Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Функциональное состояние системы
ФАГОЦИТИРУЮЩИХ КЛЕТОК. ФАГОЦИТАРНАЯ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ Важнейшей характеристикой функции гранулоцитов является оценка их фагоцитарной активности. Ее снижение может быть результатом как недостаточности опсонирующих факторов сыворотки (антител, комплемента), так и дефектов самих клеток (Нарушения двигательной и метаболической активности врожденного или приобретенного характера). Для определения фагоцитарной активности используют стандартные штаммы непатогенных микроорганизмов (например, стафилококки штамма 209, убитые бактериями, или аутофлора больного). Методика определения фагоцитарной активности нейтрофилов (визуальный способ). Необходимые материалы и реактивы: микропипетки или пипетки для взятия крови на СОЭ; пробирки стеклянные (лучше силиконизированные) или из пластика; предметные стекла; микроскоп с иммерсией; термостат; свежеприготовленный раствор 5% цитрата натрия; живая суточная культура микроорганизмов, например стафилококк штамм 209; оптический стандарт мутности с образцами в 5, 10, и 20 ед., соответствующими 0,5 -, 1- и 2-миллиардной взвеси микроорганизмов. В пробирку, содержащую 0,1 мл 5% раствора цитрата натрия, вливают 0,2 мл капиллярной крови и добавляют 0,1 мл 2-миллиардной взвеси микроорганизмов. Инкубируют 30 мин при 37°С. Из взвеси клеток и микроорганизмов делают мазки, оставшуюся взвесь продолжают инкубировать еще в течение 1 ч и снова делают мазки. Мазки фиксируют смесью Никифорова и окрашивают по Романовскому-Гимзе. Под микроскопом просматривают 100 нейтрофилов, определяют количество поглощенных микробов. Оценка фагоцитоза in vitro производится в соответствии фазами реакции: через 30 мин и 2 часа. Поглотительная способность клеток оценивается по двум показателям: процент фагоцитоза, количество фагоцитов на 100 нейтрофилов через 30 мин и 2 часа инкубации (в процентах), ФИ – среднее число микробов на 1 фагоцит через 30 мин и 2 часа инкубации. О последней фазе фагоцитоза – переваривании – судят по коэффициентам процента фагоцитоза и ФИ (отношение соответствующих показателей, изученных через 2 часа контакта, к тем же показателям через 30 мин). Фагоцитоз считается завершенным при коэффициентах менее 1.
НСТ – ТЕСТ Тест с нитросиним тетразолием (НСТ-тест) используется для выявления так называемых активированных гранулоцитов и моноцитов. В основе активации фагоцитов лежит резкое усиление окислительных реакций. К числу индикаторов этого явления относится реакция с нитросиним тетразолием: поглощенный из раствора, он под влиянием окислительных процессов в клетке превращается в нерастворимый формазан. Последний определяется в клетке в виде темно-синих гранул.
Различают спонтанный и стимулированный НСТ-тест. Результаты спонтанного теста указывают на количество активированных клеток в крови больного, например под влиянием инфекции. Результаты стимулированного теста дают представление о способности исследуемых нейтрофилов к активации in vitro. Этот тест следует проводить при сниженном числе спонтанных НСТ-положительных клеток у больного с бактериальной инфекцией, чтобы выявить наличие или отсутствие дефекта окислительного метаболизма. Методика исследования. Необходимые реактивы и материалы: КН 42 0PO 44 0, Na 42 0РО 44 0, NaCI, глюкоза, нитросиний тетразолий, гепарин, метиловый спирт, 1% водный раствор метиленового зеленого (в случае загрязнения синей краски необходимо промывание хлороформом через делительную воронку), микропипетки, предметные стекла, микроскоп с иммерсией. Приготовление раствора:
А. 1% 15 М фосфатного буфера с рН 7,2 с добавлением 0,2% раствора глюкозы и 0,6% раствора натрия хлорида (к 25 мл 1/15 М КН 42 0РО 44 0 добавляют 36 мл 1/15 М раствора Na 42 0НРО 44 0; на 61 4 0 мл буфера нужно 120 мг глюкозы и 370 4 0мг NaCI). Б. 0,1% нитросиний тетразолий в изотоническом растворе натрия хлорида. Для получения красителя необходимы длительное перемешивание и подогревание в горячей воде. Растворы А и Б фильтруют через бумажные фильтры и хранят в холодильнике при температуре 10°С в течение 2 – 4 недель. Непосредственно перед постановкой теста смешивают равные количества растворов А и Б, смесь нагревают до 30 - 37°С. Кровь из пальца больного берут пипеткой, промытой гепарином. В центрифужной или пластиковой пробирке смешивают по 0,1 мл гепаринизированной крови и подогретой смеси. Инкубация 25 мин в термостате при 37°С, затем 10 мин при комнатной температуре. Из верхнего слоя клеточного осадка готовят мазки, высушивают их на воздухе 3 – 5 мин, фиксируют метиловым спиртом, затем окрашивают метиленовым зеленым в течение 10 мин. Препараты просматривают под микроскопом с иммерсией.
Постановка стимулированного НСТ-теста. Гепаринизированмую кровь предварительно инкубируют 25 мин при 37°С со стимулятором (например, 2-миллиардной взвесью стафилококка - штамм 209, над осадочной жидкостью, содержащей лимфокины и др.) в равных объемах. Затем проводят вышеописанный тест. Учет результатов: В клинико-лаборагорной практике при постановке теста восстановления нитросинего тетразолия наиболее широкое распространение получил цитохимический учет результатов, основанный на микроскопическом определении процентного содержания нейтрофилов с гранулами темно-синего цвета формазана в цитоплазме. Обычно анализу подвергают 100 – 200 сегментоядерных нейтрофилов. Показатель индуцированного варианта реакции вычисляют как разницу процентного содержания поглотивших и восстановивших тетразолий клеток после воздействия фактора стимуляции по сравнению с данными, полученными до стимуляции. Для количественной оценки активности теста по степени активности реакции все клетки делят на 4 группы. К нулевой группе относят нейтрофилы без гранул, в первую группу включают клетки с единичными гранулами или те клетки, в которых площадь окраски формазаном занимает до 25 – 30% цитоплазмы (1 степень активности), во вторую группу нейтрофилы, цитоплазма которых на 30 – 70% занята гранулами формазана (II степень активности); в третью - нейтрофилы, до 100% заполненные гранулами независимо от того, контролировались ядра или нет (III степень активности). Определяют число клеток, принадлежащих в зависимости от активности фермента к каждому из типов. Это число умножают на номер (фактор) типа. Сумма полученных произведений представляет показатель реакции. Таким образом, показатель реакции восстановления нитросинего тетразолия можно рассчитать по формуле: Показатель НСТ-теста = 1а + 2б + Зс, где а, б, с - количество клеток соответственно нулевого, 1, 2, 3 типов. Лекция №6
|
||||||
Последнее изменение этой страницы: 2021-12-15; просмотров: 29; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 3.128.199.162 (0.006 с.) |