Тема: вирусы – возбудители медленных инфекций, гепатита, спида.

Цель занятия: изучить биологические свойства возбудителей медленных инфекций, гепатитов А, В, С, D, Е и СПИДа, познакомиться с эпидемиологией, патогенезом и профилактикой заболеваний, освоить методы и особенности диагностики данных заболеваний.

План занятия.

1. Вирусы – возбудители медленных инфекций. Персистенция вирусов.

2. Вирусный гепатит А. Свойства возбудителя, эпидемиология, патогенез заболевания, профилактика.

3. Вирусный гепатит В. Свойства возбудителя, пути заражения, патогенез, профилактика заболевания.

4. Вирусные гепатиты С, D и Е. Свойства возбудителей, пути заражения. Роль в патологии человека.

5. Методы и особенности диагностики вирусных гепатитов.

6. СПИД, его возбудитель, пути заражения, проявления болезни. Иммунологическая и вирусологическая диагностика СПИДа.

7. Иммуноферментный метод и его использование для диагностики вирусных заболеваний.

 

Задания для выполнения лабораторной работы.

1. Провести выявление в крови антител к вирусу СПИДа иммуноферментным методом.

Реакцию осуществляют в специальных полистероловых пластинках с лунками, на которых адсорбирован антиген вируса СПИДа. При добавлении в лунку сыворотки больного, содержащей противовирусные антитела, происходит их связывание с антигеном. После отмывания в лунки последовательно вносят антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом, а затем хромоген, который при взаимодействии с ферментом разлагается и окрашивает лунку в желтый цвет. Количество разложившгося субстрата, а следовательно, и цвет лунки будут зависеть от количества антител в исследуемой сыворотке.

Рис. 20. Схема проведения иммуноферментного метода для выявления антител.

Примечание: 1-пластиковая основа; 2-антиген; 3-исследуемые антитела в сыворотке; 4-антиглобулиновые антитела, меченные ферментом; 5-субстрат для фермента.

 

Параллельно проводят контрольный опыт, где вместо исследуемой сыворотки в лунку вносят физиологический раствор.

В контрольной пробе результат должен быть всегда отрицательным.

Этапы иммуноферментного метода.

1. Внести 0,2 мл соответствуюшего антигена в лунки для его сорбции на полистироловою основу. Инкубировать 3 ч при 37°С или сутки при 4°С (обычно сорбцию антигена производят заранее).

2. Выполнить трехкратную отмывку лунок водой в течении 5 мин с целью удаления несорбированного антигена.

3. Внести в лунки 0.2 мл исследуемой сыворотки и инкубировать 1 ч при 37°С.

4. Отмыть ингредиенты.

5. Внести 0,2 мл антиглобулиновых антител, меченных ферментом пероскидазой, и инкубировать 2 ч при 37°С.

6. Отмыть ингредиенты.

7. Внести 0.1 мл раствора субстрата (хромогена) и инкубировать 15 мин при комнатной температуре. В процессе инкубации в присутствии пероксидазы хромоген окрашивается в желтый цвет. В качестве хромогена используют ортофенилендиамин или аминосалициловую кислоту.

 2. По демонстрационным препаратам учесть результат ИФМ, сделать заключение.

 

Вопросы для обсуждения.

1. Общая характеристика вирусов, вызывающих медленные инфекции. 2. Особенности медленных инфекций. 3. Персистенция вирусов. 4. Строение и свойства вируса гепатита А. 5. Источники инфекции, пути распространения, патогенез заболевания, вызываемого вирусом гепатита А. 6. Строение и свойства вируса гепатита В. 7. Источники инфекции пути распространения, патогенез гепатита В. 8. Строение и свойства вирусов гепатита C, D, E. 9. Источники инфекции, пути заражения, роль в патологии человека вирусных гепатитов С, D и Е. 10. Лабораторная диагностика вирусных гепатитов. 11. Профилактика вирусных гепатитов. 12. Строение и свойства вируса СПИДа. 13. Источники инфекции, пути распространения, патогенез, клинические проявления СПИДа. 14. Иммунологическая и вирусологическая диагностика вируса СПИДа. 15. Иммуноферментный метод и его использование для диагностики вирусных заболеваний.

 

Оформление лабораторной тетради.

Записать принцип, схему проведения и этапы ИМФ, зарисовать положительный и отрицательный результаты.

Библиографический список.

Основной.

1. Пяткин К.Д., Кривошеин Ю.С. Микробиология // М.: Медицина, 1980, 512 с.

2. Воробьев А.А., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбаков А.М. Микробиология // М.: Медицина, 1994, 288с.

3. Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б., Микробиология // М.: Медицина, 1983, 512 с.; 1994, 528 с.

4. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология // М.:Медиц. информ. агенство, 2002, 736 с. 

5. Поздеев О.К. Медицинская микробиология // М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001, 768 с.

6. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология // Санкт-Петербург: Спец. Литература, 2000, 591 с.

7. Борисов Л.В., Кузьмин-Соколов Б.Н., Фрейдлин И.С., Федорова З.В. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии // М.: Медицина, 1994, 252 с.

8. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии // Под ред. В.В.Теца.-М.: Медицина, 2002, 352 с.

 

Дополнительный.

1. Медицинская микробиология // Под ред. В.И. Покровского, О.К. Поздеева. – Москва: ГЭОТАР-МЕД, 1998, 200 с.

2. Определитель бактерий Берджи // Под ред. Дж. Хоулта и соавт.. – М.: Мир, в 2-х т., 1997, Т.1, 432 с.; Т.2, 368 с.

3. Букринская А.Г. Вирусология // М.: Медицина, 1986, 336 с.

4. Общая и частная вирусология // Под ред. В.М. Жданова, С.Я. Гайдамович. Руководство в 2-х томах. - М.: Медицина, 1982, Т. 1, 494 с.; T. 2, 320 c.

СОДЕРЖАНИЕ

ЗАНЯТИЕ №1

Тема: Микробиология и ее значение для биоэкологии.

Микробиологическая лаборатория. Методы изучения

микроорганизмов. Морфология микробов ………………………………….3

 

ЗАНЯТИЕ №2

Тема: Структура бактериальной клетки и методы ее

изучения ………………………………………………………………………..6

 

ЗАНЯТИЕ №3

Тема: Особенности морфологии и строения

прокариотических микроорганизмов ………………………………………...9

ЗАНЯТИЕ №4

Тема: Систематика и классификация грибов и простейших.

Общая характеристика и биология эукариотических

микроорганизмов ………………………………………………………………13

 

ЗАНЯТИЕ №5

Тема: Физиология микроорганизмов. Метаболизм и питание

микробов. Питательные среды ………………………………………………..15

 

ЗАНЯТИЕ №6

Тема: Физиология микроорганизмов. Ферменты бактерий.

Антимикробное действие физических факторов.

Методы стерилизации ………………………………………………………….18 

 

ЗАНЯТИЕ№7

Тема: Дыхание микроорганизмов. Выделение чистой культуры

анаэробов. Рост и размножение микробов. Дезинфекция ……………………21

 

ЗАНЯТИЕ №8

Тема: Генетика микроорганизмов. Генетический аппарат

бактериальной клетки. Виды изменчивости микроорганизмов ……………...23

 

ЗАНЯТИЕ №9

Тема: Генетические рекомбинации у бактерий.

Внехромосомные факторы наследственности ………………………………...29

 

ЗАНЯТИЕ №10

Тема: Бактериофаг. Фазы взаимодействия фага с бактериальной

клеткой. Практическое применение явления бактериофагии ………………..31

 

 

ЗАНЯТИЕ №11

Тема: Микроорганизмы окружающей среды и санитарно-

бактериологические методы их обнаружения ………………………………...35

 

ЗАНЯТИЕ №12

Тема: Микроорганизмы организма человека. Микроорганизмы

пищевых продуктов ……………………………………………………………..40

 

 

ЗАНЯТИЕ №13

Тема: Преобразование микроорганизмами соединений углерода …………...44

 

ЗАНЯТИЕ №14

Тема: Биогеохимическая деятельность микроорганизмов.

Превращение микроорганизмами органических и минеральных

соединений азота, серы, железа и фосфора …………………………………...45

 

ЗАНЯТИЕ №15

Тема: Изучение бактерий корневой зоны растений …………………………..48

 

ЗАНЯТИЕ №16

Тема: Вирусы. Особенности строения и жизнедеятельности.

Взаимодействие вируса и клетки. Культивирование вирусов ……………….50

 

ЗАНЯТИЕ №17

Тема: Особенности противовирусного иммунитета. Методы

диагностики вирусных заболеваний …………………………………………...53

 

ЗАНЯТИЕ №18

Тема: ДНК-содержащие вирусы: адено- и герпесвирусы.

РНК-содержащие вирусы семейств ортомиксо- и парамиксовирусов.

Вирус краснухи ………………………………………………………………….56

 

ЗАНЯТИЕ №19

Тема: Вирусы – возбудители медленных инфекций, гепатита, СПИДа …….59

 

Библиографический список …………………………………………………….62