Окончание работы (микроскопирования)

1. Приподнимите тубус, снимите препарат.

2. Вытрите масло с объектива чистой тряпочкой.

3. Опустите конденсор.

4. Переведите револьвер в нейтральное положение.

5. Опустите тубус до упора.

6. Поставьте микроскоп в шкаф.

 

 

Занятие № 1

МИКРОБИОЛОГИЯ КАК НАУКА
Бактериоскопический метод исследования. Простые методы окраски

Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

1. Приготовление мазков и окраска их с применением простого метода.

2. Подготовка предметного стекла к работе (обезжиривание).

3. Приготовление мазка из агаровой культуры стафилококка:

a) окраска приготовленного мазка метиленовым синим;

b) микроскопия под иммерсией;

c) зарисовка препарата в лабораторную тетрадь.

4. Приготовление мазка из бульонной культуры кишечной палочки:

a) окраска приготовленного мазка водным фуксином;

b) микроскопия под иммерсией;

c) зарисовка препарата в лабораторную тетрадь.

Приготовление мазка

1. На обезжиренное предметное стекло нанесите петлей каплю физиологического раствора.

2. В правую руку возьмите бактериологическую петлю.

3. Простерилизуйте петлю:

вносим в пламя горелки – строго вертикально (прокаливам до раскаливания);

затем переводим в горизонтальное положение и проносим петлю через пламя, перемещая ее по мере раскаливания рабочей части;

проводим петледержателя несколько раз через пламя.

4. В левую руку возьмите пробирку с культурой.

5. Мизинцем правой руки обхватите пробку и откройте пробирку.

6. Пронесите открытую часть пробирки через пламя спиртовки, прожигая края.

7. Введите петлю в пробирку, охладите ее, касаясь изнутри стенок пробирки.

8. Снимите петлей небольшое количество культуры с поверхности агара (либо сделайте забор материала из жидкой среды).

9. Аккуратно извлеките петлю из пробирки.

10. Пронесите открытую часть пробирки через пламя спиртовки, прожигая края, и закройте пробирку пробкой и поставьте в штатив.

11. Петлю погрузите в каплю физраствора, равномерно распределите по стеклу, делая тонкий мазок в виде небольшого круга (d»2см). Если культура выращена в жидкой среде, физраствор на предметное стекло не наносят.

12. Простерилизуйте петлю в пламени и поставьте в штатив.

13. После полного высушивания мазок фиксируют.

 

Простые методы окраски

1. После охлаждения предметного стекла нанесите 1-2 капли водного раствора фуксина (для окраски кишечной палочки) или метиленового синего (для окраски стафилококка) на фиксированный мазок (чтобы он был полностью покрыт краской).

2. Окрашивайте в течение 2-3 минут.

3. Смойте краску водой.

4. Просушите препарат фильтровальной бумагой.

Водный раствор фуксина окрашивает микроорганизмы в красный цвет.

Раствор метиленового синего окрашивает микроорганизмы в синий цвет.

 

 

Занятие № 2

МОРФОЛОГИЯ И УЛЬТРАСТРУКТУРА БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ

Окраска по Граму

 

Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

1. Приготовление мазка из смеси культур стафилококка и кишечной палочки (см. Занятие №1).

2. Окраска по Граму, микроскопия и зарисовка препарата.

Сложные методы окраски

Алгоритм окраски по Граму

1. На зафиксированный мазок поместите сухую фильтровальную бумагу, пропитанную раствором генцианвиолета.

2. Нанесите на нее 2-3 капли воды так, чтобы бумага хорошо намокла и плотно прилегала к поверхности предметного стекла.

3. Через 2 мин снимите фильтровальную бумагу, слейте остатки красителя в кювету.

4. Нанесите раствор Люголя на 1 мин, слейте в кювету.

5. Обесцвечивание – нанесите на мазок несколько капель спирта на 20 сек.

6. Тщательно промойте препарат водой.

7. Нанесите водный раствор фуксина на 2 мин.

8. Промойте препарат водой.

9. Просушите фильтровальной бумагой.

Грамположительные микроорганизмы окрашиваются в фиолетовый цвет.

Грамотрицательные микроорганизмы окрашиваются в красный цвет.

 

Занятие № 3

МОРФОЛОГИЯ И УЛЬТРАСТРУКТУРА БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ (ПРОДОЛЖЕНИЕ). ОСОБЕННОСТИ МОРФОЛОГИИ АКТИНОМИЦЕТОВ, СПИРОХЕТ, РИККЕТСИЙ, ХЛАМИДИЙ, МИКОПЛАЗМ

Окраска по Цилю-Нильсену

Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

1. Приготовление мазка из культуры бацилл.

2. Окраска мазка по Цилю-Нильсену, микроскопия и зарисовка препарата.

3. Микроскопия мазков из культуры клебсиелл, окрашенных по Бурри-Гинсу.

4. Микроскопия мазков из культуры стрептомицетов, окрашенных фуксином.

5. Микроскопия мазков из культуры микобактерий, окрашенных по Цилю-Нильсену.

 

Сложные методы окраски

Алгоритм окраски по Цилю-Нильсену

1. На фиксированный мазок поместите сухую фильтровальную бумагу.

2. Нанесите на бумагу 3-4 капли карболового фуксина Циля.

3. Удерживая предметное стекло рукой за один из концов, нагрейте препарат над пламенем спиртовки до появления пара (повторите эту процедуру 3 раза).

4. После охлаждения стекла снимите фильтровальную бумагу и промойте мазок водой.

5. Погрузите препарат аккуратно в 1% раствор серной кислоты (для окраски спор) - три раза по 1 секунде.

6. Обильно промойте препарат водой.

7. Нанесите на мазок 2-3 капли водного раствора метиленового синего на 3 мин.

8. Промойте препарат водой. Просушите фильтровальной бумагой.

Вегетативная клетка бацилл окрашивается в синий цвет, споры - в красный.

Занятие № 4

ФИЗИОЛОГИЯ ПРОКАРИОТ

Окраска по Нейссеру

Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

1. Приготовление мазка из культуры коринебактерий.

2. Окраска по Нейссеру, микроскопия и зарисовка препарата.

 

Сложные методы окраски

Алгоритм окраски по Нейссеру

1. На фиксированный мазок нанесите 2-3 капли ацетата метиленового синего Нейссера. Окрашивайте от 3 до 5 минут. Слейте краситель (можно промыть водой).

2. Нанесите раствор Люголя на мазок на 30 сек. Слейте краситель.

3. Промойте препарат водой.

4. Для докрашивания на мазок нанесите раствор везувина на 5 мин.

5. Промойте препарат водой. Просушите фильтровальной бумагой.

Зерна волютина окрашиваются в темно-синий цвет (выглядят коричневыми на фоне желтой цитоплазмы).

Цитоплазма бактерий окрашивается в желтый цвет.

 

Занятие № 5