Изучение бактериальных колоний

 

Колонию, выросшую на агаре в чашке Петри, изучают сна­чала невооруженным глазом в проходящем свете. Отмечают об­щий характер роста и число колоний (мало, много, несосчиты­ваемое количество и т.д.), подчеркивая при этом специальными чернилами или карандашом (со стороны дна чашки) колонии, которые отличаются между собой.

Отмечают величину колонии (крупная, мелкая, точечная), измеряя ее окулярным микрометром и переводя в миллиметры: точечные колонии – меньше 1 мм в диаметре, видимые простым глазом; мелкие – в 1-2 мм, средние – в 2-4 мм, крупные – в 4-6 мм и более в поперечнике.

Колония может иметь правильную круглую форму; не­правильную – амебовидную, розеткообразную, ризоидную или корневидную. Колонии могут быть заметно приподнятыми над средой – выпуклыми или плоскими, плосковыпуклыми; куполо­образными с приподнятой серединой или вдавлением в центре. Отмечают характер поверхности: матовая или блестящая, глад­кая или шероховатая.

Колонии могут быть с ровными краями; волнистыми (с не­глубокими пологими вдавлениями), дольчатыми – глубоко из­резанными, круглозубчатыми с небольшими неглубокими зуб­цами; эрозированными с неровными острыми зубцами, бахромчатыми с тонкими, часто изогнутыми выростами; в виде «локонов».

Структуру колоний изучают под лупой или микроскопом со слабым увеличением, сухой системой при суженной диафрагме или несколько спущенном конденсоре, при этом чашку поме­щают на столик дном вверх и, передвигая ее, отмечают колонии различной структуры.

По цвету колонии могут быть очень разнообразными. Чаще они встречаются совершенно бесцветные, иногда белые, молочно-мутные, голубоватые, желтые, золотистые, золотисто-желтые, оранжевые, лимонно-желтые, сиреневые, красные и чер­ные. Иногда в толще колонии развиваются небольшие образова­ния сферической или неправильной формы (дочерние колонии). Они отличаются от основной колонии особой способностью преломлять свет. Механизм образования дочерних колоний не выяснен, однако отмечено, что по мере их роста материнская ко­лония лизируется.

Консистенцию колонии определяют при прикосновении к ней петлей.

Структура и форма колоний, так же как и другие признаки, могут изменяться. Хорошо изучены S- и R-формы. S-формы круглые, гладкие, выпуклые, с ровными краями, имеют блестящую поверхность. Шероховатые R-колонии неправильной формы, с зазубренными краями и шероховатой поверхностью.

 

Выделение чистой культуры бактерий аэробов

 

Чистой культурой бактерий называют видимый рост од­ного вида микробов, полученных из одной клетки.

Выделение чистой культуры является основой бактериоло­гической работы, так как в практической деятельности врачу-бактериологу приходится иметь дело с материалом, содержащим смесь микробов (гной, испражнения и т.п.). Идентификация вида возможна только тогда, когда бактерии получены в чистом, кодированном виде.

Выделение чистой культуры лежит в основе бактериологи­ческого исследования – важнейшего метода лабораторной ди­агностики инфекционных заболеваний.

Цель – выделение культуры и ее идентификация, что позво­ляет правильно поставить диагноз инфекционного заболевания.

Основная задача при выделении чистой культуры – полу­чение отдельных колоний, т.е. скопления микробов одного вида как результата размножения одной клетки. Простейшим способом разъединения бактерий является последовательное растирание исследуемого материала стеклянным шпателем или бактериальной пипеткой по поверхности мясопептонного агара в чашках Петри.

Самостоятельная работа студента

На практическом занятии

Последовательность действий (этапы)	Способы действия (ориентиры)
I. Изучение культуральных свойств бактерий	1. Познакомиться с характером роста бактерий на жидких и плотных пита­тельных средах (демонстрация), опи­сать в дневнике. 2. Изучить характер роста пигментных бактерий по готовым посевам и опи­сать в дневнике.
II. Выделение чистой культуры аэробов (I этап)	1. Ознакомиться с методом получения изолированных колоний (демонстрация преподавателя). 2. Приготовить мазок из смеси бакте­рий, окрасить по Граму, микроскопировать, зарисовать и сделать вывод, к какому семейству принадлежат бакте­рии (мазок обязательно показать пре­подавателю). 3. Произвести посев смеси бактерий на чашку с питательной средой, обосновать цель высева.

 

Различные группы микробов в процессе метаболизма спо­собны использовать разные типы доноров и акцепторов водоро­да. Н-донорами могут быть либо органические, либо неоргани­ческие вещества, Н-акцепторами - молекулярный кислород, неорганические и органические вещества. Обычный процесс окис­ления и восстановления называется «дыханием», если переход электронов происходит в мембранной респираторной цепи тран­спортировки электронов. При этом образуется АТФ. При аэробном дыхании конечным акцептором водорода является молеку­лярный кислород, при анаэробном – другой субстрат с относи­тельно высоким окислительно-восстановительным потенциалом (например, ионы нитрата, сульфата или фумарата, что зависит от микроорганизма).

Молекулярный кислород явился фактором, разделившим живые существа на две неравные части: анаэробы (их немного) и аэробы (огромное количество видов).

Тип биологического окисления, как и отношение к окраске по Граму, позволяет дифференцировать различные микроорганизмы. По этому при­знаку можно выделить, по крайней мере, три группы бактерий.

Первая – облигатные аэробы. Они способны получать энергию только путем дыха­ния и поэтому нуждаются в кислороде как акцепторе протонов и электро­нов в окислительно-восстановительных процессах. Таким образом, дыхание – биологический процесс окисления различных органических ве­ществ, при котором происходит перенос протонов и электронов от суб­страта (донора) к кислороду (акцептору) и образование молекул АТФ. Органеллами дыхания у бактерий являются производные цитоплазматической мембраны – мезосомы, содержащие специальные дыхательные ферменты типа цитохромоксидаз.

Вторая группа – облигатные анаэробы – бактерии, способные расти только в среде, лишенной кислорода (кислород для них токсичен). Для них как тип окислительно-восстановительных процессов характерна фермента­ция,при которой происходит перенос протонов и электронов от субстрата-донора к субстрату-акцептору.

Третья группа – факультативные анаэробы – бактерии, способные расти как при наличии, так и в отсутствие кислорода. Среди них следует различать бактерии аэротолерантные, которые могут расти в присутствии атмосферно­го кислорода, но не способны его использовать, так как получают энергию исключительно с помощью брожения (например, молочнокислые бактерии), и факультативно-анаэробные бактерии (например, энтеробактерии), которые в отсутствие кислорода способны перестраиваться на брожение.