Методика обстеження пацієнта на віл методом експрес-діагностики

 

Умови проведення діагностики методом швидких тестів:

1. Дослідження проводиться підготовленим медичним персоналом, здійснюється у латексних рукавичках із дотриманням противоепідемічного режиму.

2. У приміщенні, в якому проводиться дослідження за допомогою швидких тестів, недопустима наявність парів окислювачів (перекис водню, гіпохлорид);

3. Неприпустимим є використання компонентів з різних серій діагностичних наборів;

4. Неприпустимим є використання швидких тестів після закінчення терміну їх придатності.

1. Метод дот-блоту або проточний тест

Тести дот-блот дають можливість оцінити результати протягом 5 або 10 хвилин.

У тесті дот-блот антигени пасивно блотуються (адсорбуються) на допоміжні мембрани за рахунок гідрофобної взаємодії, і розміщуються у формі невеликого круга (дот) або лінії.

1) Процедура тестування починається з додавання буферної суміші, яка зволожує міцну підтримуючу мембрану;

2) Потім додається одна або дві краплі сироватки або плазми (можна використовувати кров, отриману з вени або пальця);

3) Після цього, ще додається буферна суміш, а потім кон`югат і субстрат, якщо кон`югат – фермент. Додавання відповідного субстрату дає колір на папері на тому місці (крапка або лінія), де було приєднано антитіло.

4) Додавання декількох реагентів з тимчасовими проміжками (1-2 хвилини) між двома реагентами, або після того, як кожен реагент буде абсорбований через мембрану. Очікування абсорбції утруднює проведення декількох тестів одночасно.

5) Читати результати необхідно з певним часовим інтервалом, оскільки реакції або основний колір можуть змінюватися з певним проміжком часу.

6) У своїй більшості тести дот-блот містять внутрішню контрольну крапку, яка вказує на те, що тест проходить правильно, всі реагенти хороші, і всі компоненти були додані.

7) Тести дот-блоту можуть зберігатися при кімнатній температурі (25°С) протягом щонайменше 6 місяців, кожен тест окремо запакований в наборі.

Метод аглютинуючих швидких тестів

1) Метод, засновані на аглютинації латексних частинок.

2) Метод потребує для постановки реакції від 10 до 60 хвилин і проводяться з плазмою або сироваткою крові.

3) При змішуванні проби пацієнта, що містить антитіла до ВІЛ, з частинками латексу, покритими антигенами до ВІЛ, наступає аглютинація.

4) Реакція читається візуально у вікні як аглютинація протягом 10 хвилин.

4) Позитивним зразком вважається у разі аглютинації латексних частинок в антигені, за наявності антитіл.

5) Про негативний результат свідчить м'яке молочно-біле забарвлення.

У деяких пристроях передбачено посилення візуальних проявів аглютинації за рахунок застосування маленьких трубчастих прозорих касет. Проходження змішаної проби з частинками через звужену частину трубки підсилює аглютинацію і робить її помітнішою.

6) У разі слабо вираженої аглютинації застосовують зчитуючі пристрої, які допомагають зменшити неточність суб'єктивної оцінки результатів.

Метод імуно-хроматографії

Метод вимагає лише одного етапу для проведення тесту, оскільки нітроцелюлозна смужка вже містить і антитіло, і сигнальний реагент.

1) Біологічна проба наноситься на смужку і, змішуючись з сигнальним реактивом, мігрує по її довжині. Мембранні пристрої для концентрації імунного матеріалу містять твердофазний носій і використовують імобілізацію антитіл до ВІЛ на пористій мембрані.

2) Проба проходить через мембрану і адсорбується. На мембрані утворюється помітна пляма або лінія.

3) Позитивна реакція проявляється у вигляді лінії, що виникає в тому місці, де на мембрані був нанесений антиген до ВІЛ. Окрім лінії, що містить антигени до ВІЛ, смужки зазвичай мають контрольну лінію.

4) Результати тесту готові протягом 15 хвилин. Результат після 20 хвилин не приймають до уваги.

5) Наявність видимих чітких ліній в зоні тесту і в контрольній зоні означає позитивну реакцію на ВІЛ.

6) Поява тільки контрольної лінії свідчить про негативний результат. Відсутність контрольної лінії указує на недійсність тесту, аналіз необхідно повторити з новою тест-системою.

Досліджуваний за допомогою швидкого тесту зразок крові, незалежно від отриманого результату, передається в лабораторію діагностики ВІЛ-інфекції для підтвердження діагнозу з використанням ІФА тест-систем.

Алгоритм експрес-тестування

 

Начальник відділу охорони

репродуктивного здоров'я Н.Я. Жилка
Перелік умовних скорочень

3TC – ламівудин АРВ - антиретровірусний АРТ – антиретровірусна терапія ВААРТ – високоактивна антиретровірусна терапія ВІЛ — вірус імунодефіциту людини ВН – вірусне навантаження ВООЗ — Всесвітня організація охорони здоров’я ДКТ – добровільне консультування та тестування ДНК – дезоксирибонуклеїнова кислота ЕКГ — електрокардіограма ЕПКР – елективний плановий кесарів розтин ЗПТ – замісна підтримуюча терапія ІП - інгібітор протеази ІПСШ – інфекції, які передаються статевим шляхом ІФА – імуноферментний аналіз кл/мкл – клітин в мікролітрі крові КР – кесарів розтин ЛЖВ — люди, які живуть з ВІЛ міс — місяць МОЗ – Міністерство охорони хдоров’я НІЗТ - нуклеозидний інгібітор зворотної транскриптази

ННІЗТ - ненуклеозидний інгібітор зворотної транскриптази ПЛР — полімеразна- ланцюгова реакція ПМД – передача ВІЛ від матері до дитини ППМД – профілактика передачі ВІЛ від матері до дитини РНК – рибонуклеїнова кислота СІН – споживачі ін’єкційних наркотиків СНІД – синдром набутого імунодефіциту ТБ – туберкульоз ЦНС – центральна нервова система ABC - абакавір AZT - азидотимідин або зидовудин (ZDV) CD – cluster of differentiation (кластер диференціювання) –молекули, які є на поверхні клітин, та можуть бути ідентифікованими за допомогою моноклональних антитіл CD4 – клітина, що містить на поверхні молекулу CD4 EFV - іфавіренц FTC - емтрицитабін LPV/rtv - комбінований препарат, що містить лопінавір, посилений ритонавіром NFV — нелфінавір TDF - тенофовір