средой Эндо с одного участка исследуемой кожи, а через 15 минут - со смежного. Инкубируют посевы 18-24 часа при 37°С и подсчитывают колонии на 3 см² поверхности каждой пластины.

Индекс бактерицидности (ИБ) вычисляют по формуле:

 

ИБ = К1-К2 х100

К1

 

где K l - количество колоний сразу после нанесения на кожу тест-штамма микроорганизмоов, К 2 - количество колоний через 15 минут после контакта с кожей.

У здоровых людей ИБ равен 90-100%

 

Дано:

1) посев-отпечаток с участка кожи с тест-культурой на предметном стекле со средой Эндо.

 

 

Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

2) посев-отпечаток со смежного участка кожи через 15 мин после нанесения тест-культуры

 

 

Результат:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Работа № 4. Бактерицидная активность лизоцима слюны

Цель: определить активность лизоцима слюны (см. теоретическую справку)

 

Дано: набор для определения активности лизоцима: раствор слюны 1:20, взвесь суточной агаровой культуры микрококка, физиологический раствор, пипетки, пробирки.

 

Методика:

В пробирки «К» и «О» внести по 0,5 мл физ. раствора и раствора слюны, в каждую пробирку добавить по 0,5 мл взвеси культуры микрококка, встряхнуть; поставить в термостат на 30 мин.

«К» «О»

Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 5. Бактерицидная активность сыворотки крови (БАСК)

Цель: Определить БАСК по отношению к кишечной палочке по методике, предложенной А.Д. Евтушенко с соав., 1982

 

Методика:

Из 18-ти часовой культуры кишечной палочки методом серийных разведений готовят рабочую концентрацию до 40-50 тыс. м. т. в 1 мл. Рабочую взвесь тест-микробов в количестве 0,1 мл высевают на чашку Петри с МПА. Шаблоном диаметром 20 мм по поверхности агара с культурой микроорганизмов делают отверстия (в центре и по периферии отмечают контрольные отверстия, на которые не наносится испытуемая сыворотка). На каждую площадку с посевом тест-культуры наносят пипеткой 0,05 мл исследуемой сыворотки. Через 24 часа инкубации в условиях термостата проводят подсчет выросших колоний, как на опытных, так и на контрольных площадках. Бактерицидную активность сыворотки крови рассчитывают по формуле:

 

БАСК(%) =100 х (1 - конечное количество жизнеспособных бактерий)

исходное количество бактерий

 

Нормативное значение - 80 - 90%

Дано: опыт по определению БАСК у четырех пациентов (см. теоретическую справку)

 

 

Результат:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Работа № 6. Фагоцитоз

 

Цель: Микроскопировать готовые препараты-мазки стафилококка и гонококка. Зарисовать в тетради картину фагоцитоза микроорганизмов. Выявить отличительные особенности завершенного (№ 1) и незавершенного (№ 2) фагоцитоза в препаратах-мазках. Сделать вывод.

Методы оценки функциональной активности фагоцитирующих клеток

Одной из основных функций гранулоцитов (полиморфноядерных лейкоцитов) и моноцитов крови является эндоцитоз - захват различных объектов: инертных частиц (латекс, уголь), живых или убитых микроорганизмов (бактерии, дрожжеподобные грибы). Количественную оценку фагоцитарной активности гранулоцитов и моноцитов проводят в цельной крови, в лейкоцитарной взвеси или в обогащенных фракциях фагоцитирующих клеток. В качестве стандартных объектов фагоцитоза используют монодисперсные частицы латекса диаметром от 1,0 до 2,0 мкм, суспензию убитых нагреванием клеток бактерий или дрожжеподобных грибов.

Показателями клеточных факторов неспецифической защиты организма являются: активность фагоцитоза (АФ) и фагоцитарный показатель (ФП).

Определение:

- обнаруживают под микроскопом 10-20 лейкоцитов, передвигая предметное стекло так, чтобы под объективом находился край препарата из исследуемой крови;

- подсчитывают число микробов, захваченных каждым обнаруженным лейкоцитом.

ФП - среднее число микробов в одном лейкоците. Норма 4,2.

АФ - процент лейкоцитов, участвующих в фагоцитозе. Норма 60%.

Дано: препараты-мазки, таблицы

 

 

Результат:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Вывод:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

_______________________________________________________________________________

Самостоятельная работа во внеурочное время

Схема классификации препаратов:

Название

Классификационное положение